飼料及其原料中尿素檢測方法的研究進展

飼料及其原料中尿素檢測方法的爭論進展尿素是動物蛋白質(zhì)補充料中應(yīng)用的主要非蛋白氮物質(zhì)。使用尿素一方面可以補充蛋白質(zhì)飼料的缺乏；另一方面還能削減魚粉等蛋白質(zhì)類飼料的使用量，降低飼養(yǎng)本錢?；趧游锢媚蛩氐臋C理，一般主要將尿素用于反芻動物的養(yǎng)殖，且有較為嚴格的劑量添加要求，通常尿素在奶牛和羊精料補充料中的添加量不超過1.0%，肉精料補充料中添加量不超過1.5%〔楊紅東等，2023〕。 當前報道中，關(guān)于尿素的檢測方法較多，但主要應(yīng)用在臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域。關(guān)于飼料及其原料中尿素的檢測方法主要集中在對二甲胺基苯甲醛法(DMAB)的應(yīng)用與改進。除此之外前關(guān)于飼料及其原料中尿素檢測方法的爭論進展綜述，以期為進一步完善和統(tǒng)一飼料中尿素的檢測標準供給參考。1DMAB目前多數(shù)文章及標準中均使用DMAB法檢測飼料或原料中的尿素，例如，SC/T3510-1996、GB/T19164-2023、AOAC941-2023、IS06654-1991等。該方法的中尿素含量成正比，因此可以通過測定在肯定波長下反響溶液的吸光值來定量溶液中的尿素濃度，該反響需要在酸性條件下進展。DMAB試劑的反響。綜合各方文獻，樣品前處理所承受的方法根本一樣，即使用木炭作為吸附劑吸取飼料溶液中的色素，防止溶液渾濁對后續(xù)反響吸光值的測定產(chǎn)生干擾；利用乙酸鋅和亞鐵氰化鉀反響生成亞鐵氰酸鋅來共沉淀樣品中的蛋白等潛在干擾物20min可過濾，而武金鳳等(2023)報道，應(yīng)用此方法處理魚粉樣品時，為了使尿素完全提ISO(1991)、崔淑文和馬車覆(1993)的方法根本一樣。依據(jù)筆者的閱歷，從試驗結(jié)果的牢靠性來考慮，實際樣品測定中應(yīng)用先振蕩后靜置的操作過程能夠較好保證測定結(jié)果的準確性，削減可能由于提取引起的誤差。樣品經(jīng)過前處理后，即可從中取適量上清液參加試管中與肯定量和反響溫度，其中取樣量與樣品中的尿素濃度和反響體系的測定范圍有關(guān)。翟毓10min，420nm(1993)報道，魚粉樣品經(jīng)5mLDMAB25℃水10min420nm(2023)mg510mL25mL5mLDMAB溶液，用水定容至刻度后混勻放置20min,試驗結(jié)果說明，反響溶液在25℃水20min，測定結(jié)果無顯著性差異。楊珩和吳玉生(1997)還提出了一種簡潔、快速的試紙條定性、半定量測定法，10%2%DMAB〕，2rain條顏色的變化即可定性溶液中尿素的有無〔試紙條呈黃色即為尿素陽性〕，其檢出樣品溶液中尿素的半定量。420-436nm5mL(1998)指出。試劑空白吸取程度隨測定波長的增大而下降，同樣波長下樣品吸光值的變化440nm加量變化而引起的誤差，從武金鳳等(2023)報告中的反響溶液掃描圖譜也可以看到波長為420~440nm時，吸光值無顯著性變化，因此，本方法測定飼料樣品的進一步試驗中可以探討在這兩個波長下試劑吸取有無顯著性差異，以確定反響溶液的最適測定波長。甲酚紅法0.1%pH7.2~8.8〔黃色變?yōu)榧t色〕，此顏色變化通過肉眼即能明顯區(qū)分。應(yīng)用甲酚紅法測定飼料中尿素的主要原理是尿素在脲酶水解作用下產(chǎn)氨而使溶來定性半定量溶液中尿素的有無和含量。當前爭論全都認為該方法具有簡潔、快速、準確、靈敏等優(yōu)勢，因而可以在樣(1990)3030s0.01%，與購置商品化脲酶相比具有明顯的經(jīng)濟優(yōu)勢。在《飼料顯微鏡檢與質(zhì)量掌握手冊》一書中，作者推舉測定樣品時同時測定一系列尿素標準溶液(0~5%10-12min量樣品中的尿素濃度。孟丹勝(1994)具體介紹了應(yīng)用甲酚紅檢測飼料中尿素含量的結(jié)果假陽性和假陰性的排解。從應(yīng)用該方法檢測血清尿素的報道來看，臨床爭論中已經(jīng)開頭將甲酚紅法用于血清尿素的定量測定。鄧福貴和李斌(1997)報道，以甲酚紅為指示劑酶法測定血清572nm;5min2hpH度變化對反響結(jié)果不會產(chǎn)生影響，與酶偶聯(lián)速率法同時測定臨床樣品后所得試驗結(jié)果具有較高的相關(guān)性，作者認為，應(yīng)用甲酚紅法測定血清尿素的靈敏度要明顯高于鄰甲酚酞絡(luò)合劑和甲基麝香草酚藍。依據(jù)上述試驗結(jié)果分析，在目前該方法已經(jīng)可DMAB品前處理過程相結(jié)合，以定量樣品中的尿素。二乙酰肟法1939Fearon反響。該反響初始為尿素與二乙酰反響，但由于二乙酰溶液不穩(wěn)定，所以目前多使用二乙酰肟作為反響根底試劑。其根本反響原理為，二乙酰肟首先在酸性條件下解離為二乙酰和羥胺，然后二乙酰與尿素在加熱的酸性條件下形成紅色二嗪衍生物。此反響產(chǎn)物顏色深淺程度與樣品溶液中尿素含量呈正比，因此可以通過測定特定波長下反響溶液吸光值來定量溶液中的尿素。目前爭論已經(jīng)證明向試劑中添加肯定濃度硫胺脲、安替比林和金屬離子等可以提高反響溶液和試劑穩(wěn)定性、增加反響靈敏度等。全都，造成了反響產(chǎn)物的多樣性，主要表現(xiàn)在各方法的最適測定波長均不一樣，而且目前也少見關(guān)于不同試劑組成方法間測定結(jié)果相關(guān)性的爭論，所以各報道間均無較好的可比性。許瑾和才紹河(200l)報道，將適當處理后的樣品與二乙酰肟和硫胺500nm利(2023)認為，處理過的樣品溶液與二乙酰肟、硫脲和硫酸鎘溶液混合后，于沸水540nm(OD)值。羅假設(shè)榮(2023)應(yīng)用該法測定淀粉中尿素含量后指出，樣品與二乙酰肟和安替比林的反響460nm．460nm揮該方法特異性強等的優(yōu)勢。NISNIS90的優(yōu)勢是分析操作簡潔、快速。依據(jù)美國材料與試驗協(xié)會(ASTMNIS長為780-2526nmNIS(NIRS)分析技術(shù)。當前飼料領(lǐng)域內(nèi)已有很多關(guān)于應(yīng)用該方法檢測飼料養(yǎng)分成分或進展飼料品質(zhì)掌握的爭論報道，但相關(guān)尿素檢測的報道并不多見。Gonz61ez-MartlnHerndndez-Hi-eHo(2023)NIRS(FossNIRSystem5000)，首先建立尿素、縮二脲和禽類排泄物的判別偏最小二乘法(DPLS)模型，然后96.9%、100%和100%，而承受改進偏最小二乘法(MPLS)計算所得到的各物質(zhì)濃度與添加濃度間的校正相關(guān)(SEP)0.9900.28%0.9910.29%、批量苜蓿樣品中的尿素、縮二脲及禽類排泄物。部門，能極大地提高工作效率，該方法目前的主要缺陷是儀器價格居高不下及樣品檢測模型的缺少，因此后續(xù)工作中尚需進一步加大對該方法的爭論力度，努力降低本錢，建立適用于不同地區(qū)和樣品的檢測模型，從而充分發(fā)揮該方法的優(yōu)勢。酶解波氏法脲酶又稱尿素酰胺水解酶，相對分子質(zhì)量為120230-130000．廣泛存在于豆類植物籽實、土壤及動物消化道內(nèi)，能高度特異性水解尿素形成氨和二氧化碳。酶解波氏法原理為首先利用脲酶特異性分解樣品溶液中的尿素形成氨和二氧化碳，在堿性條件下，氨與次氯酸鹽反響形成氯化胺，氯化胺再與反響溶液中的苯酚和次氯酸鹽反響形成奎諾氯胺，最終奎諾氯胺與溶液中的其他苯酚分子反響形成藍色的吲哚630nm峰，且反響溶液顏色深度的變化與尿素含量成正比，因此可以通過測定反響溶液吸雖然目前應(yīng)用該方法測定飼料中尿素的爭論很少，但臨床醫(yī)學爭論中已經(jīng)證明1983)爭論ConwayDMAB(EUConway飼料和穎青貯料中的尿素，該方法具有簡潔、快速、價廉和可用于自動化分析等特點。的方法。(2023)在高效液相色譜(HPLC)中承受甲醇一乙酸體系流淌相對混合飼料樣品中的尿素進展分析，結(jié)果覺察該方法具有良好的線性，其加標回收率為95%-104%、相對標準偏差(RSD)2.7%。小結(jié)綜合分析上面幾種方法，依據(jù)測定結(jié)果分析，可以分為定性和定