月季的花藥培養(yǎng) 課件

月季的花藥培養(yǎng)（一）被子植物的花粉發(fā)育花粉囊花粉

花粉是由

經(jīng)過(guò)

而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞?；ǚ勰讣?xì)胞（小孢子母細(xì)胞）減數(shù)分裂1.來(lái)源：2.形成過(guò)程花粉母細(xì)胞（小孢子母細(xì)胞）減數(shù)分裂4個(gè)小孢子（小孢子四分體時(shí)期）（單核期）單核靠邊期單核居中期彼此分離有絲分裂2個(gè)精子有絲分裂花粉管細(xì)胞核生殖細(xì)胞核生殖細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞（雙核期）有絲分裂

在正常情況下，一個(gè)小孢子母細(xì)胞可以產(chǎn)生

個(gè)精子。84個(gè)小孢子減分有分4個(gè)花粉管細(xì)胞核4個(gè)生殖細(xì)胞核有分8個(gè)精子1花粉母細(xì)胞4個(gè)營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞4個(gè)生殖細(xì)胞

兩個(gè)精子和一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核的基因型

。相同①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣的花粉在成熟時(shí)，含有一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核和兩個(gè)精子。一個(gè)成熟的花粉粒，有兩種情況：小孢子母細(xì)胞4個(gè)小孢子四分體時(shí)期1個(gè)小孢子單核居中期1個(gè)小孢子單核靠邊期花粉粒雙核期花粉粒①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化愈傷組織花藥中的花粉脫分化分化叢芽再分化叢芽誘導(dǎo)生根（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑

這兩種途徑的區(qū)別主要取決于培養(yǎng)基中

的種類(lèi)及其

的配比。

濃度激素

在組織培養(yǎng)過(guò)程中，某些細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)（胚芽、胚根、胚軸等結(jié)構(gòu)完整），發(fā)育過(guò)程亦與合子胚類(lèi)似，被稱(chēng)為胚狀體?；ǚ壑仓辏杭磫伪扼w植株胚狀體：（體細(xì)胞胚）（花粉胚）三影響花藥培養(yǎng)的因素花期早期；單核居中期與靠邊期之間培養(yǎng)基的組成材料的選擇親本生長(zhǎng)條件、材料低溫處理、接種密度等適宜的培養(yǎng)條件等 ①?gòu)幕ㄋ巵?lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇（初花期、盛花期、晚花期）的花藥； ②從花粉來(lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇（四分體期、單核期、雙核期、萌發(fā)期）的花粉； ③從花蕾來(lái)看，應(yīng)當(dāng)選擇（完全未開(kāi)放、略微開(kāi)放、完全盛開(kāi)）的花蕾?！妓伎肌綖槭裁椿ò晁蓜?dòng)會(huì)給材料的消毒帶來(lái)困難？親本植株的生理狀況

答：花瓣松動(dòng)后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來(lái)困難。（一）材料的選取實(shí)驗(yàn)操作1、選擇花藥時(shí)，一般通過(guò)鏡檢來(lái)確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。2、確定花粉發(fā)育時(shí)期最常用方法：醋酸洋紅法；焙花青－鉻礬法（藍(lán)黑色）二、材料的消毒：花蕾（70％酒精）大約30s（無(wú)菌水）清洗（無(wú)菌吸水紙）吸干水分（1％氯化汞溶液）2～4min（無(wú)菌水）沖洗

月季花蕾的消毒與菊花外植體的消毒相比較，二者有何不同？

在酒精消毒前，花藥不需要預(yù)先用流水沖洗、洗衣粉洗滌和軟刷刷洗實(shí)驗(yàn)操作（三）接種和培養(yǎng)在無(wú)菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥②要徹底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成1、剝離花藥①勿損傷花藥，否則接種后，容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織注意：2、接種3、培養(yǎng)①培養(yǎng)條件：愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上溫度光照②培養(yǎng)：4、鑒定和篩選染色體倍性的變化胚狀體在花藥開(kāi)裂后盡快將幼小植株分開(kāi)，分別轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上每瓶接種花藥7-10個(gè)為何花粉植株常出現(xiàn)染色體數(shù)目的變化？花粉細(xì)胞的融合接種花粉過(guò)程中混有小孢子母細(xì)胞在材料的低溫處理時(shí)抑制了紡錘體的形成雙核期時(shí)，生殖細(xì)胞核和花粉管細(xì)胞核并沒(méi)有形成兩個(gè)細(xì)胞，而是兩個(gè)核發(fā)生了融合課題成果評(píng)價(jià)選材是否恰當(dāng)

選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。應(yīng)學(xué)會(huì)通過(guò)顯微鏡觀(guān)察處于適宜發(fā)育期的花粉。無(wú)菌技術(shù)是否過(guò)關(guān)

如果出現(xiàn)了污染現(xiàn)象，說(shuō)明某些操作步驟，如培養(yǎng)基滅菌、花蕾消毒或接種等有問(wèn)題。接種是否成功

如果接種的花藥長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體，花藥培養(yǎng)的第一步就成功了。要適時(shí)轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基，以便愈傷組織或胚狀體進(jìn)一步分化成再生植株。１）花藥培養(yǎng)的選材非常重要，需事先摸索時(shí)期適宜的花蕾，２）花藥裂開(kāi)后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時(shí)更換培養(yǎng)基，對(duì)培養(yǎng)基配方的要求更為嚴(yán)格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加。植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同相同之處是：培養(yǎng)基配制方法、無(wú)菌技術(shù)及接種操作等基本相同兩者不同之處在于：?jiǎn)栴}探究

被子植物的花粉發(fā)育過(guò)程中