液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法

液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題及處理方法一、HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法1．樣品量不足，解決辦法為增加樣品量2．樣品未從柱子中流出?？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子3．樣品與檢測(cè)器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器4．檢測(cè)器衰減太多。調(diào)整衰減即可。5．檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)6．檢測(cè)器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。7．檢測(cè)池中有氣泡。解決辦法為排氣。8．記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。9．流動(dòng)相流量不合適。調(diào)整流速即可。10．檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線(xiàn)。解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線(xiàn)。二、為什么HPLC柱柱壓過(guò)高柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶(hù)最常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題，您可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因。拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問(wèn)題，若柱壓仍高，再檢查；2．把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；3．將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；4．更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說(shuō)明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請(qǐng)與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線(xiàn)過(guò)濾器便可避免柱壓過(guò)高的問(wèn)題。板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。

5．存在干擾峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子.三、如何解決HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間發(fā)生漂移或急速變化1．溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定2．流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等3．柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡快速變化現(xiàn)象4.流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定5．泵中有氣泡，可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。6．流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合四、HPLC儀器問(wèn)題1、HPLC泵壓明顯的偏高的可能的原因？答：流速設(shè)定過(guò)高；流動(dòng)相或進(jìn)樣中有機(jī)械雜質(zhì)，造成保護(hù)柱、柱前篩板或在線(xiàn)過(guò)濾器阻塞；流動(dòng)相粘度過(guò)大；柱溫過(guò)低；緩沖鹽結(jié)晶；壓力傳感器故障。2、基線(xiàn)不穩(wěn)，上下波動(dòng)或漂移的原因及如何解決？答：a.流動(dòng)相有溶解氣體；用超聲波脫氣15-30分鐘或用充氦氣脫氣；b.單向閥堵塞；取下單向閥，用超聲波在純水中超20分鐘左右，去處堵塞物；c.泵密封損壞，造成壓力波動(dòng)；更換泵密封；d.系統(tǒng)存在漏液點(diǎn)；確定漏液位置并維修；e.流通池有臟物或雜質(zhì)；清洗流通池；f.柱后產(chǎn)生氣泡；流通池出液口加負(fù)壓調(diào)整器；g.檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在最大吸收波長(zhǎng)處；將波長(zhǎng)調(diào)整至最大吸收波長(zhǎng)處；h.柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)；用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。3、接頭處為何經(jīng)常漏液，如何處理？答：接頭沒(méi)有擰緊；擰松后再緊，手緊接頭以手勁為限，不要使用工具，不銹鋼接頭先用手?jǐn)Q緊，

再用專(zhuān)用扳手緊1/4-1/2圈，注意接頭中的管路一定要通到底，否則會(huì)留下死體積。接頭被污染

或磨損；建議更換接頭。接頭不匹配，建議使用同一品牌的配件。4、進(jìn)樣閥漏液是如何造成的？答：a.轉(zhuǎn)子密封損壞；更換轉(zhuǎn)子密封；b.定量環(huán)阻塞；清洗或更換定量環(huán)；c.進(jìn)樣口密封松動(dòng)；調(diào)整松緊度；d.進(jìn)樣針頭尺寸不合適，一般是過(guò)短；使用恰當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣針（注意針頭形狀）；e.廢液管中產(chǎn)生虹吸；清空廢液管。五、譜圖問(wèn)題1、造成峰分叉的原因是什么及如何消除？答：保護(hù)柱或分析柱污染；取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來(lái)清洗。如果問(wèn)題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。如果?wèn)題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。樣品溶劑不溶于流動(dòng)相；改變樣品溶劑，如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。2、K'值增加時(shí)，拖尾更嚴(yán)重的原因及如何消除？答：原因：反相模式，二級(jí)保留效應(yīng)；消除：a.加入三乙胺（或堿性樣品）；b.加入乙酸（或酸性樣品）；c.加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）；d.更換一支柱子。3、保留時(shí)間的波動(dòng)有幾種可能的原因？答：溫控不當(dāng)；調(diào)節(jié)好柱溫。流動(dòng)相組分變化；防止流動(dòng)相蒸發(fā)、反應(yīng)等，做梯度時(shí)尤其要注意流動(dòng)相混合的均勻。色譜柱沒(méi)有平衡；在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱。六、HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法1．樣品量不足，解決辦法為增加樣品量；2．樣品未從柱子中流出?？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子；3．樣品與檢測(cè)器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器；4．檢測(cè)器衰減太多。調(diào)整衰減即可；5．檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)；6．檢測(cè)器池窗污染。解決辦法