生物化學實訓教案

學實訓教案天津開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院2007——2008學年度第一學期教案（實踐課）工學院生物技術(shù)系（部）生物專業(yè)06年級課程生物化學實驗班級生物061~2姓名張沖實踐課教案首頁課題名稱生物化學實驗課程類型實驗課課時（或單元）4課時實驗課類型生物化學實踐教材（名稱、生物化學實驗講義（自編）作者、出版社）教學場所生物實驗室接受實踐教學單位性質(zhì)與特色教學目的學習柱色譜的原理和操作方法重點、難點分析實驗原理與操作技法實踐分組要求3~4人一組，以個人為單位撰寫實驗報告感謝閱讀組長條件與職責管理本組的實驗器材和設(shè)備，組織組員進行實驗感謝閱讀25250精品文檔放心下載實踐課所需儀器滴管，中性氧化鋁和堿性氧化鋁（100—200目，干燥失精品文檔放心下載重不大于1%）每組各1595%乙醇和蒸餾水，謝謝閱讀設(shè)備與條件1毫升每組，濾紙，玻璃棉或脫脂棉實驗題目日期實驗?zāi)康膶嵺`報告（總結(jié)）基本原理要求實驗步驟實驗結(jié)果與分析思考題學生對基本理論的理解一般，操作能力有待進一步提高。小結(jié)說明：由于該教案涵蓋較廣，因此不是各欄必須填寫教案紙實驗一柱色譜法分離物質(zhì)原理一、目的要求學習柱色譜的原理和操作方法二、基本原理柱色譜法可看作是一種面—液色普法，它是通過色譜柱進行分離的。色譜柱是一根長謝謝閱讀約20厘米，內(nèi)徑為2厘米，下端具有一個活塞或具有一橡皮管帶有彈簧夾的玻璃管，精品文檔放心下載謝謝閱讀液體樣品從柱頂加入，被吸附在柱的上端，然后從分液漏斗加入洗脫溶劑（流動相）精品文檔放心下載如丙酮、石油醚等，由于吸附劑對各組分的吸附能力不同，被吸附較弱的組分隨溶劑精品文檔放心下載精品文檔放心下載如各組分為不同顏色的物質(zhì)，則可以觀察到譜帶。如為無色物質(zhì)，則不可直接觀察到謝謝閱讀譜帶，有時有的物質(zhì)在紫外光照射下發(fā)出熒光，有時也可以分段收集一定體積的流出精品文檔放心下載液，再用薄層色譜或其他方法檢定。三、實驗內(nèi)容柱色譜分離有色物質(zhì)四、儀器和試劑色譜柱（25分液漏斗（250燒杯，滴管，中性氧化鋁和堿性氧化鋁（100—200目，干燥失重不大于1%15精品文檔放心下載95%乙醇和蒸餾水，樣品：亞甲基藍，熒光黃，1毫升每組，濾紙，玻璃棉或脫脂棉開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙五、實驗步驟1、裝柱將已經(jīng)洗干凈并烘干的色譜柱固定在鐵架臺上，在柱子的底部鋪放一點玻璃感謝閱讀精品文檔放心下載謝謝閱讀部約3—4厘米即可。然后在柱頂加入柱徑大小的濾紙或加入5毫升的砂層。感謝閱讀0.5—1.0厘米高的溶劑以免柱子感謝閱讀感謝閱讀在本實驗中在層析柱底端放一點棉花，加入0.5厘米的石英砂，關(guān)閉閥門加精品文檔放心下載入10毫升95%5克氧化鋁，開塞保持流速為每秒一滴，使氧化鋁均勻感謝閱讀1厘米石英砂。感謝閱讀2、上樣將色譜柱中的溶劑從下端放出，直到液面與石英砂表面一致時，停止放出。精品文檔放心下載用滴管或玻璃棒引流將樣品緩慢的注入柱中。注意不要把氧化鋁沖浮起來。待樣精品文檔放心下載品加完后，放開柱子的活塞使液體流出，直到液面與石英砂表面一致時，停止放感謝閱讀出，用0.5毫升乙醇清洗壁上余樣；放開柱子的活塞使液體流出，直到液面與石精品文檔放心下載英砂表面一致時，停止放出，再用0.5毫升乙醇清洗壁上余樣；放開柱子的活塞精品文檔放心下載使液體流出，直到液面與石英砂表面一致時，停止放出。3、洗脫分離先用95%的乙醇進行洗脫，流速控制在每秒一滴，待接收亞甲基藍后，將乙感謝閱讀醇界面放至石英砂表面，關(guān)閉活塞。在用蒸餾水進行洗脫，流速控制在每秒一滴，待接收熒光黃（注意：在更換精品文檔放心下載開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙六、實驗結(jié)果測量回收組分的體積，并計算組分的稀釋倍數(shù)七、思考題1、洗脫液的流速過快或太慢時，對分離效果有什么影響？謝謝閱讀2、為什么極性大的組分要用極性大的洗脫劑來洗脫？板書設(shè)計：生物化學實驗一、實驗室規(guī)則二、試驗報告要求三、考核辦法四、考勤辦法實驗一柱色譜法分離物質(zhì)原理一、目的要求二、基本原理三、實驗內(nèi)容四、儀器和試劑五、實驗步驟1、裝柱2、上樣3、洗脫分離六、實驗結(jié)果七、思考題開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院實踐課教案首頁課題名稱氨基酸的紙層析課程類型實驗課課時（或單元）4課時實驗課類型生物化學實踐教材（名稱、生物化學實驗講義（自編）作者、出版社）教學場所生物實驗室接受實踐教學單位性質(zhì)與特色教學目的學習氨基酸的提取和分離方法重點、難點分析實驗原理與操作技法實踐分組要求3~4人一組，以個人為單位撰寫實驗報告精品文檔放心下載組長條件與職責管理本組的實驗器材和設(shè)備，組織組員進行實驗感謝閱讀層析用濾紙——國產(chǎn)新華1號中速濾紙，層析器，噴霧器。實踐課所需儀器80%乙醇；氨基酸顯色劑（0.1%茚三酮—謝謝閱讀準氨基酸混合液（分別將甘氨酸、絲氨酸、亮氨酸各1設(shè)備與條件毫克溶于5毫升80%感謝閱讀醇：乙醇：水=4：1：5）實驗題目日期實驗?zāi)康膶嵺`報告（總結(jié)）基本原理要求實驗步驟實驗結(jié)果與分析思考題學生操作的規(guī)范性有待提高小結(jié)說明：由于該教案涵蓋較廣，因此不是各欄必須填寫教案紙實驗二氨基酸的紙層析一、目的要求色譜法是現(xiàn)代一種新的分析分離技術(shù)，除紙色譜法外，還發(fā)展有氣相色譜法，液謝謝閱讀相色譜法，離子交換色譜法，以及薄層色譜法等，已成為現(xiàn)代生物化學研究中的重要精品文檔放心下載工具。精品文檔放心下載糖類、脂肪酸、維生素等多種物質(zhì)進行分離鑒定，是生化研究中的重要手段之一。精品文檔放心下載二、基本原理紙色譜法是以濾紙為支持劑的一種層析方法。是根據(jù)各種溶質(zhì)在兩種不相混溶的謝謝閱讀溶劑中的分配系數(shù)不同而將不同物質(zhì)分離開來，它屬于分配色譜分離的范疇。精品文檔放心下載由于濾紙是由纖維素組成的，具有親水性，能吸附一層水膜，這層固定在濾紙上感謝閱讀的水膜稱為固定相，用做推動（或沖洗）樣品的試劑稱為流動相。感謝閱讀將待分離的樣品溶于適當?shù)娜軇?，點樣于濾紙的一端，在層析時借毛細作用使作謝謝閱讀為流動相的溶劑，從濾紙一端推向另一端，樣品中的各個組分由于分配系數(shù)不同，而精品文檔放心下載RfRf謝謝閱讀值的顯色定性，洗脫定量，達到分離的目的。Rf值=某物質(zhì)移動的距離/溶劑移動的距離物質(zhì)結(jié)構(gòu)，溶劑的酸堿性，濾紙質(zhì)量，層析溫度等均能對Rf值產(chǎn)生影響。謝謝閱讀本實驗進行的是上行紙層析法，除此之外，還有下行紙層析法，雙向紙層析法，感謝閱讀連續(xù)紙層析法等，可參閱有關(guān)資料介紹。三、材料與設(shè)備層析用濾紙——國產(chǎn)新華1號中速濾紙，層析器，毛細管，剪刀，研缽，漏斗，感謝閱讀漏斗架，小燒杯，移液管，噴霧器。開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙80%乙醇；氨基酸顯色劑（0.1%茚三酮—感謝閱讀甘氨酸、絲氨酸、亮氨酸各1毫克溶于5毫升80%感謝閱讀醇：乙醇：水=4：1：5）四、實驗步驟1、取材2—4感謝閱讀加入10毫升80%乙醇，在沸水浴中提取5分鐘，冷卻過濾，收集濾液（可反復過濾三感謝閱讀80℃水浴上濃縮至約為2毫升左右，放入冰箱中備用。精品文檔放心下載2、濾紙準備將層析用濾紙裁成5×15平方厘米的長條（注意：保持濾紙潔凈，汗手、唾沫切精品文檔放心下載2厘米處用鉛筆輕劃一條線，線上距左右側(cè)1厘米處各點一點，感謝閱讀為點樣處。3、點樣精品文檔放心下載氨基酸溶液，分別點樣于點樣處，注意使毛細管口與濾紙垂直，輕輕碰觸點中心，此感謝閱讀時，樣品就能自動流出，控制樣品滴直徑在0.5厘米以內(nèi)（點樣量以各種氨基酸含謝謝閱讀5—20謝謝閱讀樣5—10次。標準氨基酸點樣2次。4、展層15毫升注入底部，謝謝閱讀蓋蓋備用。將已點樣的濾紙靠近上沿1厘米處打眼穿線后，將此濾紙條懸掛于已準備謝謝閱讀好的層析器中，飽和一小時后，迅速將層析紙垂直浸入溶劑中，蓋緊蓋子，放于恒溫感謝閱讀處進行層析，待流動相的溶劑已達到濾紙上沿1.5厘米處，開蓋，小心取出濾紙，用精品文檔放心下載鉛筆在溶劑前沿輕劃一線，后懸掛于涼處，使溶劑揮發(fā)，濾紙干燥，準備顯色。感謝閱讀開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙5、顯色將0.1%茚三酮—丙酮溶液裝在噴霧器中，將濾紙條噴濕后，靜置揮發(fā)丙酮，待丙精品文檔放心下載酮揮發(fā)后放在65℃烘箱（或使用吹風機的暖風）內(nèi)保溫顯色，濾紙上有氨基酸的地方感謝閱讀顯現(xiàn)紫紅色。五、實驗結(jié)果根據(jù)顯色情況計算Rf值，判斷提取液中氨基酸數(shù)量，并與標準氨基酸比較。謝謝閱讀六、思考題試比較不同萌發(fā)時期種子氨基酸有何不同？板書設(shè)計：實驗二氨基酸的紙層析一、目的要求二、基本原理：分配色譜三、材料與設(shè)備四、實驗步驟1、取材2、濾紙準備3、點樣4、展層5、顯色五、實驗結(jié)果六、思考題開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院實踐課教案首頁斐林試劑比色法測定課題名稱課程類型實驗課還原糖課時（或單元）4課時實驗課類型生物化學實踐教材（名稱、生物化學實驗講義（自編）作者、出版社）教學場所生物實驗室接受實踐教學單位性質(zhì)與特色學習721型分光光度計的使用方法教學目的學習低速離心機的使用方法掌握實驗原理和方法重點、難點分析721型分光光度計的使用方法實踐分組要求3~4人一組，以個人為單位撰寫實驗報告精品文檔放心下載組長條件與職責管理本組的實驗器材和設(shè)備，組織組員進行實驗感謝閱讀1.斐林試劑A液：40gCuSO4.5H2O溶解于蒸餾水定感謝閱讀容至1L。實踐課所需儀器2.斐林試劑B液：200g酒石酸鉀鈉謝謝閱讀（KNaC4H4O6.5H2O150gNaOH設(shè)備與條件謝謝閱讀容至1升。A、B兩液分別貯存，使用前等體積混合。3.0.1％葡萄糖標準液：取80℃下烘至恒重的葡精品文檔放心下載萄糖0.1000g，加蒸餾水溶解，定容至100ml。謝謝閱讀實驗題目日期實驗?zāi)康膶嵺`報告（總結(jié)）基本原理要求實驗步驟實驗結(jié)果與分析思考題實驗結(jié)果的準確度不夠小結(jié)說明：由于該教案涵蓋較廣，因此不是各欄必須填寫教案紙實驗三斐林試劑比色法測定還原糖一、實驗原理植物組織中的可溶性糖可分為還原糖（主要是葡萄糖和果糖）和非還原糖（主要精品文檔放心下載是蔗糖）兩類。還原糖具有醛基和酮基，在堿性溶液中煮沸，能把斐林試劑中的Cu2+感謝閱讀還原成Cu+，使藍色的斐林試劑脫色，脫色的程度與溶液中含糖量成正比。感謝閱讀二、材料、儀器設(shè)備及試劑（一）材料：新鮮植物樣品或烘干粉碎過的植物樣品。（二）儀器設(shè)備：1.2.分析天平（感量1／100003.4.具塞刻度試管；感謝閱讀5.刻度吸管；6.容量瓶；7.研缽；8.離心機。謝謝閱讀（三）試劑：1.斐林試劑A液：40gCuSO4.5H2O溶解于蒸餾水定容至1L。精品文檔放心下載2.斐林試劑B液：200g酒石酸鉀鈉（KNaC4H4O6.5H2O）與150gNaOH溶于蒸餾水精品文檔放心下載中，并定容至1升。A、B兩液分別貯存，使用前等體積混合。精品文檔放心下載3.0.1％葡萄糖標準液：取80℃下烘至恒重的葡萄糖0.1000g，加蒸餾水溶解，精品文檔放心下載定容至100ml。4.0.1NNaOH。5.甲基紅指示劑：0.1g甲基紅溶于250ml60％乙醇中。謝謝閱讀6.10％Pb（Ac）2。7.飽和Na2SO4。開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙三、實驗步驟1.標準曲線的繪制：各管混合后加塞，于沸水浴中加熱15min。取出后自來水冷卻，1500rpm離心15min。感謝閱讀取上清液，用分光光度計在590nm波長下比色，以蒸餾水作對照，讀取吸光度用空白精品文檔放心下載管的吸光度與不同濃度糖的各管的吸光度之差為橫坐標，對應(yīng)的糖含量為縱坐標，繪謝謝閱讀制標準曲線。2.樣品中還原糖的提?。喝⌒迈r的植物樣品洗凈、擦干、剪碎，稱取10.00g，放入研缽中研磨至糊狀，用水感謝閱讀洗入250ml容量瓶中。當體積近150ml左右時，加2～3滴甲基紅指示劑，如呈紅色，謝謝閱讀可用0.1mol/L的NaOH中和至微黃色。若用風干樣品，可稱取干粉3.00g，先在燒杯精品文檔放心下載中用少量水濕潤，然后用水洗入250ml容量瓶中，如顯酸性，可用上法中和。將容量感謝閱讀瓶置于80℃的恒溫水浴中保溫30min，其間搖動數(shù)次，以便將還原糖充分提取出來。精品文檔放心下載10％Pb(Ac)2感謝閱讀淀時，加飽和Na2SO4除去多余的鉛離子。30min后取出冷卻，定容至刻度，搖勻后過精品文檔放心下載濾待測。3.樣品測定：吸取6ml待測液，加4ml斐林試劑，其它操作與標準曲線相同，在590nm波長下讀精品文檔放心下載取吸光度。以不含樣品的空白管的吸光度減去樣品管的吸光度，在標準曲線上查出糖謝謝閱讀含量.四、結(jié)果計算按下式計算還原糖的百分含量：×樣品總體積×稀釋倍數(shù)/(測定時取用體積×樣品重精品文檔放心下載×1000)×100開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙板書設(shè)計實驗三斐林試劑比色法測定還原糖一、實驗原理植物組織中的可溶性糖可分為還原糖（主要是葡萄糖和果糖）和非還原糖（主要精品文檔放心下載是蔗糖）兩類。還原糖具有醛基和酮基，在堿性溶液中煮沸，能把斐林試劑中的Cu2+精品文檔放心下載還原成Cu+，使藍色的斐林試劑脫色，脫色的程度與溶液中含糖量成正比。感謝閱讀二、材料、儀器設(shè)備及試劑1.分光光度計的工作原理2.分光光度計的使用方法3.臺式低速離心機的工作原理4.臺式低速離心機的使用方法三、實驗步驟1.標準曲線的繪制：2.樣品中還原糖的提?。?.樣品測定：四、結(jié)果計算按下式計算還原糖的百分含量：×樣品總體積×稀釋倍數(shù)/(測定時取用體積×樣品重謝謝閱讀×1000)×100開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院實踐課教案首頁還原糖的測定課題名稱（35二硝基水楊酸課程類型實驗課比色法）課時（或單元）4課時實驗課類型生物化學實踐教材（名稱、生物化學實驗講義（自編）作者、出版社）教學場所生物實驗室接受實踐教學單位性質(zhì)與特色教學目的掌握3，5二硝基水楊酸比色法測定還原糖感謝閱讀重點、難點分析實驗原理與操作技法實踐分組要求3~4人一組，以個人為單位撰寫實驗報告謝謝閱讀組長條件與職責管理本組的實驗器材和設(shè)備，組織組員進行實驗感謝閱讀儀器：分光光度計、恒溫水浴、沸水浴、分析天平、具塞刻度試管、刻度吸管、容量瓶、燒杯、研缽、漏斗實踐課所需儀器試劑：設(shè)備與條件1毫克/毫升葡萄糖標準液3，5二硝基水楊酸溶液實驗題目日期實驗?zāi)康膶嵺`報告（總結(jié)）基本原理要求實驗步驟實驗結(jié)果與分析思考題對數(shù)據(jù)的分析能力需要提高小結(jié)說明：由于該教案涵蓋較廣，因此不是各欄必須填寫教案紙實驗四還原糖的測定（3，5二硝基水楊酸比色法）一、目的要求掌握還原糖測定方法測定的基本原理，學習比色法的基本操作；熟悉721分光光謝謝閱讀度計的使用方法。二、基本原理35謝謝閱讀35二硝基水楊酸共感謝閱讀35二硝基水楊酸被還原成3-氨基-5-謝謝閱讀成糖酸及其它產(chǎn)物。在一定范圍內(nèi)還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺的程度成一定感謝閱讀的比例關(guān)系，在540nm下測定棕紅色的消光值，查對標準曲線，便可求出樣品中還原感謝閱讀糖的含量。三、實驗內(nèi)容3，5二硝基水楊酸比色法測定蘋果中的還原糖四、儀器和試劑儀分光光度計、恒溫水浴、沸水浴、分析天平、具塞刻度試管、刻度吸管、容量精品文檔放心下載瓶、燒杯、研缽、漏斗試劑：1)1毫克/80℃烘至恒重的分析純葡萄糖100精品文檔放心下載后定容到100毫升，冰箱中保存待用2)3，5二硝基水楊酸溶液：稱取1克3，5二硝基水楊酸溶于20毫升1MnaOH溶液中，加入50毫升蒸餾水，再加謝謝閱讀入30100謝謝閱讀備用，勿使二氧化碳進入。開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙五、實驗步驟1.標準曲線的制作取15毫升具塞刻度試管7支，編號，分別加入葡萄糖標準液0，0.1，0.3，謝謝閱讀0.50.71.0毫升，然后用刻度吸管向各管加蒸餾水，時最后體積為1.0毫升，精品文檔放心下載35二硝基水楊酸溶液15分鐘，謝謝閱讀取出冷卻，用蒸餾水稀釋至8毫升混勻，用分光光度計在540nm下測定消光值。精品文檔放心下載以消光值為縱坐標，以葡萄糖含量為橫坐標，繪制標準曲線。謝謝閱讀2.樣品中還原糖的提取將植物樣品（蘋果）洗凈，吸干其表面水分，切碎混勻，稱取1克放入研缽感謝閱讀中，加少許石英砂，磨成勻漿，轉(zhuǎn)移到100毫升容量瓶中，加水達70~80毫升，精品文檔放心下載搖勻，置于80℃恒溫水浴浸提半小時，其間搖動數(shù)次，使還原糖浸出。謝謝閱讀3.還原糖含量的測定待上述提取液冷卻后，定容到100毫升（如果蛋白質(zhì)含量過多時，需作沉淀精品文檔放心下載5100謝謝閱讀而定）過濾，取濾液1毫升放入15毫升具塞試管中，加入1毫升3，5二硝基水精品文檔放心下載515OD540（作精品文檔放心下載兩個重復取平均值）六、實驗結(jié)果從標準曲線上查出樣品的OD540值對應(yīng)的還原糖量A（毫克/精品文檔放心下載下式計算樣品中還原糖的含量。還原糖的含量=A*樣品稀釋總體積（毫升）/樣品重*1000謝謝閱讀開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙附注：沉淀蛋白質(zhì)的方法5%硫酸鋅50.3N,Ba(OH)2溶液5謝謝閱讀Ba(OH)2感謝閱讀向容量瓶加水至刻度。方法二：向提取液中滴入10%醋酸鉛，至不再產(chǎn)生白色絮狀沉淀為止。過多精品文檔放心下載的鉛離子加飽和硫酸銨除去。七、思考題A)比色測定法的原理及特點是什么？B)比色測定法中為什么要設(shè)空白？設(shè)空白時要注意什么？謝謝閱讀C)試分析一下樣品的稀釋倍數(shù)是如何確定的以及對測定結(jié)果的影響？精品文檔放心下載板書設(shè)計實驗四還原糖的測定（3，5二硝基水楊酸比色法）一、基本原理二、實驗步驟1.標準曲線的制作2.樣品中還原糖的提取3.還原糖含量的測定三、實驗結(jié)果還原糖的含量=A*樣品稀釋總體積（毫升）/樣品重*1000謝謝閱讀四、思考題A)比色測定法的原理及特點是什么？B)比色測定法中為什么要設(shè)空白？設(shè)空白時要注意什么？感謝閱讀C)試分析一下樣品的稀釋倍數(shù)是如何確定的以及對測定結(jié)果的影響？精品文檔放心下載開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院實踐課教案首頁蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)和課題名稱課程類型實驗課等電點的測定課時（或單元）4課時實驗課類型生物化學實踐教材（名稱、生物化學實驗講義（自編）作者、出版社）教學場所生物實驗室接受實踐教學單位性質(zhì)與特色教學目的觀察蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)，掌握等電點的測定方法精品文檔放心下載蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和兩性反應(yīng)的關(guān)系重點、難點分析梯度緩沖溶液的配置等電點的測定方法實踐分組要求3~4人一組，以個人為單位撰寫實驗報告謝謝閱讀組長條件與職責管理本組的實驗器材和設(shè)備，組織組員進行實驗謝謝閱讀材料：酪蛋白試劑：0.5%酪蛋白液，0.01%溴甲酚綠指示劑（變色范謝謝閱讀實踐課所需儀器圍是PH3.8~5.40.02NHCl溶液，0.02NNaOH溶謝謝閱讀液，1.00N醋酸溶液設(shè)備與條件10毫升試管10支，5毫升移液管4支，2毫升精品文檔放心下載移液管1支。實驗題目日期實驗?zāi)康膶嵺`報告（總結(jié)）基本原理要求實驗步驟實驗結(jié)果與分析思考題需要加深對基本理論的理解小結(jié)說明：由于該教案涵蓋較廣，因此不是各欄必須填寫教案紙實驗五蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)和等電點的測定一、目的要求掌握蛋白質(zhì)等電點的測定方法二、基本原理蛋白質(zhì)由許多氨基酸組成，雖然絕大多數(shù)的氨基與羧基結(jié)合成肽鍵，但是總有一謝謝閱讀定數(shù)量自由的氨基與羧基以及酚基、巰基、胍基、咪唑基等酸堿基團，因此蛋白質(zhì)和謝謝閱讀氨基酸一樣具有兩性電解質(zhì)的性質(zhì)。調(diào)節(jié)溶液的酸堿度達到一定的離子濃度時，蛋白謝謝閱讀質(zhì)分子所帶的正電荷和負電荷相等，以兼性離子狀態(tài)COO-—R—NH3+存在,在電場內(nèi)該感謝閱讀PH值稱為該蛋白質(zhì)的等點精品文檔放心下載點（PIPH值低于蛋白質(zhì)等電點時，即在H+較多的條件下，蛋白質(zhì)分子帶謝謝閱讀正電荷成為陽離子，當溶液的PH大于等電點時，即在OH-較多的條件下，蛋白質(zhì)分子感謝閱讀帶負電荷成為陰離子。本實驗采用蛋白質(zhì)在不同PH感謝閱讀溶解度最小，最容易沉淀析出。三、實驗內(nèi)容蛋白質(zhì)等電點的測定四、儀器和試劑材料：酪蛋白試劑：0.5%酪蛋白液，0.01%溴甲酚綠指示劑（變色范圍是PH3.8~5.40.02NHCl感謝閱讀溶液，0.02NNaOH溶液，1.00N醋酸溶液設(shè)備：10毫升試管10支，5毫升移液管4支，2毫升移液管1支。感謝閱讀開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙五、實驗步驟一)蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)1.取10.5%酪蛋白20滴和0.01%PH精品文檔放心下載3.8~5.4。在酸性溶液中為黃色，而在堿性溶液中為藍色）5~7滴，混勻，觀察溶液感謝閱讀的顏色。2.用滴管緩慢加入0.02NHCl溶液，隨加隨搖，直到有大量沉淀產(chǎn)生。說明原謝謝閱讀因，并觀察溶液顏色的變化。3.繼續(xù)滴入0.02NHCl溶液，觀察沉淀和溶液顏色的變化，說明原因。精品文檔放心下載4.再滴入0.02NNaOH溶液，觀察溶液沉淀和顏色的變化過程，說明原因。謝謝閱讀二)酪蛋白等電點的測定1.取9支試管編號后按下表順序準確加入試劑，加入每種試劑后應(yīng)混勻。感謝閱讀管號123456789蒸餾水（毫升）2.43.2/2.03.03.51.52.753.38感謝閱讀1.00NHac（毫升）1.60.8///////感謝閱讀0.10NHac（毫升）//4.02.01.00.5///謝謝閱讀0.01NHac（毫升）//////2.51.250.62感謝閱讀酪蛋白-NaAc（毫升）1.01.01.01.01.01.01.01.01.0謝謝閱讀溶液的最終PH3.53.84.14.44.75.05.35.65.9謝謝閱讀沉淀出現(xiàn)的情況2.靜置約20--++++++++++符號表示精品文檔放心下載沉淀的多少。根據(jù)觀察結(jié)果，指出哪個PH是酪蛋白的等電點。精品文檔放心下載六、實驗結(jié)果按照上表的統(tǒng)計結(jié)果進行分析開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙七、思考題1.何為蛋白質(zhì)的等電點？2.在等電點時蛋白質(zhì)的溶解度為什么最低？板書設(shè)計實驗五蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)和等電點的測定一.基本原理二.儀器和試劑三.實驗步驟1)蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)0.01%溴甲酚綠指示劑（變色范圍是PH3.8~5.4。在酸性溶液中為黃色，而在謝謝閱讀堿性溶液中為藍色）2)酪蛋白等電點的測定管號123456789蒸餾水（毫升）2.43.2/2.03.03.51.52.753.38感謝閱讀1.00NHac（毫升）1.60.8///////精品文檔放心下載0.10NHac（毫升）//4.02.01.00.5///感謝閱讀0.01NHac（毫升）//////2.51.250.62謝謝閱讀酪蛋白-NaAc（毫升）1.01.01.01.01.01.01.01.01.0謝謝閱讀溶液的最終PH3.53.84.14.44.75.05.35.65.9感謝閱讀沉淀出現(xiàn)的情況四.實驗結(jié)果五.思考題1.何為蛋白質(zhì)的等電點？2.在等電點時蛋白質(zhì)的溶解度為什么最低？開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院實踐課教案首頁雙縮脲法測定蛋白質(zhì)課題名稱課程類型實驗課含量課時（或單元）4課時實驗課類型生物化學實踐教材（名稱、生物化學實驗講義（自編）作者、出版社）教學場所生物實驗室接受實踐教學單位性質(zhì)與特色教學目的掌握雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量的技術(shù)重點、難點分析原理與操作技法實踐分組要求3~4人一組，以個人為單位撰寫實驗報告謝謝閱讀組長條件與職責管理本組的實驗器材和設(shè)備，組織組員進行實驗謝謝閱讀材料：大豆、蛋清試劑：實踐課所需儀器標準牛血清蛋白，酪蛋白粉末，PH7.2磷酸緩沖液（0.2M設(shè)備與條件設(shè)備：7215毫升移液感謝閱讀管1支，2毫升移液管1支、50毫升容量瓶11感謝閱讀個。實驗題目日期實驗?zāi)康膶嵺`報告（總結(jié)）基本原理要求實驗步驟實驗結(jié)果與分析思考題數(shù)據(jù)的平行性不好小結(jié)說明：由于該教案涵蓋較廣，因此不是各欄必須填寫教案紙實驗六雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量一、目的要求學習蛋白質(zhì)含量測定的原理掌握蛋白質(zhì)測定的方法二、基本原理蛋白質(zhì)含有兩個以上的肽鍵，因此有雙縮脲反應(yīng)。在堿性溶液中蛋白質(zhì)與Cu2+形感謝閱讀成紫紅色絡(luò)合物，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比，而與蛋白質(zhì)的分子量及氨基謝謝閱讀酸的成分無關(guān)，因此被廣泛應(yīng)用。在一定的實驗條件下，未知樣品的溶液與標準蛋白質(zhì)溶液同時反應(yīng)，并于精品文檔放心下載540~560nm下比色，可以通過標準蛋白質(zhì)的標準曲線求出未知樣品的蛋白質(zhì)濃度。標精品文檔放心下載準蛋白質(zhì)溶液可以用結(jié)晶牛血清蛋白、卵清蛋白或酪蛋白粉末配制。感謝閱讀除—CONH—有此反應(yīng)外，—CONH2、—CH2—NH2、—CS—NH2等基團亦有此反應(yīng)。精品文檔放心下載三、實驗內(nèi)容雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量四、儀器和試劑材料：大豆、蛋清試劑：標準牛血清蛋白，酪蛋白粉末，PH7.2磷酸緩沖液（0.2M感謝閱讀開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙設(shè)備：721型分光光度計，5毫升移液管12毫升移液管1精品文檔放心下載支、50毫升容量瓶1個、燒杯1個。五、實驗步驟1.標準曲線的繪制：取600.40.81.21.62.0感謝閱讀補足到2415~2530540nm感謝閱讀波長下用721分光光度計比色測定。最后以光密度為縱坐標，酪蛋白的含量為橫坐標精品文檔放心下載繪制標準曲線。2.樣品蛋白質(zhì)含量的測定：1克吸脹的大豆種子，用PH7.2磷酸緩沖液研磨，浸提302000rpm離心20精品文檔放心下載50224毫精品文檔放心下載升雙縮脲試劑，反應(yīng)30分鐘，進行比色。比色之后在標準曲線上查出蛋白質(zhì)濃度。感謝閱讀六、實驗結(jié)果計算樣品的蛋白質(zhì)含量七、思考題對于作為標準的蛋白質(zhì)應(yīng)有何要求？開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙板書設(shè)計實驗六雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量一、目的要求二、基本原理蛋白質(zhì)含有兩個以上的肽鍵，因此有雙縮脲反應(yīng)。在堿性溶液中蛋白質(zhì)與Cu2+形成紫謝謝閱讀紅色絡(luò)合物，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比，而與蛋白質(zhì)的分子量及氨基酸的感謝閱讀成分無關(guān)，因此被廣泛應(yīng)用。三、實驗內(nèi)容四、儀器和試劑五、實驗步驟1、標準曲線的繪制：取600.40.81.21.62.0感謝閱讀補足到2415~2530540nm感謝閱讀波長下用721分光光度計比色測定。最后以光密度為縱坐標，酪蛋白的含量為橫坐標感謝閱讀繪制標準曲線。2、樣品蛋白質(zhì)含量的測定：1PH7.230分鐘，2000rpm離心20分鐘，謝謝閱讀上清液用磷酸緩沖液定容至50224毫升雙縮謝謝閱讀脲試劑，反應(yīng)30分鐘，進行比色。比色之后在標準曲線上查出蛋白質(zhì)濃度。謝謝閱讀開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院實踐課教案首頁POD課題名稱課程類型實驗課性的測定課時（或單元）4課時實驗課類型生物化學實踐教材（名稱、生物化學實驗講義（自編）作者、出版社）教學場所生物實驗室接受實踐教學單位性質(zhì)與特色教學目的學習和掌握酶活的測定方法重點、難點分析實驗原理與操作技法實踐分組要求3~4人一組，以個人為單位撰寫實驗報告感謝閱讀組長條件與職責管理本組的實驗器材和設(shè)備，組織組員進行實驗感謝閱讀容量瓶（25251毫實踐課所需儀器721型分光光度計，分析天平，秒表0.2M磷酸緩沖液（PH6.0）：將0.2MNaH2PO4溶設(shè)備與條件液87.7毫升于0.2MNa2HPO4溶液12.3毫升混合，蒸餾水稀釋至200毫升。反應(yīng)混合液：0.2M磷酸緩沖液（PH6.0）100毫升，謝謝閱讀加入愈傷木酚0.01930%過氧化氫精品文檔放心下載0.02毫升，搖勻。實驗題目日期實驗?zāi)康膶嵺`報告（總結(jié)）基本原理要求實驗步驟實驗結(jié)果與分析思考題需要進一步培養(yǎng)嚴謹?shù)目茖W態(tài)度小結(jié)說明：由于該教案涵蓋較廣，因此不是各欄必須填寫教案紙實驗七過氧化物酶（POD）活性的測定二、目的要求掌握酶活性的測定方法和原理三、基本原理過氧化物酶是一種含鐵卟啉的氧化酶，是利用H2O2將代謝中的一些化合物氧化，感謝閱讀其活性與呼吸作用和其一些生理過程有關(guān)。測定過氧化物酶的活性變化是生理和病理感謝閱讀上一個重要指標。過氧化物酶能催化過氧化氫對某些物質(zhì)的氧化，如催化過氧化氫氧化愈傷木酚作謝謝閱讀為被氧化的基質(zhì)，呈現(xiàn)的棕色可在OD470檢測。四、實驗內(nèi)容植物過氧化物酶活性的測定五、儀器和試劑容量瓶（25251感謝閱讀721型分光光度計，分析天平，秒表0.2M磷酸緩沖液（PH6.0）：將0.2MNaH2PO4溶液87.7毫升于0.2MNa2HPO4感謝閱讀溶液12.3毫升混合，蒸餾水稀釋至200毫升。0.2M磷酸緩沖液（PH6.0）100毫升，加入愈傷木酚0.019毫升，開精品文檔放心下載始實驗前加入30%過氧化氫0.02毫升，搖勻。六、實驗步驟稱取馬鈴薯外皮10.2M磷酸緩感謝閱讀沖液（PH6.0）磨成勻漿，加入20毫升緩沖液浸提15分鐘后4層紗布過濾放入50毫精品文檔放心下載升容量瓶中，用緩沖液定容，搖勻，放置澄清后取上清液測活性。感謝閱讀開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙1.在光徑為1厘米的比色杯中加反應(yīng)液3毫升，再迅速加入1毫升酶液，立謝謝閱讀即用聚乙烯薄膜蒙住比色杯上口，用拇指壓緊，中指持比色杯底，反復搖動比色謝謝閱讀杯，使反應(yīng)系統(tǒng)迅速混勻。2.注意：當一開始注入酶液時就同時啟動秒表計時，以1毫升酶液加3毫升感謝閱讀不含過氧化氫的反應(yīng)混合液作空白對照，選用470nm波長，每30秒記光密度值，精品文檔放心下載共計約10分鐘。3.以時間為橫坐標，光密度值為縱坐標，繪制酶促反應(yīng)的進程曲線，并根據(jù)謝謝閱讀反應(yīng)初速度計算酶的相對活性（以O(shè)D470/g/min精品文檔放心下載4.OD值為活性單位即可，如要精確計算氧化愈謝謝閱讀傷木酚的數(shù)量，需作一標準曲線以計算其氧化量。七、實驗結(jié)果1.記錄和計算過氧化物酶活性記錄表時間（秒）光密度值（OD）植物材料：用量：2.繪制酶促反應(yīng)的進程曲線，計算酶的相對活性。八、思考題1）比較過氧化物酶和和過氧化氫酶在反應(yīng)中的主要區(qū)別？感謝閱讀2）精品文檔放心下載液中不加過氧化氫作空白對照？開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院教案紙板書設(shè)計實驗七過氧化物酶（POD）活性的測定一.基本原理二.實驗內(nèi)容三.儀器和試劑四.實驗步驟1)稱取馬鈴薯外皮10.2M精品文檔放心下載PH6.020毫升緩沖液浸提15分鐘后4層紗布謝謝閱讀過濾放入50精品文檔放心下載性。2)在光徑為1厘米的比色杯中加反應(yīng)液3毫升，再迅速加入1毫升酶液，立即謝謝閱讀用聚乙烯薄膜蒙住比色杯上口，用拇指壓緊，中指持比色杯底，反復搖動比感謝閱讀色杯，使反應(yīng)系統(tǒng)迅速混勻。3)注意：當一開始注入酶液時就同時啟動秒表計時，以1毫升酶液加3毫升不感謝閱讀470nm30秒記光密度值，精品文檔放心下載共計約10分鐘。4)以時間為橫坐標，光密度值為縱坐標，繪制酶促反應(yīng)的進程曲線，并根據(jù)反精品文檔放心下載應(yīng)初速度計算酶的相對活性（以O(shè)D470/g/min謝謝閱讀5)OD值為活性單位即可，如要精確計算氧化愈傷精品文檔放心下載木酚的數(shù)量，需作一標準曲線以計算其氧化量。五.實驗結(jié)果繪制酶促反應(yīng)的進程曲線，計算酶的相對活性。開發(fā)區(qū)職業(yè)技術(shù)學院實踐課教案首頁蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)與課題名稱課程類型實驗課透析課時（或單元）4課時實驗課類型生物化學實踐教材（名稱、生物化學實驗講義（自編）作者、出版社）教學場所生物實驗室接受實踐教學單位性質(zhì)與特色教學目的掌握蛋白質(zhì)沉淀，鹽析，鹽溶，透析等操作技術(shù)謝謝閱讀重點、難點分析實驗原理與操作技法實踐分組要求3~4人一組，以個人為單位撰寫實驗報告謝謝閱讀組長條件與職責管理本組的實驗器材和設(shè)備，組織組員進行實驗謝謝閱讀0.10mol/L醋酸溶液、蛋白質(zhì)溶液、pH4.7醋酸—醋酸感謝閱讀實踐課所需儀器3%95%0.1mol/L0.1mol/L氫設(shè)備與條件氧化鈉溶液、0.05mol/L鋇溶液，半透膜實驗題目日期實驗?zāi)康膶嵺`報告（總結(jié)）基本原理要求實驗步驟實驗結(jié)果與分析思考題需要理解過程理論小結(jié)說明：由于該教案涵蓋較廣，因此不是各欄必須填寫教案紙實驗八蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)一、目的掌握蛋白質(zhì)及氨基酸的特性，加深理解課堂內(nèi)容。二、原理在水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面生成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體顆謝謝閱讀粒，在一定的理化因素影響