藥代動力學實用

PPT內容第1頁/共56頁第一頁，共57頁。藥物選擇

受試物：應提供受試物的名稱、劑型、批號、來源、純度、保存條件及配制方法。使用的受試物及劑型應盡量與藥效學或毒理學研究的一致，并附研制單位的質檢報告。參比物：必須引用參比藥品的資料，該藥品已經(jīng)在中國獲得上市授權，具有全面的資料。申請者應該對參比藥品的選擇說明理由。

第2頁/共56頁第二頁，共57頁。藥物選擇

對于仿制藥品申請，受試藥品通常與可從市場獲得的參比藥品相應的劑型比較。該藥品已有多個上市劑型時，如果能在市場上獲得，推薦使用該藥品最初批準的劑型（它被用于臨床藥效學和安全性試驗）作為參比藥品。第3頁/共56頁第三頁，共57頁。劑量選擇

動物體內藥代動力學研究應設置至少三個劑量組，其高劑量最好接近最大耐受劑量，中、小劑量根據(jù)動物有效劑量的上下限范圍選取。主要考察在所試劑量范圍內，藥物的體內動力學過程是屬于線性還是非線性，以利于解釋藥效學和毒理學研究中的發(fā)現(xiàn)，并為新藥的進一步開發(fā)和研究提供信息。第4頁/共56頁第四頁，共57頁。劑量選擇動物種屬小鼠大鼠豚鼠兔貓猴犬人劑量折算系數(shù)K10.710.620.370.300.320.210.11動物體型系數(shù)R0.0590.090.0990.0930.0820.1110.1040.1標準體重(kg)0.020.20.41.5241270標準體重動物：DB

＝DA×KB／KA非標準體重動物：DB

＝DA×RB／RA×（WA／WB）1／3第5頁/共56頁第五頁，共57頁。試驗動物

一般采用成年和健康的動物。常用動物有小鼠、大鼠、兔、豚鼠、犬、小型豬和猴等。動物選擇的一般原則如下:首選動物：盡可能與藥效學和毒理學研究一致；盡量在清醒狀態(tài)下試驗，動力學研究最好從同一動物多次采樣；創(chuàng)新性的藥物應選用兩種或兩種以上的動物，其中一種為嚙齒類動物；另一種為非嚙齒類動物（如犬、小型豬或猴等）。其他藥物，可選用一種動物，建議首選非嚙齒類動物；經(jīng)口給藥不宜選用兔等食草類動物。第6頁/共56頁第六頁，共57頁。給藥途徑

所用的給藥途徑和方式，應盡可能與臨床用藥一致。常用的給藥途徑有經(jīng)口給藥（口服、灌胃）、皮下注射、腹腔注射和靜脈注射。另外還有腦內給藥、直腸內給藥、經(jīng)皮膚給藥等給藥方法。第7頁/共56頁第七頁，共57頁。研究項目血藥濃度-時間曲線吸收分布排泄與血漿蛋白的結合生物轉化對藥物代謝酶活性的影響第8頁/共56頁第八頁，共57頁。血藥濃度-時間曲線受試動物數(shù)：血藥濃度-時間曲線的每個采樣點不少于5個數(shù)據(jù)，最好從同一動物個體多次取樣。如由多只動物的數(shù)據(jù)共同構成一條血藥濃度-時間曲線，應相應增加動物數(shù)，以反映個體差異對試驗結果的影響。建議受試動物采用雌雄各半，如發(fā)現(xiàn)動力學存在明顯的性別差異，應增加動物數(shù)以便認識受試物的藥代動力學的性別差異。對于單一性別用藥，可選擇與臨床用藥一致的性別。第9頁/共56頁第九頁，共57頁。血藥濃度-時間曲線

采樣點給藥前需要采血作為空白樣品，觀察血漿的基質效應；為獲得一個完整的血藥濃度-時間曲線，采樣時間點的設計應兼顧藥物的吸收相、平衡相（峰濃度附近）和消除相。一般在吸收相至少需要2-3個采樣點，對于吸收快的血管外給藥的藥物，應盡量避免第一個點是峰濃度（Cmax）；在Cmax附近至少需要3個采樣點；消除相需要4-6個采樣點；第10頁/共56頁第十頁，共57頁。血藥濃度-時間曲線采樣點整個采樣時間至少應持續(xù)到3-5個半衰期，或持續(xù)到血藥濃度為Cmax的1/10-1/20；為保證最佳采樣點，建議在正式試驗前，選擇2-3只動物進行預試驗，然后根據(jù)預試驗的結果，審核并修正原設計的采樣點。第11頁/共56頁第十一頁，共57頁。血藥濃度-時間曲線

口服給藥：一般在給藥前應禁食12小時以上，以排除食物對藥物吸收的影響。另外在試驗中應注意根據(jù)具體情況統(tǒng)一給藥后禁食時間，以避免由此帶來的數(shù)據(jù)波動及食物的影響，一般可以在口服給藥3-4小時后就可以給水給糧。注射給藥：飲食飲水對血液中藥物影響不大。第12頁/共56頁第十二頁，共57頁。血藥濃度-時間曲線

藥代動力學參數(shù)

根據(jù)試驗中測得的各受試動物的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)，求得受試物的主要藥代動力學參數(shù)。靜脈注射給藥，應提供t1/2（消除半衰期）、Vd（表觀分布容積）、AUC（血藥濃度-時間曲線下面積）、CL（清除率）等參數(shù)值；血管外給藥，除提供上述參數(shù)外,尚應提供Cmax和Tmax（達峰時間）等參數(shù)，以反映藥物吸收的規(guī)律。另外，提供統(tǒng)計矩參數(shù)，如:MRT（平均滯留時間）、AUC(0-t)和AUC(0-∞)等，對于描述藥物藥代動力學特征也是有意義的。第13頁/共56頁第十三頁，共57頁。血藥濃度-時間曲線

多次給藥藥代動力學研究

當藥物在臨床上將連續(xù)多次應用時，需明確多次給藥的藥代動力學特征。根據(jù)研究目的，應考察藥物多次給藥后的穩(wěn)態(tài)濃度（Css），藥物谷、峰濃度的波動系數(shù)（DF），是否存在藥物蓄積作用和/或藥酶的誘導作用。

第14頁/共56頁第十四頁，共57頁。血藥濃度-時間曲線單次給藥各個（和各組）受試動物的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)及曲線和其平均值、標準差及曲線；各個（和各組）受試動物的主要藥代動力學參數(shù)及平均值、標準差；對受試物單次給藥非臨床藥代動力學的規(guī)律和特點進行討論和評價。第15頁/共56頁第十五頁，共57頁。血藥濃度-時間曲線多次給藥各個（和各組）受試動物首次給藥后的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)及曲線和主要藥代動力學參數(shù)；各個（和各組）受試動物的3次穩(wěn)態(tài)谷濃度數(shù)據(jù)及平均值、標準差；各個（和各組）受試動物血藥濃度達穩(wěn)態(tài)后末次給藥的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)和曲線，及其平均值、標準差和曲線；比較首次與末次給藥的血藥濃度-時間曲線和有關參數(shù)；各個（和各組）平均穩(wěn)態(tài)血藥濃度及標準差。第16頁/共56頁第十六頁，共57頁。吸收對于經(jīng)口給藥的新藥，應進行整體動物試驗，盡可能同時進行血管內給藥的試驗，提供絕對生物利用度。如有必要，可進行在體或離體腸道吸收試驗以闡述藥物吸收特性。對于其他血管外給藥的藥物及某些改變劑型的藥物，應根據(jù)立題目的，盡可能提供絕對生物利用度。第17頁/共56頁第十七頁，共57頁。分布選用大鼠或小鼠做組織分布試驗較為方便。選擇一個劑量（一般以有效劑量為宜）給藥后，至少測定藥物在心、肝、脾、肺、腎、胃腸道、生殖腺、腦、體脂、骨骼肌等組織的濃度，以了解藥物在體內的主要分布組織。特別注意藥物濃度高、蓄積時間長的組織和器官，以及在藥效或毒性靶器官的分布（如對造血系統(tǒng)有影響的藥物，應考察在骨髓的分布）。第18頁/共56頁第十八頁，共57頁。分布每個時間點，至少應有5個動物的數(shù)據(jù)。參考血藥濃度-時間曲線的變化趨勢，選擇至少3個時間點分別代表吸收相、平衡相和消除相的藥物分布。若某組織的藥物濃度較高，應增加觀測點，進一步研究該組織中藥物消除的情況。進行組織分布試驗，必須注意取樣的代表性和一致性。第19頁/共56頁第十九頁，共57頁。分布同位素標記物的組織分布試驗，應提供標記藥物的放化純度、標記率（比活性）、標記位置、給藥劑量等參數(shù)；提供放射性測定所采用的詳細方法，如分析儀器、本底計數(shù)、計數(shù)效率、校正因子、樣品制備過程等；提供采用放射性示蹤生物學試驗的詳細過程，以及在生物樣品測定時對放射性衰變所進行的校正方程等。盡可能提供給藥后不同時相的整體放射自顯影圖像。

第20頁/共56頁第二十頁，共57頁。分布第21頁/共56頁第二十一頁，共57頁。分布第22頁/共56頁第二十二頁，共57頁。排泄尿和糞的藥物排泄：一般采用小鼠或大鼠，將動物放入代謝籠內，選定一個有效劑量給藥后，按一定的時間間隔分段收集尿或糞的全部樣品，測定藥物濃度。糞樣品涼干后稱重（不同動物糞便干濕不同），按一定比例制成勻漿，記錄總體積，取部分樣品進行藥物含量測定。計算藥物經(jīng)此途徑排泄的速率及排泄量，直至收集到的樣品測定不到藥物為止。第23頁/共56頁第二十三頁，共57頁。排泄每個時間點至少有5只動物的試驗數(shù)據(jù)。應采取給藥前尿及糞樣，并參考預試驗的結果，設計給藥后收集樣品的時間點，包括藥物從尿或糞中開始排泄、排泄高峰及排泄基本結束的全過程。第24頁/共56頁第二十四頁，共57頁。排泄膽汁排泄：有的藥物經(jīng)膽汁排泄在腸中再次被吸收形成肝腸循環(huán)，可使藥物作用時間延長。一般用大鼠在乙醚麻醉下作膽管插管引流，待動物清醒后給藥，并以合適的時間間隔分段收集膽汁，進行藥物測定。記錄藥物自糞、尿、膽汁排出的速度及總排出量（占總給藥量的百分比），提供物質平衡的數(shù)據(jù)。第25頁/共56頁第二十五頁，共57頁。與血漿蛋白的結合

藥物與蛋白的結合會明顯影響藥物分布與消除的動力學過程，并降低藥物在靶部位的作用強度。對蛋白結合率高于90%以上的藥物，建議開展體外藥物競爭結合試驗，即選擇臨床上有可能合并使用的高蛋白結合率藥物，考察對所研究藥物蛋白結合率的影響。

第26頁/共56頁第二十六頁，共57頁。與血漿蛋白的結合

研究藥物與血漿蛋白結合試驗可采用多種方法，如平衡透析法、超過濾法、分配平衡法、凝膠過濾法、光譜法等。根據(jù)藥物的理化性質及試驗室條件，可選擇使用一種方法進行至少3個濃度（包括有效濃度）的血漿蛋白結合試驗，每個濃度至少重復試驗三次，以了解藥物的血漿蛋白結合率是否有濃度依賴性。

第27頁/共56頁第二十七頁，共57頁。生物轉化

對于創(chuàng)新性的藥物，尚需了解在體內的生物轉化情況，包括轉化類型、主要轉化途徑及其可能涉及的代謝酶。對于新的前體藥物,除對其代謝途徑和主要活性代謝物結構進行研究外,尚應對原形藥和活性代謝物進行系統(tǒng)的藥代動力學研究。第28頁/共56頁第二十八頁，共57頁。對藥物代謝酶活性的影響

對于創(chuàng)新性的藥物，應觀察藥物對藥物代謝酶，特別是細胞色素P450同工酶的誘導或抑制作用?？捎^察整體動物多次給藥后的肝P450酶或在藥物反復作用后的肝細胞（最好是人肝細胞）P450酶活性的變化，以了解該藥物是否存在潛在的代謝性相互作用。第29頁/共56頁第二十九頁，共57頁。生物樣品的藥物分析方法

生物樣品的藥物分析方法包括色譜法、放射性核素標記法、免疫學和微生物學方法。應根據(jù)受試物的性質，選擇特異性好、靈敏度高的測定方法。色譜法包括高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）和色譜-質譜聯(lián)用法（如LC-MS，LC-MS/MS，GC-MS，GC-MS/MS

方法）。在需要同時測定生物樣品中多種化合物的情況下，LC-MS/MS和GC-MS/MS

聯(lián)用法在特異性、靈敏度和分析速度方面有更多的優(yōu)點。第30頁/共56頁第三十頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證準確度：在確定的分析條件下，測得值與真實值的接近程度。精密度：在確定的分析條件下，相同介質中相同濃度樣品的一系列測量值的分散程度。特異性：分析方法測量和區(qū)分共存組分中分析物的能力。這些共存組分可能包括代謝物、雜質、分解產物、介質組分等。靈敏度：生物樣品分析方法的靈敏度通過標準曲線來表征，主要包括定量下限和濃度-響應函數(shù)。重現(xiàn)性：不同試驗室間測定結果的分散程度，以及相同條件下分析方法在間隔一段短時間后測定結果的分散程度。穩(wěn)定性：一種分析物在確定條件下，一定時間內在給定介質中的化學穩(wěn)定性。第31頁/共56頁第三十一頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證標準曲線：試驗響應值與分析物濃度間的關系。應采用適當?shù)募訖嗪徒y(tǒng)計檢驗，用簡單的數(shù)學模型來最適當?shù)孛枋?。標準曲線應是連續(xù)的和可重現(xiàn)的，應以回歸計算結果的百分偏差最小為基礎。提取回收率：分析過程的提取效率，以樣品提取和處理過程前后分析物含量百分比表示。生物介質：一種生物來源物質，能夠以可重復的方式采集和處理。例如全血、血漿、血清、尿、糞、各種組織等。第32頁/共56頁第三十二頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證定量范圍：包括定量上限（ULOQ）和定量下限（LLOQ）的濃度范圍，在此范圍內采用濃度-響應關系能進行可靠的、可重復的定量，其準確度和精密度可以接受。介質效應：由于樣品中存在干擾物質，對響應造成的直接或間接的影響。

分析批：包括待測樣品、適當數(shù)目的標準樣品和質控樣品的完整系列。一天內可以完成幾個分析批，一個分析批也可以持續(xù)幾天完成。第33頁/共56頁第三十三頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證標準樣品：在生物介質中加入已知量分析物配制的樣品，用于建立標準曲線，計算質控樣品和未知樣品中分析物濃度。質控樣品：即QC樣品，系指在生物介質中加入已知量分析物配制的樣品，用于監(jiān)測生物分析方法的重復性和評價每一分析批中未知樣品分析結果的完整性和正確性。第34頁/共56頁第三十四頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證

由于生物樣品取樣量少、藥物濃度低、內源性物質（如無機鹽、脂質、蛋白質、代謝物）及個體差異等多種因素影響生物樣品測定，所以必根據(jù)待測物的結構、生物介質和預期的濃度范圍，建立適宜的生物樣品析方法，并對方法進行確證。推薦由獨立的人員配制不同濃度的標準樣品對分析方法進行考核。第35頁/共56頁第三十五頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證特異性必須證明所測定的物質是預期的分析物，內源性物質和其他代謝物不得干擾樣品的測定。對于色譜法至少要考察6個不同個體空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對照物質色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品色譜圖。對于以軟電離質譜為基礎的檢測方法（LC-MS、LC-MS/MS等），應注意考察分析過程中的介質效應，如離子抑制等。第36頁/共56頁第三十六頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證

標準曲線與定量范圍必須至少用6個濃度建立標準曲線，對于非線性相關可能需要更多濃度點。定量范圍要能覆蓋全部待測的生物樣品濃度范圍，不得用定量范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。建立標準曲線時應隨行空白生物樣品，但計算時不包括該點，僅用于評價干擾。第37頁/共56頁第三十七頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證標準曲線各濃度點的實測值與標示值之間的偏差*

在可接受的范圍之內時，可判定標準曲線合格?？山邮芊秶话阋?guī)定為最低濃度點的偏差在±20%以內，其余濃度點的偏差在±15%以內。只有合格的標準曲線才能對臨床待測樣品進行定量計算。*

：偏差=[（實測值－標示值）/標示值]X100%標準曲線進行計算，以使低濃度點計算得比較準確。第38頁/共56頁第三十八頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證精密度與準確度要求選擇3個濃度的質控樣品同時進行方法的精密度和準確度考察。低濃度選擇在定量下限附近，其濃度在定量下限的3倍以內；高濃度接近于標準曲線的上限；中間選一個濃度。每一濃度每批至少測定5個樣品，為獲得批間精密度，應至少連續(xù)3個分析批樣品。第39頁/共56頁第三十九頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證精密度與準確度精密度用質控樣品的批內和批間相對標準差（RSD）表示，相對標準差一般應小于15%，在定量下限附近相對標準差應小于20%。

準確度一般應在85%～115%范圍內，在定量下限附近應在80%～120%范圍內。第40頁/共56頁第四十頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證定量下限

定量下限是標準曲線上的最低濃度點，要求至少能滿足測定3～5個半衰期時樣品中的藥物濃度，或Cmax的1/10～1/20時的藥物濃度，其準確度應在真實濃度的80%～120%范圍內，RSD應小于20%。應由至少5個標準樣品測試結果證明。第41頁/共56頁第四十一頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證樣品穩(wěn)定性根據(jù)具體情況，對含藥生物樣品在室溫、冰凍或凍融條件下以及不同存放時間進行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時間。還應注意儲備液的穩(wěn)定性以及樣品處理后的溶液中分析物的穩(wěn)定性。

第42頁/共56頁第四十二頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證室溫下放置8h后測定；?20℃條件下放置15天，中間兩次反復凍融，在第三次凍融后測定；經(jīng)過第三次凍融后，在4℃放置8h后測定；注：凍融過程穩(wěn)定性要考慮高、中、低三個濃度，n=5。第43頁/共56頁第四十三頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證提取回收率回收率是作為建立方法的考察的重要指標，分為相對回收率和絕對回收率。應考察高、中、低3個濃度的提取回收率，n＝5或6，其結果應精密和可重現(xiàn)。第44頁/共56頁第四十四頁，共57頁。生物樣品分析方法的建立和確證相對回收率：也就是通常所說的準確度，計算方法是將加藥樣品經(jīng)過處理后測定的響應值代入該樣品的標準曲線，計算相應濃度值（A），然后除以樣品中藥物的加入濃度值。相對回收率主要考察標準曲線及建立的方法的準確度。絕對回收率：也稱為提取回收率，計算方法是加藥樣品經(jīng)過處理后測定的響應值除以溶于流動相中的同濃度標準品的測定響應值第45頁/共56頁第四十五頁，共57頁。生物樣品分析應在生物樣品分析方法確證完成之后開始測試未知樣品。每個未知樣品一般測定一次，必要時可進行復測。藥代動力學比較試驗中，來自同一個體的生物樣品最好在同一分析批中測定。第46頁/共56頁第四十六頁，共57頁。生物樣品分析每個分析批應建立標準曲線（組織分布試驗時，可視具體情況而定），隨行測定高、中、低3個濃度的質控樣品，每個濃度至少雙樣本，并應均勻分布在未知樣品測試順序中。當一個分析批中未知樣品數(shù)目較多時，應增加各濃度質控樣品數(shù)，使質控樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的5%。第47頁/共56頁第四十七頁，共57頁。生物樣品分析質控樣品測定結果的偏差一般應小于15%，低濃度點偏差一般應小于20%，最多允許1/3質控樣品的結果超限，但不能在同一濃度中出現(xiàn)。如質控樣品測定結果不符合上述要求，則該分析批樣品測試結果作廢。第48頁/共56頁第四十八頁，共57頁。生物樣品分析濃度高于定量上限的樣品，應采用相應的空白介質稀釋后重新測定。對于濃度低于定量下限的樣品，在進行藥代動力學分析時，在達到Cmax以前取樣的樣品應以零值計算，在達到Cmax以后取樣的樣品應以無法定量（Notdetectable,ND）計算，以減小零值對AUC計算的影響。第49頁/共56頁第四十九頁，共57頁。分析數(shù)據(jù)的記錄與保存

提供給藥品注冊管理部門的材料應當包括：

1）綜合信息；2）方法建立的數(shù)據(jù)；3）在日常樣品分析中的基本資料；4）其他相關信息。第50頁/共56頁第五十頁，共57頁。分析數(shù)據(jù)的記錄與保存

1）綜合信息項目編號，分析方法編號，