藥物雜質(zhì)研究基本思路及控制方法課件

藥物雜質(zhì)研究基本思路

及控制方法2011.1.161.國內(nèi)外對藥物雜質(zhì)研究的相關(guān)技術(shù)要求2.雜質(zhì)來源和控制有機(jī)雜質(zhì)無機(jī)雜質(zhì)殘留溶劑主要內(nèi)容ICH（InternationalConferenceon

HarmonizationofTechnicalRequirementsforRegistrationofPharmaceuticalsforHumanUse）美國藥典（USP）英國藥典(BP)歐洲藥典(EP)中國藥典(ChP)《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》相關(guān)內(nèi)容的基礎(chǔ)上，結(jié)合我國藥物研發(fā)的特點(diǎn)，通過分析、研究與藥物的安全性、有效性及質(zhì)量可控性之間的內(nèi)在關(guān)系而制定的（二）雜質(zhì)的分類

按理化性質(zhì)

按照其來源

按照其毒性按化學(xué)結(jié)構(gòu)

有機(jī)雜質(zhì)、無機(jī)雜質(zhì)、殘留溶劑

工藝雜質(zhì)（包括合成中未反應(yīng)完全的反應(yīng)物、試劑、中間體、副產(chǎn)物等）

降解產(chǎn)物

從反應(yīng)物及試劑中混入的雜質(zhì)等。

毒性雜質(zhì)、普通雜質(zhì)

如甾體、生物堿、幾何異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體聚合物等。有機(jī)雜質(zhì)：包括工藝中引入的雜質(zhì)和降解產(chǎn)物等，由于這類雜質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)一般與活性成分類似或具淵源關(guān)系，故通常又可稱之為有關(guān)物質(zhì)。無機(jī)雜質(zhì)：是指在原料藥及制劑生產(chǎn)或傳遞過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)，這些雜質(zhì)通常是已知的，主要包括：反應(yīng)試劑、配位體、催化劑、重金屬、其它殘留的金屬、無機(jī)鹽、助濾劑、活性炭等。殘留溶劑：在合成、純化、制劑過程中殘留所使用的溶劑，這些溶劑通常是已知的。二、國內(nèi)外對藥物雜質(zhì)研究的

相關(guān)技術(shù)要求最大日劑量報(bào)告限度鑒定限度質(zhì)控限度≤2g0.05%0.10%或1.0mg（取最小值）0.15%或1.0mg（取最小值）>2g 0.03% 0.05% 0.05%附件1：原料藥的雜質(zhì)限度

(一)雜質(zhì)限度要求報(bào)告限度（ReportingThreshold）：超出此限度的雜質(zhì)均應(yīng)在檢測報(bào)告中報(bào)告，并應(yīng)報(bào)告具體的檢測數(shù)據(jù)。鑒定限度（IdentificationThreshold）：超出此限度的雜質(zhì)均應(yīng)進(jìn)行定性分析，確定其化學(xué)結(jié)構(gòu)。質(zhì)控限度（QualificationThreshold）：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中一般允許的雜質(zhì)限度，如制訂的限度高于此限度，則應(yīng)有充分的依據(jù)。

1、有機(jī)雜質(zhì)的限度確定

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對有機(jī)雜質(zhì)的限度規(guī)定應(yīng)包括：每一個(gè)已知雜質(zhì)、未知雜質(zhì)及總雜質(zhì)。共存的異構(gòu)體和抗生素的多組分一般不作為雜質(zhì)進(jìn)行控制，必要時(shí)作為共存物質(zhì)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定其比例。單一的對映體藥物，其對映異構(gòu)體應(yīng)作為雜質(zhì)控制.由于創(chuàng)新藥物與仿制藥情況不同，在確定雜質(zhì)限度時(shí)，可有所區(qū)別。(1)創(chuàng)新藥物

由于在創(chuàng)新藥物的研究過程中進(jìn)行藥理毒理臨床研究超出了附件1或2的質(zhì)控限度，仍可認(rèn)為該雜質(zhì)的含量已經(jīng)通過了安全性的驗(yàn)證。在此前提之下，如果該雜質(zhì)的含量同時(shí)也在正常的制備工藝所允許的限度范圍內(nèi)，那么根據(jù)試驗(yàn)樣品中雜質(zhì)的含量所確定的限度可認(rèn)為是合理的。鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯

福莫司?。?）仿制已有國家標(biāo)準(zhǔn)的藥品

可以根據(jù)已有的標(biāo)準(zhǔn)制訂相應(yīng)的雜質(zhì)限度。1、該標(biāo)準(zhǔn)中未規(guī)定雜質(zhì)的限度：應(yīng)與已上市同品種藥品進(jìn)行全面的質(zhì)量對比研究雜質(zhì)的種類與含量穩(wěn)定性考察

2、難以獲得已上市同品種的標(biāo)準(zhǔn)，但有相同原料藥的其它劑型上市，則在制訂雜質(zhì)限度時(shí)，可參考此上市產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對雜質(zhì)進(jìn)行控制。（3）其它新藥

改變給藥途徑的制劑，其雜質(zhì)限度的確定參照創(chuàng)新藥物的要求進(jìn)行。對于其它類別的新藥，如果能夠獲得已上市的對照樣品，則可按照仿制已有標(biāo)準(zhǔn)的藥品的研究思路，在詳細(xì)的質(zhì)量對比研究的基礎(chǔ)上，確定雜質(zhì)的限度。如果不能獲得對照樣品，則應(yīng)參照創(chuàng)新藥物的要求確定雜質(zhì)限度，或通過詳細(xì)的安全性試驗(yàn)來證明已有的雜質(zhì)限度是安全的。2、無機(jī)雜質(zhì)的限度確定

原則：無機(jī)雜質(zhì)的限度主要根據(jù)該雜質(zhì)的毒性、對藥品本身質(zhì)量（如穩(wěn)定性）的影響及各批次產(chǎn)品的實(shí)測結(jié)果而定。各國藥典收載的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及我國已批準(zhǔn)上市產(chǎn)品的注冊標(biāo)準(zhǔn)中對于我們確定在研產(chǎn)品的無機(jī)雜質(zhì)限度具有重要的參考價(jià)值。

給藥途徑、適應(yīng)癥、劑量等選擇合適的參考標(biāo)準(zhǔn)，確定合理的限度。

重金屬0.001%鐵鹽0.003%氯化物0.014%硫酸鹽0.04%-0.1%砷鹽0.0002-0.0005%溶劑名稱PDE值(mg/天）限度（％）第二類溶劑（應(yīng)該限制使用）

乙腈 4.10.041氯苯 3.60.036氯仿 0.60.006環(huán)己烷 38.80.388N,N-二甲氧基甲酰胺8.80.0881,4-二氧六環(huán)

3.80.038正己烷 2.90.029甲醇 30.00.3四氫呋喃 7.20.072甲苯

8.90.089二氯甲烷 6.00.06溶劑名稱PDE值(mg/天）限度（％）第三類溶劑(GMP或其他質(zhì)量要求限制使用)

叔丁基甲基醚50.00.5異丙基苯50.00.5

二甲亞砜50.00.5乙醇50.00.5乙酸乙酯50.00.5乙醚50.0

0.5甲酸乙酯50.00.5甲酸50.00.5正庚烷50.00.5乙酸異丁酯50.00.5乙酸異丙酯50.00.54、臨床研究申請與上市生產(chǎn)申請

階段的雜質(zhì)研究申報(bào)臨床研究：

1、申報(bào)臨床研究前，應(yīng)對已有批次產(chǎn)品的雜質(zhì)進(jìn)行比較，根據(jù)安全性研究用樣品的雜質(zhì)含量情況來證明臨床研究用藥品是安全的。2、可在臨床研究期間對雜質(zhì)分析方法進(jìn)行完善。3、對于創(chuàng)新藥物，可對雜質(zhì)的限度做初步的規(guī)定。

（二）雜質(zhì)檢測技術(shù)要求1、雜質(zhì)分析方法分析方法的選擇直接關(guān)系到雜質(zhì)測定結(jié)果的專屬性與準(zhǔn)確性，因此，在進(jìn)行雜質(zhì)研究時(shí)首要問題是選擇合適的雜質(zhì)分析方法。（1）有機(jī)雜質(zhì)的分析方法化學(xué)法、光譜法、色譜法等，隨著分離、檢測技術(shù)的發(fā)展與更新，高效、快速的分離技術(shù)與靈敏、穩(wěn)定、準(zhǔn)確、適用的檢測手段相結(jié)合。目前普遍采用的雜質(zhì)檢測方法：

高效液相色譜法薄層色譜法、氣相色譜法毛細(xì)管電泳法（2）無機(jī)雜質(zhì)的分析方法

無機(jī)雜質(zhì)的產(chǎn)生主要與生產(chǎn)工藝過程有關(guān)。由于許多無機(jī)雜質(zhì)直接影響藥品的穩(wěn)定性，并可反映生產(chǎn)工藝本身的情況，了解藥品中無機(jī)雜質(zhì)的情況對評(píng)價(jià)藥品生產(chǎn)工藝的狀況有重要意義。對于無機(jī)雜質(zhì)，各國藥典都收載了經(jīng)典、簡便而又行之有效的檢測方法。對于成熟生產(chǎn)工藝的仿制，可根據(jù)實(shí)際情況，采用藥典收載的方法進(jìn)行質(zhì)量考察及控制。對于采用新生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的新藥，鼓勵(lì)采用離子色譜法及電感耦合等離子發(fā)射光譜－質(zhì)譜（ICP-MS）等分析技術(shù)，對產(chǎn)品中可能存在的各類無機(jī)雜質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析，以便對其生產(chǎn)工藝進(jìn)行合理評(píng)價(jià)，并為制定合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。不揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)采用熾灼殘?jiān)ㄟM(jìn)行檢測。某些金屬陽離子雜質(zhì)（銀、鉛、汞、銅、鎘、鉍、銻、錫、砷、鋅、鈷與鎳等）籠統(tǒng)地用重金屬限度檢查法進(jìn)行控制。因在藥品生產(chǎn)中遇到鉛的機(jī)會(huì)較多，且鉛易積蓄中毒，故作為重金屬的代表，以鉛的限量表示重金屬限度。對某種（些）特定金屬離子或上述方法不能檢測到的金屬離子作限度要求，可采用專屬性較強(qiáng)的原子吸收分光光度法或具有一定專屬性的經(jīng)典比色法（如采用藥典已收載的鐵鹽、銨鹽、硒等的檢查法檢測藥品中微量鐵鹽、銨鹽和硒等雜質(zhì)）。雖然重金屬檢查法可同時(shí)檢測砷，但因其毒性大，且易帶入產(chǎn)品中，故需采用靈敏度高、專屬性強(qiáng)的砷鹽檢查法進(jìn)行專項(xiàng)考察和控制，各國藥典收載的方法已歷經(jīng)多年驗(yàn)證，行之有效，應(yīng)加以引用。（3）殘留溶劑的檢測方法在確定了需要進(jìn)行殘留量研究的溶劑后，需要通過方法學(xué)研究建立合理可行的檢測方法。目前，常用的檢測方法為氣相色譜法（GasChromatography，GC），也有其他一些檢測方法。三、雜質(zhì)來源和控制（一）有機(jī)雜質(zhì)來源和控制工藝雜質(zhì)反應(yīng)物試劑中間體副產(chǎn)物降解產(chǎn)物混入的雜質(zhì)反應(yīng)物試劑工藝雜質(zhì)反應(yīng)物、試劑、中間體鹽酸氨溴索合成副產(chǎn)物異構(gòu)體不同工藝路線桂哌齊特工藝研究副產(chǎn)物異構(gòu)體降解產(chǎn)物不同工藝路線環(huán)丙沙星中間體副產(chǎn)物副產(chǎn)物副產(chǎn)物降解產(chǎn)物降解產(chǎn)物有機(jī)雜質(zhì)的定量方法

有機(jī)雜質(zhì)的檢測一般多采用HPLC法，有時(shí)也采用TLC、GC等其它方法。如采用HPLC法，須采用峰面積法，①外標(biāo)法（雜質(zhì)對照品法）②加校正因子的主成分自身對照法③不加校正因子的主成分自身對照法④峰面積歸一化法。①法定量比較準(zhǔn)確②法應(yīng)對校正因子進(jìn)行嚴(yán)格測定，僅適用于已知雜質(zhì)的控制③法的前提是假定雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)因子基本相同。④法簡便快捷，但因各雜質(zhì)與主成分響應(yīng)因子不一定相同、雜質(zhì)量與主成分量不一定在同一線性范圍內(nèi)、儀器對微量雜質(zhì)和常量主成分的積分精度及準(zhǔn)確度不相同等因素，所以在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用有一定的局限性。

有關(guān)物質(zhì)中包括已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)。已知雜質(zhì)對主成分的相對響應(yīng)因子在0.9-1.1范圍內(nèi)時(shí)，可以用主成分的自身對照法計(jì)算含量，超出0.9-1.1范圍時(shí)，宜用雜質(zhì)對照品法計(jì)算含量，也可用加校正因子的主成分自身對照法。理想的定量方法為已知雜質(zhì)對照品法與未知雜質(zhì)不加校正因子的主成分自身對照法兩者的結(jié)合。研究人員可根據(jù)實(shí)際情況選用合適的定量方法。有機(jī)雜質(zhì)的定量要求1、專屬性為了考察在其他成分存在的條件下，采用的方法是否具有準(zhǔn)確測定出待檢測的有機(jī)雜質(zhì)的能力。2、檢測限通常有機(jī)雜質(zhì)量較低，而每種有機(jī)雜質(zhì)的檢測靈敏度又各不相同，為了考察所采用的方法能否將殘留的少量或微量的有機(jī)雜質(zhì)檢出。3、定量限為保證測定方法的準(zhǔn)確度和精密度，需要進(jìn)行定量限的研究。4、線性在配制對照品溶液時(shí)，對照品溶液濃度很難和規(guī)定的限度達(dá)到完全一致，當(dāng)不一致時(shí)，需要通過標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行換算，這種換算的前提是有關(guān)物質(zhì)的濃度與色譜峰面積直接成正比關(guān)系。5準(zhǔn)確度為了保證檢測結(jié)果能夠代表產(chǎn)品的實(shí)際情況，建議進(jìn)行方法的準(zhǔn)確度考察。6耐用性為考察測定條件發(fā)生細(xì)小變動(dòng)時(shí)，測定方法和結(jié)果是否仍準(zhǔn)確可靠，建議進(jìn)行耐用性考察。（二）無機(jī)雜質(zhì)來源和控制工藝雜質(zhì)反應(yīng)物：鹽試劑：含鉛催化劑：鎳、鈀炭干燥劑：硫酸鹽、氯化物、磷酸鹽pH調(diào)節(jié)劑（兩性藥物）混入的雜質(zhì)反應(yīng)物試劑助濾劑、活性炭A硝化反應(yīng)：68%硝酸+丙酸于125℃反應(yīng)30min。B胺化反應(yīng)：B1氯化，SOCl2+DMF于CH2Cl2中加熱回流3.5hB2胺化，于-15℃滴加異丁胺與CH2Cl2溶液后，加熱回流30min.C氫化反應(yīng)：室溫，RenyNi催化，50psi氫壓力下氫化3h.D環(huán)合反應(yīng)：甲酸中加熱回流4h.E氧化反應(yīng)：16%過氧乙酸+乙醇，于50℃反應(yīng)24h.F胺化反應(yīng)：二氯甲烷+28-30%氨水于0℃20min內(nèi)滴加對甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液。詳細(xì)的精制方法取咪喹莫特成品10g，加5N鹽酸200ml，攪拌加熱至80℃使溶解，過濾除去不溶物，濾液冷卻，用二氯甲烷洗（50mlx2），加入活性炭少許，于80℃加熱15min，濾去活性炭，濾