色譜分離資料講解

色譜分離色譜概述色譜（chromatography）分離技術(shù)是一類(lèi)分離方法的總稱(chēng)，又稱(chēng)色譜法、層析法、層離法等。它是利用不同組分在固定相和流動(dòng)相中的物理化學(xué)性質(zhì)的差別，使各組分在兩相中以不同的速率移動(dòng)而進(jìn)一步分離的技術(shù)。色譜概述加樣，洗脫劑沖洗各組分與固定相無(wú)作用力——與洗脫劑一起流動(dòng)，得不到分離；各組分與固定相有一定作用力——移動(dòng)速率低于流動(dòng)相。各組分與固定相的作用力大小不同——移動(dòng)速率不同，作用力大，移動(dòng)慢，各組分得到分離。1903年Tswett創(chuàng)立色譜法（在碳酸鈣上分離了葉綠素）。由Tswett創(chuàng)立的色譜法分離效率低，分離時(shí)間長(zhǎng)，根據(jù)樣品的不同，一般分離需要幾小時(shí)至幾天?！?0世紀(jì)40年代至50年代初，先后出現(xiàn)了紙色譜）和薄膜色譜法。特點(diǎn)：較經(jīng)典色譜法簡(jiǎn)單、分離時(shí)間短，樣品量要求小?！?952年，James和Martin提出了氣相色譜法（GC)

特點(diǎn)：以氣體作為流動(dòng)相。應(yīng)用范圍廣泛受到人們重視。但對(duì)不易氣化和熱不穩(wěn)定性差的化合物難以分離。20世紀(jì)60年代后期由于新型色譜柱填料的，高壓輸液泵和高靈敏度的監(jiān)測(cè)器的出現(xiàn)，發(fā)展出了高效液相色譜（HPLC）。色譜概述色譜概述1941

Martin和Synge提出液-液色譜理論；1952

James和Martin發(fā)展了氣相色譜；1956

VanDeemter提出速率理論；1967

Kirkland等研制高效液相色譜法；80年代以后出現(xiàn)毛細(xì)管電泳和毛細(xì)管電動(dòng)色譜等一系列新的色譜分析方法。色譜概述幾個(gè)概念色譜柱：進(jìn)行色譜分離用的細(xì)長(zhǎng)管。固定相：管內(nèi)保持固定、起分離作用的填充物。流動(dòng)相：流經(jīng)固定相的空隙或表面的沖洗劑。色譜流程及主要部件操作術(shù)語(yǔ)：①洗脫劑——作為流動(dòng)相的液體。②層析劑——分離技術(shù)中的固定相③展開(kāi)——加入洗脫劑而使各組分分層的操作。④色譜圖——展開(kāi)后各組分的分布情況。⑤洗脫液——洗脫時(shí)從柱中流出的溶液。色譜概述層析柱——徑高比（10：1—1：100）、材質(zhì)（玻璃、有機(jī)玻璃、PVC、不銹鋼等）、耐壓（0.05－10MPa）等泵——恒速、壓力（蠕動(dòng)泵等）餾分收集儀檢測(cè)儀通用型—示差折光、介電常數(shù)、電導(dǎo)等專(zhuān)用型—紫外、熒光、放射性檢測(cè)器等記錄儀、工作站—色譜參數(shù)的選擇和設(shè)定、自動(dòng)化操作、色譜數(shù)據(jù)的采集和存儲(chǔ)，并作實(shí)時(shí)處理、數(shù)據(jù)后處理、自動(dòng)打印出一套完整的色譜分析數(shù)據(jù)……

色譜概述色譜概述島津高效液相檢測(cè)器SPD-20A/V紫外可見(jiàn)雙波長(zhǎng)檢測(cè)器SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器（PDA）RF-20A/xs熒光檢測(cè)器RID-10A示差折光檢測(cè)器CDD-10Avp電導(dǎo)檢測(cè)器ELSD-LTⅡ蒸發(fā)光散射檢測(cè)器ECD電化學(xué)檢測(cè)器RadiochromatographyDetector放射性同位素檢測(cè)器色譜法的優(yōu)點(diǎn)（1）分離效率高。（2）應(yīng)用范圍廣。（3）分析速度快。（4）樣品用量少。（5）靈敏度高。（6）分離和測(cè)定一次完成。和多種波譜分析儀器聯(lián)用（7）易于自動(dòng)化，可在工業(yè)流程中使用。色譜概述色譜法的缺點(diǎn)是處理量小、操作周期長(zhǎng)、不能連續(xù)操作。色譜法的分類(lèi)根據(jù)操作壓力的不同分類(lèi)：低壓色譜：操作壓力<0.5MPa中壓色譜：操作壓力0.5～4.0MPa高壓色譜：操作壓力4.0～40MPa色譜法的分類(lèi)吸附色譜吸附色譜法(adsorptionchromatography，AC)是靠溶質(zhì)與吸附劑之間的分子吸附力的差異而分離的方法。吸附色譜的固定相為固體吸附劑，如有較強(qiáng)極性硅膠、中等極性氧化鋁、非極性炭及特殊作用的分子篩等。吸附色譜是靠溶質(zhì)與吸附劑之間的分子吸附力的差異而分離的方法。吸附力主要是范德華力，有時(shí)也可能形成氫鍵或化學(xué)鍵。吸附法的關(guān)鍵是選擇吸附劑和展開(kāi)劑。基本原理吸附色譜吸附色譜分離過(guò)程示意圖

下列三個(gè)化合物用硅膠吸附色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯（95：5）洗脫，判斷三者流出色譜柱先后順序。

ABC由先到后：

C→B→A

吸附色譜選用吸附色譜法分離化合物時(shí)，必須首先了解被分離化合物的性質(zhì)，然后選擇合適的吸附劑和展開(kāi)劑。被分離化合物、吸附劑和展開(kāi)劑三者關(guān)系配合恰當(dāng)才能得到較好的分離效果。吸附劑與展開(kāi)劑吸附色譜薄層色譜法選擇的主要吸附劑為氧化鋁、硅膠和聚酰胺。色譜用的吸附劑要求一定的形狀與粒度范圍，不同吸附劑用于分離不同類(lèi)型的化合物。吸附劑還必須具有一定的活度，活度太高或過(guò)低都不能使混合物各組分得到有效的分離。在吸附色譜中，組分的展開(kāi)過(guò)程涉及吸附劑、被分離化合物和溶劑三種之間的相互競(jìng)爭(zhēng)。其基本原則主要有兩個(gè)：①展開(kāi)劑對(duì)被分離組分有一定的解吸能力，但又不能太大。②展開(kāi)劑應(yīng)該對(duì)被分離的物質(zhì)有一定的溶解度。常用溶劑極性次序?yàn)椋杭和?lt;環(huán)己烷<四氯化碳<甲苯<苯<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<正丙醇<乙醇<甲醇<水<冰醋酸展開(kāi)劑吸附色譜吸附劑應(yīng)有最大的比表面積和足夠的吸附能力，它對(duì)欲分離的不同物質(zhì)應(yīng)該有不同的解吸能力；與洗脫劑、溶劑及樣品組分不會(huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；還要求所選的吸附劑顆粒均勻，在操作過(guò)程中不會(huì)破裂。吸附劑與洗脫機(jī)選擇的選擇吸附色譜洗脫劑原則上要求所選的洗脫劑純度合格，與樣品和吸附劑不起化學(xué)反應(yīng)，對(duì)樣品的溶解度大，粘度小，容易流動(dòng)，容易與洗脫的組分分開(kāi)。吸附色譜常用的洗脫劑飽和的碳?xì)浠衔铩⒋?、酚、酮、醚、鹵代烷、有機(jī)酸等。選擇吸附劑時(shí)，可根據(jù)樣品的溶解度、吸附劑的種類(lèi)、溶劑極性等方面考慮，極性大的洗脫能力大，因此可先用極性小的作洗脫劑，使組分容易被吸附，然后換用極性大的溶劑作洗脫劑，使組分容易從吸附柱中洗出。吸附色譜影響吸附分離的因素①和功能基極性有關(guān)。極性增加的順序：烷烴、不飽和烴、醚、酯、酮、醛、醇、酚和羧酸，同一類(lèi)化合物極性基團(tuán)越多，極性越。②小分子的化合物比大分子的化合物極性大。③和某些細(xì)微結(jié)構(gòu)有關(guān)，如氫鍵、異構(gòu)體等。吸附色譜薄層吸附色譜分離操作（1）薄層色譜板的制備（2）點(diǎn)樣（3）展開(kāi)（4）顯色干法鋪板(軟板制備)

多用于氧化鋁薄層板的制備。在一塊邊緣整齊的玻璃板上，鋪上適量的氧化鋁，取一合適物品頂住玻璃板右端。兩手緊握鋪板玻璃棒的邊緣，按箭頭方向輕輕拉過(guò)，一塊邊緣整齊、薄厚均勻的氧化鋁薄層即成。1）薄層色譜板的制備吸附色譜濕法鋪板可用于硅膠、聚酰胺、氧化鋁等薄層板的制備，但最常用的是硅膠硬板。為使制成的硅膠板堅(jiān)硬，要加入黏合劑，用硫酸鈣為粘合劑鋪成的板稱(chēng)為硅膠G板，用羧甲基纖維素鈉作黏合劑鋪成的板為硅膠-CMC板。吸附色譜用一根玻璃毛細(xì)管或點(diǎn)樣器，吸取樣品溶液，在距薄層一端約2cm的起始線上點(diǎn)樣，每點(diǎn)間距約2cm，樣品點(diǎn)直徑一般小于0.5cm。注意點(diǎn)樣量要適中，太少時(shí)，某些成分不能被檢出；太多時(shí)容易產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象，即每個(gè)斑點(diǎn)都拉得很長(zhǎng)，互相重疊，不能分開(kāi)。點(diǎn)樣展開(kāi)展開(kāi)操作需要在密閉的容器中進(jìn)行。配好展開(kāi)劑，將展開(kāi)劑（一般2～10mL）倒入層析缸。放置一定時(shí)間，待層析缸被展開(kāi)劑飽和后，再迅速將薄層板放入，密閉，展開(kāi)即開(kāi)始，這樣可防止邊緣效應(yīng)產(chǎn)生。另外，注意在薄板放入層析缸時(shí)，切勿使溶劑浸沒(méi)樣品點(diǎn)。當(dāng)溶劑移動(dòng)到接近薄層上端邊緣時(shí)，取出薄板，劃出溶劑前沿。吸附色譜上行展開(kāi)法和下行展開(kāi)法最常用的展開(kāi)法是上行展開(kāi)，就是使展開(kāi)劑從下往上爬行展開(kāi)；下行展開(kāi)是使展開(kāi)劑由上向下流動(dòng)。由于受重力作用，下行展開(kāi)移動(dòng)較快。

單次展開(kāi)法和多次展開(kāi)法

單向展開(kāi)法和雙向展開(kāi)法吸附色譜顯色也稱(chēng)定位，即用某種方法使經(jīng)色譜展開(kāi)后的混合物斑點(diǎn)呈現(xiàn)顏色，以便觀察其位置(1)紫外線照射法(4)生物顯跡法(2)噴霧顯色法(3)碘蒸汽顯色法顯色吸附色譜洗脫液樣品填充物分部收集玻璃柱柱色譜3.1吸附劑的選擇吸附劑要求：

不能與被分離的物質(zhì)和展開(kāi)劑發(fā)生化學(xué)作用

吸附劑的粒度大小要均勻

柱色譜（ColumnChromatography）實(shí)驗(yàn)室常用⑴氧化鋁（alumina）

氧化鋁的吸附活性來(lái)源于鋁原子上未成鍵電子對(duì)。氧化鋁的活性與含水量有關(guān)，含水量越低，活性越大，吸附力越強(qiáng)。無(wú)水氧化鋁吸附活性特別強(qiáng)。根據(jù)氧化鋁的含水量可將氧化鋁的活性分為五級(jí)。

柱色譜（ColumnChromatography）活性氧化鋁含水量（%）硅膠含水量（%）Ⅰ00Ⅱ35Ⅲ815Ⅳ1025Ⅳ153830酸性氧化鋁（pH=5～4），適用于分離酸性化合物和對(duì)酸穩(wěn)定的中性化合物，如酚類(lèi)物質(zhì)和某些氨基酸類(lèi)等。中性氧化鋁（pH＝7.5），適用與分離生物堿、揮發(fā)油、萜類(lèi)、甾類(lèi)、蒽醌以及在酸堿中不穩(wěn)定甙類(lèi)、酯、內(nèi)酯等化合物。凡是能用酸性或堿性氧化鋁層析分離的物質(zhì)，中性氧化鋁也都適用。堿性氧化鋁（pH9～10），適用于堿性，如生物堿和中性化合物的分離。⑴氧化鋁（alumina）

柱色譜（ColumnChromatography）⑵硅膠（silicagel）

柱色譜（ColumnChromatography）吸附性來(lái)源于硅膠氧原子上未成鍵的電子對(duì)和可以形成氫鍵的羥基。羥基有結(jié)合型（Ⅰ）、活性型（Ⅱ）和游離型（Ⅲ）三種。它們可以與試樣和洗脫劑分子中的極性基團(tuán)或不飽和鍵產(chǎn)生氫鍵締合而起吸附作用，其吸附性強(qiáng)弱為：

（Ⅰ）<（Ⅲ）<（Ⅱ）

柱色譜（ColumnChromatography）

如果將硅膠在200℃以上長(zhǎng)時(shí)間強(qiáng)熱后，則硅原子上結(jié)合的羥基發(fā)生脫水而形成硅氧烷型（Ⅳ），這種不含羥基的硅氧烷型的硅膠吸附性極差。

活性羥基在硅膠表面較小的孔穴中較多，水與硅膠表面的羥基形成水合硅醇，使其失去活性。因此需加熱除去水分。最佳活化條件為105℃—110℃加熱30分鐘。

柱色譜（ColumnChromatography）

硅膠，通常視為酸性吸附劑。一般用來(lái)分離一些酸性和中性有機(jī)物。如有機(jī)酸、萜類(lèi)、氨基酸、甾類(lèi)和一些甙類(lèi)。但是，對(duì)某些酸性弱的試樣，在色層中有分解的危險(xiǎn)。此外，對(duì)于堿性物質(zhì)可發(fā)生不可逆吸附。因此，對(duì)一些堿性物質(zhì)在使用硅膠進(jìn)行層析時(shí)，有必要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。如在硅膠中拌入15％左右的硝酸銀，這種加硝酸銀的硅膠對(duì)有機(jī)物中不飽和鍵有特殊的吸附性，因此，常用它分離一些不飽和化合物。

柱色譜（ColumnChromatography）3.2洗脫劑的選擇選擇原則：

取決于樣品各組分的極性；

極性小的組分用極性小的洗脫劑進(jìn)行洗脫；

極性大的組分用極性大的洗脫劑進(jìn)行洗脫。除單一溶劑外，也可采用混合溶劑，或采用梯度（開(kāi)始是低極性溶劑，后面是高極性溶劑）極性大的洗脫劑對(duì)極性大和小的組分洗脫能力都很強(qiáng)

柱色譜（ColumnChromatography）凝膠色譜凝膠色譜是基于分子大小不同而進(jìn)行分離的一種分離技術(shù)，又稱(chēng)之凝膠過(guò)濾、凝膠滲透過(guò)濾、分子篩過(guò)濾、阻滯擴(kuò)散層析或排阻層析。它具有一系列的優(yōu)點(diǎn)：操作方便、不會(huì)使物質(zhì)變性、適用于不穩(wěn)定的化合物、凝膠不用再生、可反復(fù)使用。缺點(diǎn)：分離速度較慢。凝膠色譜小分子物質(zhì)除了可在凝膠顆粒間隙中擴(kuò)散外，還可以進(jìn)入凝膠顆粒的微孔中，即進(jìn)入凝膠相內(nèi)，在向下移動(dòng)的過(guò)程中，從一個(gè)凝膠內(nèi)擴(kuò)散到顆粒間隙后再進(jìn)入另一凝膠顆粒，如此不斷地進(jìn)入和擴(kuò)散，小分子物質(zhì)的下移速度落后于大分子物質(zhì)，從而使樣品中分子大的先流出色譜柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，這種現(xiàn)象叫分子篩效應(yīng)。凝膠過(guò)濾層析過(guò)程示意圖小分子大分子凝膠基質(zhì)凝膠珠凝膠色譜理想的凝膠過(guò)濾介質(zhì)具有高物理強(qiáng)度及化學(xué)穩(wěn)定性，能夠耐受高溫高壓和強(qiáng)酸強(qiáng)堿，具有高化學(xué)惰性，內(nèi)孔徑分布范圍窄，珠粒顆粒大小均一度高。目前，常用的有葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等。凝膠色譜葡聚糖凝膠是應(yīng)用最廣泛的一類(lèi)凝膠，國(guó)外商品名為Sephadex。它由葡聚糖Dextran交聯(lián)而得。交聯(lián)劑在原料總質(zhì)量中所占的百分?jǐn)?shù)叫交聯(lián)度。交聯(lián)度越大，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越緊密，吸水量越小，吸水量越小，吸水后體積膨脹越少；反之，交聯(lián)度越小，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越疏松，吸收量越多，吸水后體積膨脹越大。凝膠色譜瓊脂糖凝膠來(lái)源于一種海藻多糖瓊脂，是一種天然凝膠，不是共價(jià)交聯(lián)，是以氫鍵交聯(lián)的。它與葡聚糖不同，孔隙度是以改變瓊脂糖濃度而達(dá)到的。瓊脂糖凝膠的化學(xué)穩(wěn)定性不如葡聚糖凝膠。用瓊脂糖凝膠進(jìn)行分離操作的適宜工作條件是在pH為4.5～9，溫度0～40℃。瓊脂糖凝膠對(duì)硼酸鹽有吸附作用，不能用硼酸緩沖液。凝膠色譜是一種人工合成凝膠，是以丙烯酰胺為單位，由甲叉雙丙烯酰胺交聯(lián)成的。其穩(wěn)定性比葡聚糖凝膠好。洗脫時(shí)不會(huì)有凝膠物質(zhì)被洗脫下來(lái)。在pH2~11范圍穩(wěn)定。缺點(diǎn)是不耐酸，遇酸時(shí)酰胺鍵會(huì)水解成羧基，使凝膠帶有一定的離子交換基團(tuán)。凝膠色譜常用的疏水凝膠為聚甲基丙烯酸酯凝膠或以二乙烯苯為交聯(lián)劑的聚苯乙烯(如StyrogelBio-Beads-S)凝膠?！癝tyrogel”商品有11種型號(hào)，具有大網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)，可用于分離分子量1600到40，000，000的生物大分子，適用于有機(jī)多聚物，分子量測(cè)定和脂溶性天然物的分級(jí)，凝膠機(jī)械強(qiáng)度好。凝膠色譜多孔玻璃珠的化學(xué)和物理穩(wěn)定性號(hào)，機(jī)械強(qiáng)度高，不但抵御酶及微生物的作用，還能夠耐受高溫滅菌和較強(qiáng)烈的反應(yīng)條件。缺點(diǎn)是親水性不強(qiáng)，對(duì)蛋白質(zhì)尤其是堿性蛋白質(zhì)有非特性性吸附，而且可供連接的化學(xué)活性基團(tuán)也少。凝膠色譜由聚丙稀酰胺和瓊脂糖混合組成的載體已投入應(yīng)用。它的特點(diǎn)是載體既有羥基又有酰胺基，并且都能單獨(dú)與配基使用。但這類(lèi)載體不能接觸強(qiáng)堿，為了避免酰胺水解，使用溫度不能超過(guò)40℃。凝膠色譜凝膠的預(yù)處理市售凝膠必須經(jīng)過(guò)充分溶漲后才能使用，如果溶漲不充分，則裝柱后凝膠繼續(xù)溶漲，造成填充層不均勻，影響分離效果。在燒杯中將干燥凝膠加水或緩沖液，攪拌、靜置、傾去上層混懸液、除去過(guò)細(xì)的粒子。如此反復(fù)多次，直至上層澄清為止。超臨界流體色譜SFC48定義：以超臨界流體為流動(dòng)相的流動(dòng)相的色譜分析法，具有GC和HPLC的優(yōu)點(diǎn)，適于分析GC不能分析的高沸點(diǎn)、低揮發(fā)性的試樣。超臨界流體：

在高于臨界壓力與臨界溫度時(shí)，物質(zhì)的一種狀態(tài)。性質(zhì)介于液體和氣體之間。超臨界流體即不是氣體，也不是液體，而是一種介于二者之間的一種對(duì)分離很有利的流體。491）性質(zhì)介于液體和氣體之間;氣體的低黏度，傳質(zhì)阻力小，可以快速高效的分離；液體的高密度，適于低溫下分離熱不穩(wěn)定、分子量大的物質(zhì)SFC的擴(kuò)散系數(shù)、粘度和溶解力都是密度的函數(shù)，可通過(guò)改變SFC的密度調(diào)節(jié)組分分離，超臨界流體的密度與壓力有關(guān)。超臨界流體色譜SFC50SFC色譜柱：填充柱dp:

3~10μm,Lcol:

25cm,內(nèi)徑:幾mm交聯(lián)毛細(xì)管柱df:

0.05~1μm

,Lcol:

10~20cm,內(nèi)徑:0.05~1μm

SFC的固定相：固體吸附劑（硅膠）；鍵合到毛細(xì)管壁上的高聚物優(yōu)點(diǎn)：無(wú)色、無(wú)味、無(wú)毒、易得、對(duì)各類(lèi)有機(jī)物溶解性好，在紫外光區(qū)無(wú)吸收；缺點(diǎn)：極性太弱；加少量甲醇等改性；SFC的流動(dòng)相：超臨界流體色譜SFC51壓力效應(yīng)：在SFC中，壓力變化對(duì)容量因子產(chǎn)生顯著影響，超流體的密度隨壓力增加而增加，密度增加提高溶劑效率，淋洗時(shí)間縮短。CO2流動(dòng)相，當(dāng)壓力改變：7.0→9.0×106Pa，則：C16H34的保留時(shí)間：25→5min。程序升壓超臨界流體色譜SFC52高壓泵無(wú)脈沖的注射泵，通過(guò)電子壓力傳感器和流量檢測(cè)器，計(jì)算機(jī)控制流動(dòng)相的密度和流量；檢測(cè)器

可采用HPLC的檢測(cè)器(UV,FL)，也可采用GC的FID檢測(cè)器.超臨界流體色譜SFC聚苯醚低聚物的SFC分析色譜柱：毛細(xì)管柱(10cm×63mi.d.)固定相：鍵合二甲基聚硅氧烷；流動(dòng)相：CO2；柱溫：120C；程序升壓；SFC即可分析GC中不適用的高沸點(diǎn)、低揮發(fā)性樣品和HPLC中缺少檢測(cè)功能團(tuán)的樣品，它又比HPLC有更高的柱效和更快的分析速度。分析對(duì)象：天然產(chǎn)物、高聚物、表面活性劑等。超臨界流體色譜SFC54SFC的三次起落：1960’s的先驅(qū)性研究；1980’s初形成浪潮，認(rèn)為會(huì)掀起分析方法的革命；目前，大公司紛紛撤去SFC分離設(shè)備，放棄進(jìn)一步發(fā)展的計(jì)劃。缺點(diǎn)：整個(gè)體系都要在高壓下進(jìn)行；b.流動(dòng)相的選擇有限(CO2)；c.儀器制造復(fù)雜，昂貴；G.Guiochon(AmericanLab1998,(9),14~15)指出成功和普及并成為定量分析方法必須具備：⑴易于使用，操作費(fèi)用低，⑵能夠得到準(zhǔn)確，可重復(fù)的定量結(jié)果，⑶要能夠解決至少一個(gè)分析化學(xué)中的重要問(wèn)題.如，1960’s的GC用于石油和石化產(chǎn)品分析；1970’s的HPLC用于藥物、代謝物和生物化學(xué)品的分析。超臨界流體色譜SFC55超臨界萃?。夯诜蛛x組分溶解度及其與超臨界流體分子間作用力的差別，當(dāng)超臨界溶劑流過(guò)樣品時(shí)，使分離組分溶解在超臨界溶劑中。超臨界流體有很好的溶劑化能力，比液體有更大的擴(kuò)散系數(shù)，而且表面張力接近零，較容易滲透到固體的孔隙里，使分離效率和速度大為提高。常用的超臨界流體在常壓下多為氣體，易同萃取溶質(zhì)完全分離，使樣品得到充分的濃縮而不干擾下一步的分析，

超臨界流體色譜SFC56基本解決了溶劑對(duì)環(huán)境的污染萃取時(shí)間短:15~45min萃取更徹底可進(jìn)行熱敏樣品及痕量樣品萃取節(jié)省萃取費(fèi)用超臨界流體色譜SFC分析色譜工業(yè)制備色譜過(guò)載適當(dāng)?shù)姆蛛x度峰形不對(duì)稱(chēng)柱壓降適中溶劑回收追求最低成本低進(jìn)樣量分離度、靈敏度盡可能高色譜峰形較對(duì)稱(chēng)色譜柱壓降大溶劑廢棄工業(yè)色譜的特點(diǎn)工業(yè)色譜模擬移動(dòng)床模擬移動(dòng)床色譜分離度速度回收率上載量以純度、最低成本為出發(fā)點(diǎn)在四大要素之間尋求平衡點(diǎn)工業(yè)色譜柱工業(yè)色譜應(yīng)用的基本原則工業(yè)色譜模擬移動(dòng)床色譜rrrr固定相

選擇工業(yè)色譜的分離介質(zhì)類(lèi)型(正相、反相、手性形狀(球形、無(wú)規(guī)則)顆粒度粒徑分布吸附性能(或交換容量)裝填方式工業(yè)色譜模擬移動(dòng)床色譜工業(yè)色譜活性炭硅膠(包括化學(xué)鍵合相硅膠)分子篩活性氧化鋁多孔玻璃多孔氧化鋯多孔二氧化鈦多糖衍生化CSPs環(huán)糊精及衍生化CSPs

Pirkle型CSPs

酒石酸二酰胺型CSPs

大環(huán)抗生素類(lèi)CSPs

蛋白質(zhì)類(lèi)CSPs螺旋型聚合物類(lèi)CSPs工業(yè)色譜的分離介質(zhì)有機(jī)質(zhì)類(lèi)手性填料無(wú)機(jī)質(zhì)類(lèi)大孔吸附樹(shù)脂離子交換樹(shù)脂

如：聚丙烯酸型纖維素型等凝膠

如：葡聚糖凝膠瓊脂糖凝膠聚丙烯酰胺凝膠模擬移動(dòng)床色譜工業(yè)色譜工業(yè)色譜的分離介質(zhì)n-Hexane

正己烷n-butylether丁基醚dilsopropylerher

二異丙基醚methylteriarybutylerther

三甲基丁醚di-ethylether

二乙基乙醚n-butanol正丁醇2-propanol2-丙醇1-propanol1-丙醇Ethanol

乙醇Methanol

甲醇Terahydrofuran

四氫呋喃Pyridine

吡啶Methoxyethanol

甲氧基乙醇極性(樣品溶解性、色譜保留)理化性質(zhì)(粘度、互溶性、UV和RI特性)安全性(揮發(fā)性、爆炸極性、毒性)價(jià)格回收能耗(沸點(diǎn)、蒸發(fā)焓)常用溶劑模擬移動(dòng)床色譜模擬移動(dòng)床（SimulatedMovingBedSMB）是一種可以用于層析、吸附、離子交換、梯度洗脫等一種連續(xù)運(yùn)行的色譜設(shè)備主體；與吸附劑結(jié)合，多個(gè)單體柱組合，通過(guò)“模擬移動(dòng)”工藝可以實(shí)現(xiàn)高效、廉價(jià)、連續(xù)分離。最基本功能：是能夠?qū)崿F(xiàn)分離技術(shù)工業(yè)化與連續(xù)化。模擬移動(dòng)床色譜研究進(jìn)展20世紀(jì)60年代發(fā)展起來(lái)的，主要用于石油化工產(chǎn)品的分離;1969年，美國(guó)UOP公司（環(huán)球石油公司）將SMB分離技術(shù)用于分離對(duì)二甲苯和間二甲苯;1993年，法國(guó)Seperex公司將SMB分離技術(shù)用于藥物和精細(xì)化工領(lǐng)域;近些年，SMB分離技術(shù)研究主要集中在糖類(lèi)分離、同分異構(gòu)體分離、手性化合物分離等方面。模擬移動(dòng)床色譜研究進(jìn)展國(guó)際上糖醇工業(yè)中多數(shù)采用了SMB分離技術(shù)。并利用SMB進(jìn)行脫色、除蛋白、離子交換和脫鹽等。

德國(guó)研究與應(yīng)用居世界領(lǐng)先地位；

美國(guó)、法國(guó)、日本應(yīng)用的也比較成熟；

國(guó)外已遍及石油化工、食品、精細(xì)化工、生物發(fā)酵和醫(yī)藥等領(lǐng)域應(yīng)用。

模擬移動(dòng)床色譜工業(yè)化SMBsysteminAerojetFineChemicalsSMBsysteminDaicel模擬移動(dòng)床色譜研究進(jìn)展SMB通過(guò)料液進(jìn)出口位置的依次、定時(shí)移動(dòng)實(shí)現(xiàn)分離設(shè)備的模擬移動(dòng)。模擬移動(dòng)床色譜目前，我國(guó)生物、藥物及農(nóng)副產(chǎn)物中活性化合物的色譜分離純化使用的是工業(yè)制備色譜。存在的瓶頸問(wèn)題是：分離成本高、制備效率較低、設(shè)備造價(jià)高。為了改變這種現(xiàn)狀，開(kāi)始注重研究模擬移動(dòng)床色譜分離技術(shù)（SMB）的應(yīng)用。研究進(jìn)展模擬移動(dòng)床色譜可連續(xù)分離操作；可根據(jù)生物、藥物活性成分的種類(lèi)調(diào)試不同的分離方法（層析、離交、吸附等等）；制備效率高，提純效果較一般工業(yè)制備色譜分離高出40%。運(yùn)行成本低，使加工成本降50%，甚至80%。

SMB的特點(diǎn)模擬移動(dòng)床色譜黑龍江省農(nóng)產(chǎn)品加工工程技術(shù)研究中心

XZ20Z-36L型模擬移動(dòng)床中試設(shè)備模擬移動(dòng)床色譜SMB應(yīng)用前景功能性物料制備（皂甙、異黃酮、糖甙……）高純度食品配料、食品添加劑（果糖漿、低聚木糖……）醫(yī)藥石油……化工……模擬移動(dòng)床色譜展望

SMB技術(shù)是一種先進(jìn)的分離技術(shù)，但是由于其系統(tǒng)配置及操作參數(shù)的確定較為復(fù)雜，且長(zhǎng)期為國(guó)外專(zhuān)利所壟斷，售價(jià)極高，限制了它在我國(guó)的推廣利用。隨著生命科學(xué)、生物技術(shù)和醫(yī)藥技術(shù)的快速發(fā)展，各種高附加值的活性成分需要研究開(kāi)發(fā)，越來(lái)越多的單體成份及手性藥物需要分離；開(kāi)發(fā)我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的SMB裝置及這一先進(jìn)技術(shù)裝備的應(yīng)用與工業(yè)放大是極有意義的。模擬移動(dòng)床色譜南北“金銀花”入典之戰(zhàn)湖南省紀(jì)委預(yù)防腐敗室副主任陸群在其新浪實(shí)名微博“御史在途”稱(chēng)，國(guó)家藥典委把中國(guó)南方地區(qū)傳承上千年的“金銀花”更名為“山銀花”后，給數(shù)以千萬(wàn)計(jì)的百姓造成重大經(jīng)濟(jì)損失。陸群指稱(chēng)這不是表面上的一個(gè)學(xué)術(shù)問(wèn)題，中間存在黑幕，為此實(shí)名舉報(bào)國(guó)家食藥監(jiān)總局。

中藥指紋圖譜借用DNA指紋圖譜發(fā)展而來(lái)，最先發(fā)展起來(lái)的是中藥色譜指紋圖譜。中藥色譜指紋圖譜是一種綜合的，可量化的色譜鑒定手段。借以鑒別真?zhèn)?，評(píng)價(jià)原料藥材、半成品和成品質(zhì)量均一性和穩(wěn)定性。其基本屬性是“整體性”和“模糊性”。中藥指紋色譜中藥質(zhì)量控制現(xiàn)狀《中國(guó)藥典》關(guān)于藥材所收錄的信息【浸出物】【炮制】【性味與歸經(jīng)】【名稱(chēng)】【性狀】【鑒別】【檢查】【含量測(cè)定】【功能與主治】【用法與用量】【貯藏】【來(lái)源】宏觀特征鑒別微觀特征鑒別生藥學(xué)動(dòng)物分類(lèi)學(xué)植物分類(lèi)學(xué)礦物學(xué)微生物分類(lèi)學(xué)藥物分析學(xué)經(jīng)驗(yàn)鑒別定性鑒別含量測(cè)定指標(biāo)成分、對(duì)照藥材齊墩果酸、熊果酸、大黃酸、槲皮素、小檗堿目前中藥質(zhì)量控制的局限●缺乏化學(xué)對(duì)照品●化學(xué)對(duì)照品缺乏專(zhuān)屬性●物質(zhì)群體間的量化特征無(wú)法體現(xiàn)黃柏、黃連——小檗堿、巴馬亭的比例人參、西洋參或三七——幾種人參皂苷的比例●中藥整體的用藥的特色無(wú)法體現(xiàn)