微生物實驗室質(zhì)量控制

微生物實驗室質(zhì)量控制第一頁，共五十四頁，2022年，8月28日質(zhì)量控制相關(guān)定義質(zhì)量控制：滿足質(zhì)量要求的操作技術(shù)和活動。質(zhì)量保證：為了滿足實驗室質(zhì)量要求，制定相應(yīng)的計劃，實施證明（記錄）所進行的一系列的系統(tǒng)活動外部質(zhì)量控制：通過互相校準(zhǔn)和/或檢驗對實驗室的操作和結(jié)果所進行的控制內(nèi)部質(zhì)量控制：實驗室內(nèi)部采取的以對比分析、跟蹤以及相關(guān)方法，對實驗室工作的連續(xù)性控制計劃。質(zhì)量手冊：是描述質(zhì)量系統(tǒng)元素的文件或文件的集合。第二頁，共五十四頁，2022年，8月28日實驗室要求組織：按國家實驗室認可的概念，是指一個能夠承擔(dān)法律責(zé)任的實體。這里所指的是實驗室（微檢室）內(nèi)建立的質(zhì)量管理的保證體系。人員房屋滿足檢測工作需要。設(shè)備第三頁，共五十四頁，2022年，8月28日人員要求實驗室人員的分類：管理人員、技術(shù)人員、技術(shù)支持人員等。相應(yīng)崗位的人員，應(yīng)具備相應(yīng)的技術(shù)能力，相應(yīng)的技術(shù)能力證明（證書及證件）。微生物檢驗室因有相應(yīng)技術(shù)能力的人負責(zé)室內(nèi)的技術(shù)工作。并設(shè)立質(zhì)量監(jiān)督員。第四頁，共五十四頁，2022年，8月28日房屋條件要求房屋要求：具有適宜、足夠?qū)挸?、通風(fēng)有良好的照明。房屋內(nèi)墻面及地等應(yīng)采用易于清潔的材料，保持房間清潔。房間的設(shè)置，以其開展的工作內(nèi)容加以分用，設(shè)立專用房間。房間的大小還應(yīng)根據(jù)從事實驗人員的進入數(shù)量上加以考慮。第五頁，共五十四頁，2022年，8月28日環(huán)境設(shè)施要求專用房間的溫濕度控制與記錄（樣品存放室）特殊環(huán)境的微生物指標(biāo)控制與記錄（無菌室等）專用工作室的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和定期的檢測校準(zhǔn)程序。（潔凈室等）特殊環(huán)境中的專用設(shè)施質(zhì)量控制應(yīng)符合有關(guān)要求（凈化工作臺）第六頁，共五十四頁，2022年，8月28日環(huán)境設(shè)施的相關(guān)技術(shù)指標(biāo)凈化室、凈化工作區(qū)域、潔凈環(huán)境按國家及部頒標(biāo)準(zhǔn)進行檢測?？諝鉂崈舳戎笜?biāo)：檢測頻率及檢測方法。一次/月；空氣細菌檢測（沉降法）。級別≥0.5μm塵粒(個/L)≥5μm塵粒(個/L)活菌顆粒平均數(shù)(cfu/平板)100≤3.5≤0.0≤1.010000≤350.0≤2.5≤3.0第七頁，共五十四頁，2022年，8月28日設(shè)備/儀器要求總則滿足開展相關(guān)檢測項目的要求。制定相關(guān)設(shè)備/儀器的作業(yè)指導(dǎo)書。設(shè)備/儀器的檢定校準(zhǔn)，特別室新購儀器的檢定。設(shè)備/儀器分別以送檢、送校、自檢、自校表示其所檢定的狀態(tài)。。設(shè)備/儀器的運行檢查計劃。設(shè)備/儀器的運行狀況及適用記錄維修后設(shè)備/儀器的再校準(zhǔn)或檢查，并具有完整的檢查記錄。第八頁，共五十四頁，2022年，8月28日設(shè)備控制和程序微生物檢驗常用需監(jiān)控的設(shè)備和儀器1培養(yǎng)箱（生化培養(yǎng)箱或CO2培養(yǎng)箱等）、干燥箱、高壓滅菌鍋、凈化工作臺、pH計、冰箱，（低溫冰箱或冷柜）溫度計、紫外燈、顯微鏡、離心機、天平、。2小計量容器3微生物測定儀器、微生物檢定儀器、空氣采樣器、酶標(biāo)儀專用等。第九頁，共五十四頁，2022年，8月28日溫度計實驗室必須要有工作溫度計和參照溫度計。工作溫度計：用于日常溫度檢查。參照溫度計：用于校正工作的溫度計。溫度計運行檢查：一般可采用一次/半年的運行檢查。日常檢查、校準(zhǔn)檢查、運行檢查等都應(yīng)做好相應(yīng)的技術(shù)記錄。第十頁，共五十四頁，2022年，8月28日培養(yǎng)箱、水浴箱和冰箱的溫度控制根據(jù)培養(yǎng)物性質(zhì)及溫度要求，培養(yǎng)箱應(yīng)分別設(shè)置（以用途和溫度分）培養(yǎng)箱的溫差要求，一般顯示值與實測值相差不大于±1℃，箱體內(nèi)各點溫差（內(nèi)部的溫度均衡性）以及溫度波動同樣不大于±1℃。溫度監(jiān)控方法：可將工作溫度計置甘油中，放入待測箱體內(nèi)，觀察工作溫度計的溫度，最好1-2次/天監(jiān)控記錄，第十一頁，共五十四頁，2022年，8月28日高壓滅菌鍋的溫度控制（一）高壓滅菌鍋；生物指示菌法（常用）、化學(xué)變色紙片及高壓滅菌鍋溫度計等方法進行檢測。生物指示菌法是一種高壓滅菌鍋的效果顯示法。高壓滅菌鍋由專人按作業(yè)指導(dǎo)書操作，并做好每一次的作業(yè)記錄。高壓滅菌鍋使用時，內(nèi)置物品不能太多，單位體積內(nèi)的內(nèi)容物（每瓶內(nèi)的培養(yǎng)基）不能太多。同時應(yīng)注意內(nèi)容物不同耐受溫度?？偟谋┞稌r間最好不要超過45min。第十二頁，共五十四頁，2022年，8月28日高壓滅菌鍋的溫度控制（二）高壓滅菌鍋日常工作記錄應(yīng)包含以下信息：高壓滅菌的材料、開始時間、壓力/溫度、取出時間、高壓滅菌膠帶的顏色變化（日常常用無菌培養(yǎng)代替）高壓滅菌鍋溫度波動范圍：110，115和121±2℃。高壓滅菌鍋校準(zhǔn)周期一般在半年。第十三頁，共五十四頁，2022年，8月28日干燥滅菌箱溫度控制干燥滅菌箱日常工作記錄中應(yīng)包括以下信息：開始的時間、到達滅菌溫度時的時間、取出的時間（或關(guān)閉時間）。干燥滅菌箱的溫度校準(zhǔn)；用參考溫度計進行溫度測試。干燥滅菌箱溫度要求與精確度：160±5℃或180±5℃。前者為滅菌2h，后者為30min。干燥滅菌箱校準(zhǔn)時間一般為一年。第十四頁，共五十四頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基配制用蒸餾水的控制對于蒸餾水器來說：按設(shè)備說明，定期清潔離子交換器和更換離子交換材料。檢測要求：西歐標(biāo)準(zhǔn)為微生物檢驗用蒸餾水的特定電導(dǎo)率＜0.5ms/m；細菌數(shù)＜50cfu/ml。我們?nèi)粘Ｓ玫臉?biāo)準(zhǔn)為＜10ms/m，未見有細菌指標(biāo)。檢測頻率：1次/每月。蒸餾水定點供應(yīng)，并做好相應(yīng)的質(zhì)量控制，記錄檢測結(jié)果。第十五頁，共五十四頁，2022年，8月28日天平的管理天平放置要求：無振動、無氣流影響及水平臺面上。天平要有使用及運行檢查記錄。天平作為計量儀器是列入國家強制檢定的范圍，一般1次/年進行檢定。運行檢查頻率按運行計劃或按產(chǎn)品（天平生產(chǎn)廠家）給出的標(biāo)準(zhǔn)重量單位進行對照。第十六頁，共五十四頁，2022年，8月28日容積的控制（一）通過一定的控制方法，保證高壓滅菌后的稀釋劑滿足標(biāo)準(zhǔn)用量。采取稱中法來測定蒸發(fā)量，體積100ml的稀釋劑起重量為101g。高壓夠體積偏差不得超過1%。采取先高壓后定量分裝，可避免因高壓造成的體積誤差。對保存的定量液體應(yīng)在使用時，注意補充容積。第十七頁，共五十四頁，2022年，8月28日容積的控制（二）吸管的控制：通過小計量容器校準(zhǔn)，后使用。小計量容器吸管、容量瓶、量筒等玻璃器皿，校準(zhǔn)周期一般為1-2次/一年。小計量容器日常使用檢查可每周進行一次，包括容器的完整性。并做好相應(yīng)的記錄。第十八頁，共五十四頁，2022年，8月28日pH計pH計使用前應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液進行校準(zhǔn)。緩沖液使用有效期：PH4.00約1年

PH7.00約6個月

pH9.00約6個月pH計的維護：電極外表的定期清洗；電極敏感性檢測及極性恢復(fù)。第十九頁，共五十四頁，2022年，8月28日凈化工作臺的控制水平流凈化工作臺工作區(qū)域，要求潔凈度為100級?？諝獬两?0min，細菌數(shù)＜1個/皿。垂直流凈化工作臺，細菌數(shù)＜0.49個/皿.凈化工作臺運行檢查頻次：1次/月主要是細菌沉降檢測。凈化工作臺高效過濾膜一般為一年更換一次，并同時進行粒子與細菌沉降檢測。第二十頁，共五十四頁，2022年，8月28日紫外線燈的控制檢測方法：儀器測試法和生物測試法。前者是通過專用儀器檢測紫外燈管發(fā)射的紫外光強度。國家消毒技術(shù)規(guī)范中表明在距離照射無1米處，要求其強度為90。生物測試法：采用一定的菌培養(yǎng)物，經(jīng)一定比例稀釋，菌量控制在200-250個/0.5ml，涂布平板在紫外燈光下照射，2min，同時設(shè)置普通光源的對照組，后置37℃48h，計算其殺滅率。要求殺滅率達99%。第二十一頁，共五十四頁，2022年，8月28日顯微鏡的控制顯微鏡應(yīng)制定作業(yè)指導(dǎo)書，日常維護記錄及自校記錄。顯微鏡應(yīng)置于無振動，避免灰塵，防潮等要求的環(huán)境。第二十二頁，共五十四頁，2022年，8月28日其它微生物檢測專用儀器的控制細菌鑒定儀、酶標(biāo)儀等設(shè)備，工作中常用陽性對照檢測其功能的正常性。儀器的檢定則按有關(guān)的部門檢定或按自校作業(yè)指導(dǎo)書進行。儀器的使用登記、校準(zhǔn)計劃、校準(zhǔn)記錄等文件存檔。儀器專人使用、操作者應(yīng)取得相應(yīng)的崗位培訓(xùn)合格，持證上崗。第二十三頁，共五十四頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基質(zhì)量控制正確進行培養(yǎng)基質(zhì)量控制，并作為一項經(jīng)常性的工作，建立完整的檢驗資料，是實驗室今后通過相應(yīng)級別的認證，在整個檢驗質(zhì)量控制體系中所必須具備的文件資料?，F(xiàn)有的依據(jù)：衛(wèi)生部1993年發(fā)布的食品檢驗用干燥培養(yǎng)基生產(chǎn)質(zhì)量控制。但這個標(biāo)準(zhǔn)不完善。第二十四頁，共五十四頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的分類按其成分分類：有天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。按用途分類：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、增菌培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基及厭氧培養(yǎng)基。按培養(yǎng)基的形態(tài)分類：液體培養(yǎng)基、流體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基及固體培養(yǎng)基。根據(jù)培養(yǎng)基的劑型不同分類：新鮮配制培養(yǎng)基和干燥培養(yǎng)基兩種。第二十五頁，共五十四頁，2022年，8月28日檢驗中常用的培養(yǎng)基水質(zhì)檢測用培養(yǎng)基：7種化妝品檢驗用培養(yǎng)基：8種食品檢驗用培養(yǎng)基：常用的有37種，110種被列入了GB4789中，其中生化試驗培養(yǎng)基23種，一般和專用培養(yǎng)基89種。食品、化妝品及涉水產(chǎn)品等產(chǎn)品微生物檢驗常規(guī)項目中所用的增菌分離培養(yǎng)基有所不同，對于菌種鑒定所用的培養(yǎng)基，各類產(chǎn)品分離的菌種其鑒定所用的培養(yǎng)基基本相同。

第二十六頁，共五十四頁，2022年，8月28日常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制（一）檢驗項目與方法：對新批號的干燥培養(yǎng)基物理、化學(xué)及生物學(xué)指標(biāo)鑒定A：感官（外觀）研細程度和顏色（溶解前后），透明度，雜質(zhì)等；B：PH測定，按各種培養(yǎng)基要求的PH±0.2，蒸餾水的PH應(yīng)在之間。C：生物學(xué)指標(biāo)檢定，被檢培養(yǎng)基相應(yīng)細菌生長率測試；菌落大小及特征的檢測。第二十七頁，共五十四頁，2022年，8月28日常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制（二）生長率測試：適用與液體和固體培養(yǎng)基：將菌培養(yǎng)液，用生理鹽水做倍比稀釋，取合適稀釋度進行平板計數(shù)或接種被檢的培養(yǎng)基試管，同時以按相關(guān)的培養(yǎng)基國標(biāo)配方新鮮配制的培養(yǎng)基進行對照。不低與10%。第二十八頁，共五十四頁，2022年，8月28日常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制（三）菌落大小測試：劃線分離測試菌，取10個菌落測量直徑大小，其直徑均值與新鮮配制的培養(yǎng)基無統(tǒng)計學(xué)差異。第二十九頁，共五十四頁，2022年，8月28日常用培養(yǎng)基檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌株甲型副傷寒沙門菌50002傷寒沙門菌50096

乙型副傷寒沙門茵鴨沙門茵50083

鼠傷寒沙門氏菌痢疾志賀菌1型5157O福氏志賀菌2大腸埃希菌25922（ATCC）金黃色葡萄球菌25923（ATCC普通變形桿菌肺炎克雷伯菌肺炎亞種弗勞地枸櫞酸桿菌4197綠膿桿菌27853（ATCC）副溶血性弧菌第三十頁，共五十四頁，2022年，8月28日常用培養(yǎng)基質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

外觀和理化標(biāo)準(zhǔn)：干粉顏色：淡黃色粉末或呈現(xiàn)本培養(yǎng)基特有的顏色溶解后培養(yǎng)基色澤：清晰透明（含瓊脂除外）淡黃色或特有的色澤；滅菌后的培養(yǎng)基PH：7.2±2℃為多；個別弧菌檢驗用培養(yǎng)基pH值偏高為：8.0±2℃生物學(xué)指標(biāo)：菌落特征及菌落大小。第三十一頁，共五十四頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基保存環(huán)境

制成的培養(yǎng)基保存環(huán)境為4℃冰箱，如制成平板則用塑料袋包裝置冰箱保存，干燥培養(yǎng)基干粉含有活性物質(zhì)、遇熱易分解的物質(zhì)應(yīng)仔細查看存放條件，多數(shù)也須放在2-8℃條件保存。有的培養(yǎng)基則以存放于10-15℃條件為易。如含有高濃度膽鹽的培養(yǎng)基。第三十二頁，共五十四頁，2022年，8月28日養(yǎng)基制備控制程序

培養(yǎng)基配制所用的儀器設(shè)備培養(yǎng)基配制所用的儀器設(shè)備必須經(jīng)過相應(yīng)的鑒定。配制培養(yǎng)基所用的用具及容器配制培養(yǎng)基所用的用具及容器必須是清潔或是滅菌的，一些特殊不易洗刷清潔的玻璃器皿，必要時可用重鉻酸鉀硫酸清潔浸泡后，取出置5%氫氧化鈉溶液浸泡數(shù)分鐘，再用3%鹽酸溶液進行中和，然后用清水沖洗，烘干后備用。培養(yǎng)基配制原料，試劑質(zhì)量控制第三十三頁，共五十四頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的配制程序（一）不同的培養(yǎng)基配制的程序有所不同，但一般培養(yǎng)基配制程序主要有以下7個步驟、調(diào)配、融化、矯正pH、澄清過濾、分裝、滅菌及鑒定。注意點：配制時注意各類成分的用途。pH測定干燥培養(yǎng)基在工廠生產(chǎn)時，對培養(yǎng)基PH進行了一定的調(diào)試，在實際工作中，由于配制的環(huán)境、配制所用的溶劑（蒸餾水）PH等條件有所不同，都會對所用的培養(yǎng)基PH要有所影響。因此對于干燥培養(yǎng)基配制，同樣需要進行PH測驗。第三十四頁，共五十四頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的配制程序（二）配制好的培養(yǎng)基（尤其是糖發(fā)酵管）不宜久放。，因為培養(yǎng)培養(yǎng)基吸收空氣中的二氧化碳，會使培養(yǎng)基變酸，從而影響細菌的生長。培養(yǎng)基中的抑制劑及指示劑一定要精確稱量，抑制劑要注意合理配伍。第三十五頁，共五十四頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基主要原料的質(zhì)量控制，

配制培養(yǎng)基的主要原料有蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、膽鹽、無機鹽和瓊脂等，這些主要原料的有劣，直接影響到培養(yǎng)基的質(zhì)量，由此也將影響檢驗質(zhì)量。指標(biāo)有感官、理化、物理、生物學(xué)。第三十六頁，共五十四頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基相關(guān)試劑的質(zhì)量控制培養(yǎng)基相關(guān)試劑的質(zhì)量控制及陰、陽性對照菌株試驗。對做生化反應(yīng)的各類試劑，在配就后均應(yīng)進行各項必要的鑒定。用已知陰、陽性菌株進行對照試驗。對于其它如氧化酶、觸酶、染色液等也同樣需要經(jīng)鑒定后用于試驗。第三十七頁，共五十四頁，2022年，8月28日不合格培養(yǎng)基可能的原因（一）

干燥培養(yǎng)基結(jié)塊l

培養(yǎng)基過于陳舊l

培養(yǎng)基處于潮濕環(huán)境中l(wèi)

培養(yǎng)基生產(chǎn)時水分過高PH偏離規(guī)定值l

培養(yǎng)基過于陳舊l

配制時所使用的蒸餾水非中性l

培養(yǎng)基過度滅菌第三十八頁，共五十四頁，2022年，8月28日不合格培養(yǎng)基可能的原因（二）培養(yǎng)基不清澈l

使用了劣質(zhì)水l

培養(yǎng)基PH值不對l

使用了不同的容器制備l

生產(chǎn)原料精度不夠l

培養(yǎng)基過度滅菌凝固溫度過高l

培養(yǎng)基干粉用的太多l(xiāng)

瓊脂質(zhì)量發(fā)生了變化第三十九頁，共五十四頁，2022年，8月28日不合格培養(yǎng)基可能的原因（三）凝膠強度過低l

培養(yǎng)基干粉用的太少l

培養(yǎng)基未完全溶解l

培養(yǎng)基過度滅菌l

傾注前未振搖培養(yǎng)基瓶l

瓊脂粉凝固強度較低顏色不對l

PH不正確（帶指示劑的培養(yǎng)基）l

培養(yǎng)基過度滅菌l

使用了不潔的容器制備第四十頁，共五十四頁，2022年，8月28日不合格培養(yǎng)基可能的原因（四）培養(yǎng)基被污染l

培養(yǎng)基滅菌不徹底l

滅菌后存放不當(dāng)而污染l

實驗時使用了污染的器皿生長不良l

可能由制備容器設(shè)備、水或樣品帶入抑制物l

樣品中含有亞致死性損傷的微生物l

PH不正確l

添加物（抑制劑）等濃度不當(dāng)l

培養(yǎng)基過度滅菌l

實驗時培養(yǎng)基或溶解樣品時溫度過高第四十一頁，共五十四頁，2022年，8月28日不合格培養(yǎng)基可能的原因（五）過分生長l

培養(yǎng)基過度滅菌，選擇性物質(zhì)受到了破壞l

添加物濃度不當(dāng)菌落蔓延l

瓊脂表面過濕l

使用了過多的接種體積l

培養(yǎng)基過度滅菌非典型生長l

培養(yǎng)基制備不當(dāng)l

干燥培養(yǎng)基存放陳舊l

制備成的培養(yǎng)基存放時間過長l

生長條件不當(dāng)（溫度、時間、氣體）第四十二頁，共五十四頁，2022年，8月28日檢測質(zhì)量保證

定期使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和次級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（參考物質(zhì)）進行內(nèi)部質(zhì)量控制。實驗室間的比對或能力驗證利用相同或不同方法進行重復(fù)檢測對留存的樣品進行在檢測。第四十三頁，共五十四頁，2022年，8月28日微生物檢驗質(zhì)控方法（一）菌落計數(shù)精密度控制直接計數(shù)選擇同一標(biāo)本，要求檢驗人員進行菌落計數(shù)。將大腸菌（25922）或經(jīng)檢定標(biāo)化的菌片，通過合適的梯度稀釋，選擇合適的稀釋度進行菌落計數(shù)實驗操作。36±1℃培養(yǎng)24h進行菌落計數(shù)。第四十四頁，共五十四頁，2022年，8月28日微生物檢驗質(zhì)控方法（二）菌落計數(shù)精密度控制重復(fù)計數(shù)法選擇十個平板，每個平板具有合適的菌落數(shù)（100以內(nèi)）。將平板編號，由實驗人員進行計數(shù)并記錄結(jié)果。去掉平板編號，將平板置冰箱保存過夜，次日取出，重新給予編號，由實驗人員重復(fù)計數(shù)并記錄。計算每位實驗人員每對結(jié)果的平均數(shù)（X）。X=（a+b）/2；相對誤差（rd）計算：rd=|a+b|/X×100%。其它實驗人員間的相對誤差范圍計算：先計算所有實驗人員的平均菌落數(shù)，X=[Σx]/n，要求每一結(jié)果均應(yīng)在X±18.2%范圍內(nèi)。第四十五頁，共五十四頁，2022年，8月28日重復(fù)計數(shù)要求自身同一平皿重復(fù)計數(shù)誤差小于7.7%實驗人員之間同一平皿重復(fù)計數(shù)誤差±18.2%自身同一梯度平行加樣兩皿間相對誤小于7.7%實驗人員之間同一梯度計數(shù)誤差X±18.2%范圍不同梯度間菌落計數(shù)最終誤差小于7.7%第四十六頁，共五十四頁，2022年，8月28日菌種鑒定質(zhì)控菌種鑒定質(zhì)控要求，對所給的微生物菌種，按有關(guān)的方法及指標(biāo)進行生化、血清等方面的鑒定。鑒定質(zhì)量評價：鑒定程序是否正確；鑒定方法是否正確；具體操作技術(shù)是否熟練，結(jié)果報告是否正確。每一項設(shè)立分值為25分?？偡譃?00分。第四十七頁，共五十四頁，2022年，8月28日內(nèi)部質(zhì)量控制的推薦頻率菌落計數(shù)精密度控制：1次/3月；菌種鑒定控制：1次/半年或1年盲樣測定丟失的對照1次/半年第四十八頁，共五十四頁，2022年，8月28日實驗室安全防護1

培訓(xùn)與告之實驗室管理人員及實驗人員必須了解相關(guān)工作有關(guān)的