第六章病原菌檢測

第六章食品中常見病原微生物

檢驗技術(shù)衛(wèi)生部：食品中致病菌含量將設(shè)底線衛(wèi)生部2011年發(fā)布通知，就《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中致病菌限量》征求意見。新標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了下列等17類食品中可能出現(xiàn)的沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌等8種致病菌的含量。肉及肉制品水產(chǎn)品蛋制品糧食制品豆類制品焙烤及油炸類食品糖果、巧克力類及可可制品蜂蜜及其制品加工水果藻類制品飲料類冷凍飲品發(fā)酵酒及其配制酒調(diào)味品脂肪，油和乳化脂肪制品果凍即食食品食品致病菌指標(biāo)食品致病菌指標(biāo)肉及肉制品沙門氏菌、空腸彎曲菌水產(chǎn)品沙門氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌金黃色葡萄球菌副溶血性弧菌大腸埃希氏菌O157:H7/NM蛋制品,糖果、巧克力類及可可制品沙門氏菌豆類制品沙門氏菌糧食制品單核細(xì)胞增生李斯特氏菌金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌蜂蜜及其制品,即食食品沙門氏菌調(diào)味品沙門氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌金黃色葡萄球菌藻類制品沙門氏菌副溶血性弧菌副溶血性弧菌果凍，加工水果，飲料類冷凍飲品，發(fā)酵酒及其配制酒,焙烤及油炸類食品脂肪，油和乳化脂肪制品沙門氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌金黃色葡萄球菌沙門氏菌金黃色葡萄球菌志賀氏菌阪崎腸桿菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌空腸彎曲菌副溶血性弧菌變形桿菌耶爾森菌大腸艾希氏菌一般情況下，食品致病菌檢測多集中在沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌三種菌上，但由于各種食品所含的致病菌種類不一樣，因此，產(chǎn)品微生物致病菌的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該根據(jù)產(chǎn)品本身的特性來制定，而不是越多越好，增加檢測的復(fù)雜性。此次標(biāo)準(zhǔn)中主要規(guī)定了17類食品的致病菌種類，此分類方法與食品添加劑、食品污染物限量標(biāo)準(zhǔn)等基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)的分類較為一致，有利于各種食品中致病菌的檢測和預(yù)防。

相關(guān)概念：致病菌檢驗的基本程序檢樣處理增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)生化試驗血清學(xué)鑒定報告第一節(jié)沙門氏菌檢驗技術(shù)沙門氏菌是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各國各類細(xì)菌性的食物中毒中，沙門氏菌常居前列。因此，沙門氏菌的檢測是各國檢驗機構(gòu)對多種進(jìn)出口食品的必檢項目之一。沙門氏菌不產(chǎn)生外毒素，但能產(chǎn)生毒力較強的內(nèi)毒素。傳播源是人、家禽、豬、牛和其他動物。沙門氏菌主要通過食物、飲水經(jīng)口感染。可存在多種食物中，包括生肉、禽、蛋、奶制品、蝦、魚和田雞腿等。根據(jù)侵入機體沙門氏菌菌種的不同，在臨床上引起四種不同的疾病。（1）傷寒、副傷寒由沙門氏屬中的傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。（2）食物中毒沙門氏菌屬引起的食物中毒，主要以腸炎桿菌、鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌和湯普遜桿菌等最為多見。臨床癥狀主要是胃腸炎。病程較短，一般2~4d,可完全恢復(fù)。（3）敗血癥多為豬霍亂桿菌引起，甲、乙、丙型副傷寒桿菌和腸炎桿菌亦可引起敗血癥。（4）慢性腸炎沙門氏桿菌可引起慢性、持久性腸炎。致病菌濃度：2×105個/g（mL）可引起胃腸炎，潛伏期5小時到5天，發(fā)病通常自攝取污染食物后12-36小時開始。癥狀為腹瀉，惡心，腹痛，中等程度發(fā)燒，畏寒等，病程2-5天?？梢饌?，潛伏期7-28天，癥狀為頭痛，持續(xù)高燒，腹痛，渾身酸痛，乏力等，病程1-8周?？梢鹁Y，血液中存在此菌，傳播擴(kuò)散到環(huán)境中。革蘭氏陰性菌，無芽孢、無莢膜桿菌，周生鞭毛，兼性厭氧。最適生長溫度37℃.抗寒、耐鹽,最適Ph6.8～7.8。該菌熱敏感，抗熱性差，60℃經(jīng)20～30min被殺死。生長的水分活度為0.94。一、沙門氏菌屬是腸桿菌科中最復(fù)雜的菌屬。抗原：可根據(jù)沙門氏菌的菌體抗原（O抗原）

——分群（A,B,C等）再根據(jù)其鞭毛抗原（H抗原）

——分血清型（1、2等）食品中沙門氏菌檢測方法沙門氏菌的檢測方法：《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗沙門氏菌檢驗GB4789.4—2010》檢樣處理冷凍的檢樣在檢樣前最好不要解凍，將沙門氏菌的損傷降低到最低限度。粉狀樣品應(yīng)將225ml增菌液分?jǐn)?shù)次加入，并用滅菌玻棒攪拌成均勻懸液。帶殼蛋類在流水下用刷子刷洗蛋類，并瀝干。將蛋類在含0.1％十二烷基磺酸鈉的200mg/kgCl-溶液中浸泡30min后方可破殼取蛋。從食品中分離沙門氏菌樣品制備由于食品種類繁多，且每類中包括許多品種。因其加工方式不同，導(dǎo)致性狀各異。故在進(jìn)行微生物學(xué)檢驗時，應(yīng)按不同的形狀、加工方式及檢驗?zāi)康暮侠磉M(jìn)行檢樣處理。四、檢驗程序選擇性瓊脂平板緩沖蛋白水增菌液增菌液三鐵糖瓊脂BPW——緩沖蛋白水用于前增菌:目的是使樣品中的沙門氏菌復(fù)蘇，故培養(yǎng)時間較短。BPW——緩沖蛋白水1.勻質(zhì)——用勻質(zhì)器勻質(zhì)器；2.調(diào)節(jié)pH至6.8±0.2；3.在36℃±1℃培養(yǎng)8h～18h無菌操作將樣品轉(zhuǎn)至500mL錐形瓶中培養(yǎng)均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品均經(jīng)過前增菌TTB增菌選擇性增菌：此培養(yǎng)基允許沙門氏菌持續(xù)增菌，同時阻止大多數(shù)其他細(xì)菌的增殖。四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液由如下幾部分組成：基礎(chǔ)液、硫代硫酸鈉、碘溶液、0.5%煌綠水溶液、牛膽鹽溶液。制法：基礎(chǔ)液900mL；硫代硫酸鈉溶液100mL；碘溶液20.0mL煌綠水溶液2.0mL；牛膽鹽溶液50.0mL。以無菌操作一次加入上述成分增菌輕輕搖動培養(yǎng)過的樣品混合物，移取1mL，轉(zhuǎn)種于10mLTTB內(nèi)，于42℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。同時，另取1mL，轉(zhuǎn)種于10mLSC內(nèi)，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h硫硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液成分：蛋白胨5.0g；乳糖4.0g；磷酸氫二鈉10.0g；亞硒酸氫鈉4.0g；L-胱氨酸0.01g；蒸餾水1000mL；pH7.0±0.2制法：除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸外，將各成分加入蒸餾水中，煮沸溶解，冷至55℃以下，以無菌操作加入亞硒酸氫鈉和1g/LL-胱氨酸溶液溶液10mL（稱取0.1gL-胱氨酸，加1mol/L氫氧化鈉溶液15mL，使溶解，再加無菌蒸餾水至100mL即成，如為DL-胱氨酸，用量應(yīng)加倍）。搖勻，調(diào)節(jié)pH。TTB的選擇性強于SC，對沙門的生長或多或少有點抑制，而SC的選擇性相對較弱，雜菌可能會比較多，為了能準(zhǔn)確分離出沙門氏菌SC更適合傷寒沙門氏菌和甲型副傷寒沙門氏菌增菌，最適增菌溫度為36度，TTB更適合其他沙門氏菌增菌，最適增菌溫度為42度，因為沙門氏菌有2000多個菌型，一種增菌液不可能適合所有的沙門氏菌生長，因此沙門氏菌增菌要同時用兩種培養(yǎng)基增菌。分別用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個BS瓊脂平板和一個XLD瓊脂平板（或HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）。于36℃±1℃分別培養(yǎng)18h～24h（XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）或40h～48h（BS瓊脂平板），觀察各個平板上生長的菌落特征。3分離亞硫酸鉍（BS）瓊脂將前三種成分加入300mL蒸餾水（制作基礎(chǔ)液），硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉分別加入20mL和30mL蒸餾水中，檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉分別加入另一20mL和30mL蒸餾水中，瓊脂加入600mL蒸餾水中。然后分別攪拌均勻，煮沸溶解。冷至80℃左右時，先將硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉混勻，倒入基礎(chǔ)液中，混勻。將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉混勻，倒入基礎(chǔ)液中，再混勻。調(diào)節(jié)pH，隨即傾入瓊脂液中，混合均勻，冷至50℃～55℃。加入煌綠溶液，充分混勻后立即傾注平皿。沙門氏菌在亞硫酸鉍瓊脂(BS瓊脂)上典型特征

沙門氏菌在37℃培養(yǎng)24-48小時后，棕褐色或灰色至黑色，有時有金屬光澤，周圍培養(yǎng)基呈棕色或黑色，有些菌株呈灰綠色,周圍培養(yǎng)基不變或微變暗。沙門氏菌在膽硫乳瓊脂(DHL瓊脂)上典型特征

沙門氏菌在37℃培養(yǎng)22-24小時后，無色半透明有黑色中心或幾乎全為黑色。有些菌株無色半透明。沙門氏菌在HE瓊脂上典型特征

在37℃培養(yǎng)18-24小時后，沙門氏菌、亞利桑那菌和變形桿菌為藍(lán)綠色至藍(lán)色、有或無黑色中心的菌落；大腸桿菌和大腸菌群為粉紅色菌落，有沉淀環(huán)；，無色半透明有黑色中心或幾乎全為黑色。志賀氏菌和普羅菲登斯菌為綠色、濕潤而隆起菌落。

4.1自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺；接種針不要滅菌,直接接種賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，必要時可延長至48h。在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基內(nèi)，沙門氏菌屬的反應(yīng)結(jié)果見下表。4生化試驗4.2接種三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基的同時,可直接接種蛋白胨水（供做靛基質(zhì)試驗）、尿素瓊脂（pH7.2）、氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基，也可在初步判斷結(jié)果后從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落接種。于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，必要時可延長至48h，按表3判定結(jié)果。將已挑菌落的平板儲存于2℃～5℃或室溫至少保留24h，以備必要時復(fù)查。三糖鐵（TSI）瓊脂試驗——可同時觀察乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣（變黃）；產(chǎn)生硫化氫（變黑）。葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。如果細(xì)菌又能分解含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，培養(yǎng)基底部變黑。制好的培養(yǎng)基對照管斜面紅色，底面黃色培養(yǎng)基全黃色斜面、底部黃色，并產(chǎn)生H2S斜面紅色，底部黃色，產(chǎn)生H2S底面黃色，并產(chǎn)生CO2－－沙門氏菌的TSI試驗靛基質(zhì)（吲哚）試驗——某些細(xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應(yīng)表現(xiàn)出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。1、未接種2、尿素酶陽性3、尿素酶陰性尿素酶試驗——有些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2個分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色。4.2.1反應(yīng)序號A1：典型反應(yīng)判定為沙門氏菌屬。如尿素、KCN和賴氨酸脫羧酶3項中有1項異常，按表4可判定為沙門氏菌。如有2項異常為非沙門氏菌。表4沙門氏菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表4.2.2反應(yīng)序號A2：補做甘露醇和山梨醇試驗，沙門氏菌靛基質(zhì)陽性變體兩項試驗結(jié)果均為陽性，但需要結(jié)合血清學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)行判定。4.2.3反應(yīng)序號A3：補做ONPG。ONPG陰性為沙門氏菌，同時賴氨酸脫羧酶陽性,甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸脫羧酶陰性。5.4.2.4必要時按表5進(jìn)行沙門氏菌生化群的鑒別。表5沙門氏菌屬各生化群的鑒別4.3如選擇生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)，可根據(jù)5.4.1的初步判斷結(jié)果，從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)木鷳乙?，使用生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。5.5血清學(xué)鑒定5.5.1抗原的準(zhǔn)備一般采用1.2％～1.5％瓊脂培養(yǎng)物作玻片凝集試驗用的抗原。O血清不凝集時，將菌株接種在瓊脂量較高的（如2％～3％）培養(yǎng)基上再檢查；如果是由于Vi抗原的存在而阻止了O凝集反應(yīng)時，可挑取菌苔于1mL生理鹽水中做成濃菌液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。H抗原發(fā)育不良時，將菌株接種在0.55％～0.65％半固體瓊脂平板的中央，俟菌落蔓延生長時，在其邊緣部分取菌檢查；或?qū)⒕晖ㄟ^裝有0.3％～0.4％半固體瓊脂的小玻管1次～2次，自遠(yuǎn)端取菌培養(yǎng)后再檢查。5.5.2多價菌體抗原（O）與多價鞭毛抗原（H）鑒定在玻片上劃出2個約1cm×2cm的區(qū)域，挑取1環(huán)待測菌，各放1/2環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部，在其中一個區(qū)域下部加1滴多價菌體（O）抗血清，在另一區(qū)域下部加入1滴生理鹽水，作為對照。再用無菌的接種環(huán)或針分別將兩個區(qū)域內(nèi)的菌落研成乳狀液。將玻片傾斜搖動混合1min，并對著黑暗背景進(jìn)行觀察，任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽性反應(yīng)。注：本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，在制備過程中不宜過分加熱，避免降低其選擇性，貯于室溫暗處，超過48h會降低其選擇性，本培養(yǎng)基宜于當(dāng)天制備，第二天使用。A.5.1成分蛋白胨12.0g，牛肉膏3.0g，乳糖12.0g，蔗糖12.0g水楊素2.0g，膽鹽20.0g，氯化鈉5.0g。瓊脂18.0g～20.0g，蒸餾水1000mL0.4％溴麝香草酚藍(lán)溶液16.0mLAndrade指示劑20.0mL甲液20.0mL，乙液20.0mL，pH7.5±0.2A.5HE瓊脂A.5.2制法將前面七種成分溶解于400mL蒸餾水內(nèi)作為基礎(chǔ)液;將瓊脂加入于600mL蒸餾水內(nèi)。然后分別攪拌均勻，煮沸溶解。加入甲液和乙液于基礎(chǔ)液內(nèi),調(diào)節(jié)pH。再加入指示劑,并與瓊脂液合并,待冷至50℃～55℃傾注平皿。注:①本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，在制備過程中不宜過分加熱，避免降低其選擇性。②甲液的配制——硫代硫酸鈉34.0g，檸檬酸鐵銨4.0g，蒸餾水100mL③乙液的配制——去氧膽酸鈉10.0g，蒸餾水100mL④Andrade指示劑——酸性復(fù)紅0.5g，1mol/L氫氧化鈉溶液16.0mL，蒸餾水100mL將復(fù)紅溶解于蒸餾水中,加入氫氧化鈉溶液。數(shù)小時后如復(fù)紅褪色不全,再加氫氧化鈉溶液1mL～2mL。A.6.1成分酵母膏3.0g，L-賴氨酸5.0g，木糖3.75g，乳糖7.5g，蔗糖7.5g，去氧膽酸鈉2.5g，檸檬酸鐵銨0.8g，硫代硫酸鈉6.8g，氯化鈉5.0g，瓊脂15.0g，酚紅0.08g蒸餾水1000mL，pH7.4±0.2A.6木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂除酚紅和瓊脂外，將其他成分加入400mL蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中，煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后，再加入指示劑，待冷至50℃～55℃傾注平皿。注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，不宜過分加熱，貯于室溫暗處。宜于當(dāng)天制備，第二天使用。A.6.2制法蛋白胨20.0g，牛肉膏5.0g，乳糖10.0g，蔗糖10.0g葡萄糖1.0g，硫酸亞鐵銨（含6個結(jié)晶水）0.2g酚紅025g或5.0g/L溶液5.0mL，氯化鈉5.0g硫代硫酸鈉0.2g，瓊脂12.0g，蒸餾水1000mLpH7.4±0.2A.7三糖鐵（TSI）瓊脂除酚紅和瓊脂外，將其他成分加入400mL蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中，煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后，再加入指示劑，混勻，分裝試管，每管約2mL～4mL，高壓滅菌121℃10min或115℃15min，滅菌后置成高層斜面，呈桔紅色。蛋白胨水蛋白胨（或胰蛋白胨）20.0g，氯化鈉5.0g，蒸餾水1000mL，pH7.4±0.2將上述成分加入蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH，分裝小試管,121℃高壓滅菌15min。靛基質(zhì)試劑柯凡克試劑：將5g對二甲氨基甲醛溶解于75mL戊醇中,然后緩慢加入濃鹽酸25mL。歐-波試劑：將1g對二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95％乙醇內(nèi)。然后緩慢加入濃鹽酸20mL。挑取小量培養(yǎng)物接種,在36℃±1℃培養(yǎng)1d～2d，必要時可培養(yǎng)4d～5d。加入柯凡克試劑約0.5mL，輕搖試管,陽性者于試劑層呈深紅色；或加入歐-波試劑約0.5mL，沿管壁流下，覆蓋于培養(yǎng)液表面,陽性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。注：蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氯酸。每批蛋白胨買來后，應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用。試驗方法蛋白胨1.0g,氯化鈉5.0g，葡萄糖1.0g，磷酸二氫鉀2.0g0.4％酚紅3.0mL，瓊脂20.0g，蒸餾水1000mL20%尿素溶液100mL，pH7.2±0.2除尿素、瓊脂和酚紅外，將其他成分加入400mL蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中，煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后，再加入指示劑后分裝，121℃高壓滅菌15min。冷至50℃～55℃,加入經(jīng)除菌過濾的尿素溶液。尿素的最終濃度為2％。分裝于無菌試管內(nèi)，放成斜面?zhèn)溆?。A.9尿素瓊脂（pH7.2）試驗方法挑取瓊脂培養(yǎng)物接種,在36℃±1℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。尿素酶陽性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。蛋白胨10.0g，氯化鈉5.0g，磷酸二氫鉀0.225g磷酸氫二鈉5.64g，蒸餾水1000mL，0.5％氰化鉀20.0mL將除氰化鉀以外的成分加入蒸餾水中，煮沸溶解，分裝后121℃高壓滅菌15min。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每100mL培養(yǎng)基加入0.5％氰化鉀溶液2.0mL（最后濃度為1:10000），分裝于無菌試管內(nèi),每管約4mL,立刻用無菌橡皮塞塞緊,放在4℃冰箱內(nèi),至少可保存兩個月。同時，將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基,分裝試管備用。A.10氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基將瓊脂培養(yǎng)物接種于蛋白胨水內(nèi)成為稀釋菌液，挑取1環(huán)接種于氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基。并另挑取1環(huán)接種于對照培養(yǎng)基。在36℃±1℃培養(yǎng)1d～2d，觀察結(jié)果。如有細(xì)菌生長即為陽性（不抑制），經(jīng)2d細(xì)菌不生長為陰性（抑制）。注:氰化鉀是劇毒藥,使用時應(yīng)小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分裝培養(yǎng)基應(yīng)在冰箱內(nèi)進(jìn)行。試驗失敗的主要原因是封口不嚴(yán),氰化鉀逐漸分解，產(chǎn)生氫氰酸氣體逸出，以致藥物濃度降低，細(xì)菌生長，因而造成假陽性反應(yīng)。試驗時對每一環(huán)節(jié)都要特別注意。試驗方法蛋白胨5.0g，酵母浸膏3.0g，葡萄糖1.0g，蒸餾水1000mL，1.6％溴甲酚紫-乙醇溶液1.0mLL-賴氨酸或DL-賴氨酸0.5g/100mL或1.0g/100mLpH6.8±0.2除賴氨酸以外的成分加熱溶解后,分裝每瓶100mL，分別加入賴氨酸。L-賴氨酸按0.5％加入，DL-賴氨酸按1％加入。調(diào)節(jié)pH。對照培養(yǎng)基不加賴氨酸。分裝于無菌的小試管內(nèi)，每管0.5mL，上面滴加一層液體石蠟，115℃高壓滅菌10min。A.11賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種，于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h，觀察結(jié)果。氨基酸脫羧酶陽性者由于產(chǎn)堿，培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色。陰性者無堿性產(chǎn)物，但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色。對照管應(yīng)為黃色。試驗方法牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，氯化鈉3.0g，磷酸氫二鈉（含12個結(jié)晶水）2.0g，0.2％溴麝香草酚藍(lán)溶液12.0mL蒸餾水