實驗一MS培養(yǎng)基的配制講解學習

實驗(shíyàn)一MS培養(yǎng)基的配制第一頁，共18頁。一、實驗(shíyàn)目的了解植物外植體離體培養(yǎng)(péiyǎng)所需各種營養(yǎng)成分及激素種類。初步掌握培養(yǎng)(péiyǎng)基母液配制方法。第二頁，共18頁。二、實驗(shíyàn)原理植物材料培養(yǎng)要獲得成功，并正常生長，培養(yǎng)基的成分是一個決定性因素，不同植物要求不同的培養(yǎng)基。大多數(shù)植物組織培養(yǎng)所用(suǒyònɡ)的培養(yǎng)基由無機營養(yǎng)物、碳源、維生素、生長調節(jié)物質和有機附加物等五類物質組成。第三頁，共18頁。在配制培養(yǎng)基之前，為了使用方便、簡化操作、用量準確，減少每次配藥稱量各種化學成分所花費的時間和誤差，常常將配制培養(yǎng)基所需無機大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物、激素成分分別配制成比需要量大若干倍的濃縮(nónɡsuō)母液，置于冰箱內保存。當配制培養(yǎng)基時，按預先計算好的量分別吸取各種母液稀釋即可。第四頁，共18頁。三、實驗材料(cáiliào)與器具1、用具器材滅菌鍋、普通及精密天平、燒杯(shāobēi)、醫(yī)用瓷缸、量桶、移液管、試劑瓶、藥勺、玻璃棒、pH試紙。2、藥品試劑蒸餾水、1NHCl、1NNaOH、95%酒精、蔗糖、瓊脂、各種所需化學藥品（分析純）。第五頁，共18頁。四、實驗(shíyàn)步驟

1、母液配制(pèizhì)（1）配制(pèizhì)10倍1LMS大量元素母液NH4NO3

16.5gKH2PO41.7gKNO319g

CaCl2·2H2O

4.4gMgSO4·7H2O

3.7g第六頁，共18頁。

配制(pèizhì)成200倍1L母液，依次稱取:KI0.166gNa2MoO4·2H2O0.05gH3BO31.24gCuSO4·5H2O

0.005gMnSO4·4H2O

4.46g

CoCl2·6H2O

0.005gZnSO4·7H2O

1.72g（2）配制(pèizhì)MS微量元素母液第七頁，共18頁。

配制(pèizhì)成200倍lL鐵鹽母液，依次稱取:EDTA二鈉（Na2·EDTA·7H2O）7.46g

FeSO4·7H2O

5.56g（3）配制(pèizhì)MS鐵鹽母液

第八頁，共18頁。

配制成200倍1L有機母液，依次(yīcì)稱?。蝴}酸硫胺素（VB1）

0.02g煙酸

0.1g

鹽酸吡哆醇（VB6）

0.1g（4）配制(pèizhì)MS有機母液①第九頁，共18頁。（5）配制(pèizhì)MS有機母液②配制(pèizhì)成200倍1L有機母液：肌醇

20.0g

（6）配制(pèizhì)MS有機母液③配制成200倍1L有機母液：甘氨酸

0.4g

第十頁，共18頁。

0.1mg/mL的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量(shǎoliàng)1N的鹽酸溶解，再加蒸餾水定容至250mL。0.1mg/mLNAA：取25mg的NAA可溶于熱水中或用少量(shǎoliàng)95%乙醇或少量(shǎoliàng)1N的NaOH溶解后，再加水定容至250mL。0.1mg/mL2，4-D：取20mg的2，4-D溶于少量(shǎoliàng)95%乙醇中，再加水定容至200mL。（7）植物激素(jīsù)的配制第十一頁，共18頁。

2、培養(yǎng)基的配制(pèizhì)（以1L培養(yǎng)基為例）1、計量根據(jù)配制培養(yǎng)基的量（1L）和母液的濃度計算需要吸取(xīqǔ)母液的量，計算公式：吸取(xīqǔ)量mL=培養(yǎng)基中物質濃度（mg/L）×1000mL/母液濃度（mg/L）。母液濃度/培養(yǎng)基中物質濃度=稀釋倍數(shù)2、移液取大燒杯（1L）一只，按照計算吸取(xīqǔ)母液的量依次吸取(xīqǔ)各母液置于燒杯中備用。3、稱取稱取10g瓊脂，30g蔗糖備用。第十二頁，共18頁。4、融化(rónghuà)用搪瓷量杯量取600～700mL的蒸餾水放在電爐上，加入瓊脂，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀將其取下，加入蔗糖，攪拌使之溶解。5、混合將融化(rónghuà)的瓊脂和蔗糖倒入裝有母液的大燒杯中，充分混合，用蒸餾水定容到1000mL。6、調pH用滴管吸取物質的量濃度為1mol/L的NaOH或HCl溶液調pH為6.0。第十三頁，共18頁。編號6-BA（mg/l）NAA（mg/l）2,4-D（mg/l）第一組0.50.11.0第二組0.50.52.0第三組0.50.050第四組1.00.10共分4組，每組配750mL培養(yǎng)基，每瓶倒25-30mL，共接種28瓶左右(zuǒyòu)每瓶編號1（1/2/3/4）n號分組情況(qíngkuàng)第十四頁，共18頁。3、培養(yǎng)基的分裝(fēnzhuānɡ)和滅菌溶化的培養(yǎng)基應該趁熱分裝。分裝時，將燒杯中的培養(yǎng)基倒入錐形瓶中，每瓶約25mL-30mL。注意(zhùyì)不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。用封口膜封口并編號。滅菌：121℃，15-20min。第十五頁，共18頁。五、注意事項配制鐵鹽母液時，F(xiàn)eS04和Na2EDTA應分別加熱溶解后混合，并置于加熱攪拌器上不斷攪拌至溶液呈金黃