NY/T 674-2003轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測DNA提取和純化

犐犆犛６５．０２０．９９

犅２０

中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

犖犢／犜６７４—２００３

轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測

犇犖犃提取和純化

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２００３０４０１發(fā)布２００３０５１５實施

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

書

犖犢／犜６７４—２００３

前言

本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部科技教育司提出。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)所、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所、上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)

院、農(nóng)業(yè)部科技發(fā)展中心、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：賈士榮、金蕪軍、張大兵、彭于發(fā)、黃昆侖、李寧、汪其懷、羅云波。

本標(biāo)準(zhǔn)首次發(fā)布。

Ⅰ

書

犖犢／犜６７４—２００３

轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測

犇犖犃提取和純化

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品中ＤＮＡ提取和純化的方法和技術(shù)要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品中ＤＮＡ的提取和純化。

２規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有

的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究

是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

ＮＹ／Ｔ６７２轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測通用要求

ＮＹ／Ｔ６７３轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測抽樣

３原理

通過物理和化學(xué)方法使ＤＮＡ從樣品的不同組分中分離出來。利用不同的純化方法，棄除樣品中

的蛋白質(zhì)、脂肪、多糖及其他次生代謝物，及ＤＮＡ提取過程中加入的三氯甲烷、異戊醇、異丙醇、乙醇和

乙酸鈉等，獲得純化的ＤＮＡ。

４試劑與溶液

除非另有說明，在分析中僅使用分析純試劑；配制好的溶液經(jīng)高溫滅菌后使用。

４．１溴代十六烷基三甲胺（ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ，ＣＴＡＢ）。

４．２三羥甲基氨基甲烷［ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ，Ｔｒｉｓ］。

４．３二水乙二胺四乙酸二鈉（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ，ｄｉｓｏｄｉｕｍｓａｌｔ，ｄｉｈｙｄｒａｔｅ，ＥＤＴＡＮａ·

２Ｈ２Ｏ）。

４．４Ｅ巰基乙醇（Ｅｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ）。

４．５三氯甲烷（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ）。

４．６異戊醇（ｉｓｏａｍｙｌａｌｃｏｈｏｌ）。

４．７異丙醇（ｉｓｏｐｒｏｐｙｌａｌｃｏｈｏｌ）。

４．８三氯甲烷＋異戊醇＝２４＋１（體積比）。

４．９７６％乙醇溶液：?。罚叮埃恚虩o水乙醇，加水定容至１Ｌ。

４．１０７０％乙醇溶液：取７００ｍＬ無水乙醇，加水定容至１Ｌ。

４．１１ＣＴＡＢ提取緩沖液Ⅰ：配制每升ＣＴＡＢ提取緩沖液Ⅰ，應(yīng)在８００ｍＬ去離子水中加入４６．７５ｇ氯

化鈉，搖動容器使溶質(zhì)完全溶解，然后加入５０ｍＬ１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８．０）［在８００ｍＬ去離子水中溶

解１２１．１ｇ三羥甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓ），冷卻至室溫后用濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的ｐＨ值至８．０（約需４２ｍＬ濃

鹽酸），加水定容至１Ｌ，分裝后高壓滅