儀器分析紫外-可見分光光度法2課件

第二節(jié)紫外-可見分光光度計(jì)光源吸收池檢測器訊號處理與顯示器一、主要部件可見光源紫外光源氫燈或氘燈>300nm150~400nm1．光源鎢燈或鹵鎢燈具有連續(xù)光譜2．單色器色散元件準(zhǔn)直鏡（聚光鏡）狹縫將復(fù)合光色散成單色光棱鏡光柵準(zhǔn)直鏡將進(jìn)入單色器的發(fā)散光變成平行光，又作聚光鏡，將色散后的平行單色光聚集于出口狹縫。光柵狹縫入射狹縫—使光線成為一細(xì)長條照射到準(zhǔn)直鏡出射狹縫—使需要的單色光投射到溶液中過寬，單色光不純，可使A改變過窄，光通量小，靈敏度降低3．吸收池盛放試液可見光區(qū)玻璃紫外區(qū)石英匹配：T

=0.2%~0.5%光電管放大器指示器陰極（光敏）陽極紫敏光電管200~625nm紅敏625~1000nmR光電倍增管陰極陽極擋板共9個(gè)倍增極光二極管陣列檢測器例：二極管陣列，在190~820nm，由316個(gè)二極管組成，即2nm一個(gè)二極管。在1/10秒內(nèi)即可獲得全光譜圖。樣品光源光柵二極管陣列（一）光路類型單光束分光光度計(jì)檢測器數(shù)據(jù)處理顯示樣品光源單色器參比二、分光光度計(jì)的光學(xué)性能與類型雙光束分光光度計(jì)光源單色器樣品參比檢測器同步切光器（旋轉(zhuǎn)扇面鏡）（二）光學(xué)性能波長范圍195~820nm波長準(zhǔn)確度≤0.5nm波長重現(xiàn)性≤0.5nm透光率測量范圍0~150%（T）吸光度測量范圍-0.1730~+2.00（A）光度準(zhǔn)確度T滿量程誤差≤0.5%光度重復(fù)性≤0.5%分辨率=0.3(260nm處)雜散光220nm處NaI(1%g/ml)≤0.5%吸光度的校正K2Cr2O7溶液：0.0400gK2Cr2O7溶于1L0.05mol/L的KOH溶液中比色皿厚度為1cm溫度為250C測定不同波長下的吸光度

吸收池的校正（配對）a樣品b參比A1=A樣-A參1.2.a參比b樣品A2=A樣-A參要求：A=

A1-A2<1%第三節(jié)、紫外可見分光光度分析方法①對比吸收光譜特征數(shù)據(jù)max

吸收系數(shù)較大靈敏度高

或E1cm1%不同吸收基團(tuán)（相同吸收基團(tuán)）的不同化合物，可有相同的max，但分子量（M）卻很難相同。=10/M

=M/10例如3位酮體4位烯鍵的甾體類化合物在240nm處都有吸收峰A240nm安宮黃體酮炔諾酮=408=571②對比吸收度或吸收系數(shù)的比值1處A1=E1Cl2處A2=E2ClA1A2=E1E2如VB12的鑒別，中國藥典規(guī)定：A361A278=1.70~1.88A361A550=3.15~3.45AAA醋酸潑尼松醋酸氫化可的松醋酸可的松用紫外吸收光譜進(jìn)行定性時(shí)需注意：當(dāng)兩種純化合物的吸收光譜有明顯差別時(shí)，可以肯定是兩個(gè)不同的化合物，而兩吸收光譜相同時(shí)，不能肯定是同一化合物。2．雜質(zhì)限量檢查藥物中雜質(zhì)，常需制定一個(gè)允許其存在的限量。腎上腺素腎上腺酮例如：A310nm在310nm處腎上腺酮有較強(qiáng)吸收腎上腺素吸收很小為控制腎上腺素中腎上腺酮的量，產(chǎn)品用紫外吸收光度法測定時(shí)，要求A<0.05。根據(jù)A=ECl當(dāng)A=0.05時(shí)C=AEl=0.054351=0.00012g/100ml產(chǎn)品溶液：2mg/ml=0.2g/100ml雜質(zhì)含量：C雜質(zhì)C產(chǎn)品100%=0.000120.2100%=0.06%2．雜質(zhì)限量檢查有時(shí)用A峰/A谷來控制雜質(zhì)限量例：碘磷定

max=294nm雜質(zhì)無吸收

min=262nm雜質(zhì)有吸收碘磷定純品：A294A262=3.39若有雜質(zhì)A262A294A262三、單組分的定量方法（一）吸光系數(shù)法配制溶液在一定時(shí)測A或T%根據(jù)A=-lgT=ECl進(jìn)行計(jì)算求出含量可查手冊選擇的原則：1.選吸收峰max處2.避免干擾3.不選末端吸收處提高靈敏度許多溶劑在短波長處有吸收。溶劑的極限波長組分的測定波長必須大于溶劑的截止波長例：VB12樣品25.0mg用水溶成1000ml后，盛于1cm吸收池中，在361nm處測得吸收度為0.507，已知E值是207，計(jì)算其百分含量。解：C測=A/El=0.507/207=0.00245C樣=25.0mg/ml=0.0025g/100ml

VB12(%)=C測/C樣100%=0.00245/0.0025100%=98.00%（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線法ACAxCx對同一臺(tái)儀器，在相同條件下：A=KC不再是物質(zhì)的常數(shù)，隨不同儀器而不同。（三）對照法相同條件下配制標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液，相同的選定波長處測定：A標(biāo)=EC標(biāo)lA樣=EC樣lA標(biāo)EC標(biāo)l

=A樣EC樣lA標(biāo)C標(biāo)

=A樣C樣C標(biāo)A樣C樣=A標(biāo)四、多組分的定量方法解聯(lián)立方程組雙波長法

等吸收雙波長法系數(shù)倍率法導(dǎo)數(shù)光譜法雙波長法（等吸收雙波長消去法）A1xA2x=Axy12選擇1、

2使：1處：A1=A1yA1x+2處：A2yA2x+A2=A=A2-A1=A2)y(A2x+A1)y(A1x+-A1yA2y-==E1)

y(E2y-Cyl系數(shù)倍率法有時(shí)不容易從兩組分的吸收光譜中找到合適的等吸收點(diǎn)。AA系數(shù)倍率法選擇1、

2K=E2xE1x=令：A=KA2-A1

A12A=KA2-A1=A2)yK(A2x+A1)y(A1x+-=(KA1)

yA2y-+(KA1)

xA2x-A2xA1x=0E1)

y=(KE2y-Cylxy導(dǎo)數(shù)光譜法如果將一個(gè)吸收光譜寫成一個(gè)波長的函數(shù)：

A=Cf()它的導(dǎo)函數(shù)的圖像就是導(dǎo)數(shù)光譜。A（）i=Ai+1-Aii+1-i1.導(dǎo)數(shù)光譜的波形和特點(diǎn)：零階一階二階三階四階導(dǎo)數(shù)階數(shù)，峰數(shù)，峰形更銳，分辨能力。峰位：在奇數(shù)階光譜中為0，在偶數(shù)階光譜中為極值。拐點(diǎn)：在偶數(shù)階光譜中為0，在奇數(shù)階光譜中為極值。2.導(dǎo)數(shù)光譜對干擾吸收的消除若能把干擾吸收表達(dá)為一個(gè)冪函數(shù)：A干=a0+a1+a22+a33

+…+ann待測組分吸收U與干擾組分共存時(shí)：A=a0

+a1+a22+a33+…+ann+

UA’=a1

+2a2+3a32+…+nan

n-1+

U’An+1’=

Un+1’例：組分階次比干擾階次高時(shí)可消除干擾3.導(dǎo)數(shù)光譜的