中藥指紋圖譜的研究與實(shí)踐課件

中藥指紋圖譜的研究與實(shí)踐第一部分概述一、建立中藥指紋圖譜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的必要性質(zhì)量穩(wěn)定的原料是生產(chǎn)質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品的先決條件。中藥材絕大部分來(lái)源于生物，其活性成分大部分為生物體內(nèi)次生代謝產(chǎn)物，少數(shù)為初生代謝產(chǎn)物。產(chǎn)地、氣候、生態(tài)環(huán)境、栽培或養(yǎng)殖技術(shù)、產(chǎn)地加工、炮制方法等對(duì)中藥材的化學(xué)成分影響很大。大部分中藥的有效成分未被闡明或僅部分闡明。單一指標(biāo)的定性、定量分析，不能有效地控制中藥材或中成藥的質(zhì)量。確保中藥的生物等效性。三、中藥指紋圖譜的作用作為藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)組成部分企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)企業(yè)藥品生產(chǎn)的過(guò)程控制企業(yè)產(chǎn)品創(chuàng)優(yōu)或打假第二部分中藥材指紋圖譜的建立品種藥用部位產(chǎn)地栽培技術(shù)產(chǎn)地加工方法炮制供試品的制備方法測(cè)定方法、條件的考察方法學(xué)考察：穩(wěn)定性、精密度、重現(xiàn)性對(duì)照指紋圖譜的建立中藥材指紋圖譜的定義：

中藥材指紋圖譜系指中藥材經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示該中藥材特性的共有峰的圖譜。如果原藥材需經(jīng)過(guò)特殊炮制（如醋制、酒制、炒炭等），則應(yīng)制定原藥材和炮制品指紋圖譜的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。1、名稱中文名、漢語(yǔ)拼音2、來(lái)源原植、動(dòng)物：科名、中文名、拉丁學(xué)名、藥用部位、產(chǎn)地、采收季節(jié)、產(chǎn)地加工、炮制方法等。礦物藥：礦物的類、族、礦石名或巖石名、主要成分、產(chǎn)地、產(chǎn)地加工、炮制方法等。來(lái)源動(dòng)、植物藥材：應(yīng)固定品種、藥用部位、產(chǎn)地、采收期、產(chǎn)地加工和炮制方法。礦物藥：固定產(chǎn)地和炮制、加工方法。供試品的取樣：保證供試品的代表性和均一性。3、供試品的制備應(yīng)根據(jù)中藥材中所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)和檢測(cè)方法的需要，選擇適宜的方法進(jìn)行制備。制備方法必須確保該中藥材的主要化學(xué)成分在指紋圖譜中的體現(xiàn)。對(duì)于注射劑用中藥材，可按注射劑制備工藝制備供試品，制定指紋圖譜。5、測(cè)定方法●包括測(cè)定方法、儀器、試劑、測(cè)定條件等?！駪?yīng)根據(jù)中藥材所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)，選擇適宜的測(cè)定方法，建議優(yōu)先考慮色譜方法?！駥?duì)于成分復(fù)雜的中藥材，必要時(shí)可以考慮采用多種測(cè)定方法，建立多張指紋圖譜。●以色譜方法制定指紋圖譜所采用的色譜柱、薄層板、試劑、測(cè)定條件等必須固定；以光譜方法制定指紋圖譜，相應(yīng)條件也必須固定。6、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)(1)指紋圖譜●根據(jù)供試品的檢測(cè)結(jié)果，建立指紋圖譜。●采用HPLC和GC制定指紋圖譜，其記錄時(shí)間根據(jù)樣品所含成分的情況而定，一般為1小時(shí)；采用TLCS制定指紋圖譜，必須提供從原點(diǎn)至溶劑前沿的圖譜；采用光譜法制定指紋圖譜，必須按各種光譜的相應(yīng)規(guī)定提供全譜?！窕瘜W(xué)成分類型復(fù)雜的品種，必要時(shí)可建立多張指紋圖譜?！裰讣y圖譜的建立：根據(jù)10批次以上供試品的檢測(cè)結(jié)果所給出的相關(guān)參數(shù)，制定指紋圖譜。(3)指紋圖譜的評(píng)價(jià)以指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件進(jìn)行評(píng)價(jià)以相對(duì)保留時(shí)間和峰面積比值進(jìn)行評(píng)價(jià)共有指紋峰面積的比值以對(duì)照品作為參照物的指紋圖譜，以參照物峰面積作為1，計(jì)算各共有指紋峰面積與參照物峰面積的比值；以內(nèi)標(biāo)物作為參照物的指紋圖譜，則以共有指紋峰中其中一個(gè)峰（要求峰面積相對(duì)較大、較穩(wěn)定的共有峰）的峰面積作為1，計(jì)算其他各共有指紋峰面積的比值。各共有指紋峰面積比值必須相對(duì)固定。峰面積比值的要求：Ai≥20％At:

SD≤±20％10%At≤Ai<20%At:

SD≤±25%Ai<10％At：峰面積比值不作要求，但必須標(biāo)定相對(duì)保留時(shí)間。未達(dá)基線分離的共有峰，應(yīng)計(jì)算該組峰的總峰面積作為峰面積，同時(shí)標(biāo)定該組各峰的相對(duì)保留時(shí)間。二、起草說(shuō)明目的在于說(shuō)明制定指紋圖譜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中各個(gè)項(xiàng)目的理由，規(guī)定各項(xiàng)目指標(biāo)的依據(jù)、技術(shù)條件和注意事項(xiàng)等。既要有理論解釋，又要有實(shí)踐工作的總結(jié)及試驗(yàn)數(shù)據(jù)。1、名稱、漢語(yǔ)拼音闡明確定該名稱的理由與依據(jù)。已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或地方標(biāo)準(zhǔn)的中藥材，應(yīng)引用標(biāo)準(zhǔn)上的名稱。其他著作或文獻(xiàn)上已記載的中藥材，應(yīng)引用文獻(xiàn)名，提供依據(jù)。新發(fā)現(xiàn)的中藥材，應(yīng)根據(jù)中藥命名原則進(jìn)行命名。2、來(lái)源對(duì)于多來(lái)源的中藥材，必須固定單一品種。對(duì)于多藥用部位的中藥材，必須固定單一藥用部位。已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（包括藥典和部頒標(biāo)準(zhǔn)）的中藥材，應(yīng)引用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)；已有地方標(biāo)準(zhǔn)的中藥材，除引用地方標(biāo)準(zhǔn)外，必須附標(biāo)準(zhǔn)的復(fù)印件。注射劑用中藥材一般固定一個(gè)產(chǎn)地，如固定多個(gè)產(chǎn)地，需制定各產(chǎn)地中藥材的指紋圖譜。3、供試品的制備說(shuō)明選用制備方法的依據(jù)。供試品需要提取、純化，應(yīng)考察提取溶劑、提取方法、純化方法等，提取、純化方法應(yīng)力求最大限度地保留供試品中的化學(xué)成分。供試品需要粉碎檢測(cè)，應(yīng)考察粉碎方法、粒度等。4、參照物的制備參照物的選擇及其依據(jù)。根據(jù)供試品中所含成分的性質(zhì)，選擇適宜的對(duì)照品或內(nèi)標(biāo)物作為參照物。試驗(yàn)樣品制備的依據(jù)。根據(jù)檢測(cè)方法的需要，選擇適宜的方法進(jìn)行制備，說(shuō)明制備理由。精密度試驗(yàn)主要考察儀器的精密度。取同一供試品，連續(xù)進(jìn)樣5次以上，考察色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間、峰面積比值的一致性。采用相似度軟件評(píng)價(jià)，要求相似度大于0.9。人工評(píng)價(jià)：采用HPLC和GC制定指紋圖譜，在指紋圖譜中規(guī)定共有峰面積比值的各色譜峰，其峰面積比值的RSD不得大于3％，其他方法不得大于5％。采用光譜方法檢測(cè)的供試品，RSD不得大于3％。重現(xiàn)性試驗(yàn)：主要考察實(shí)驗(yàn)方法的重現(xiàn)性。取同一批號(hào)的供試品5份以上，按照供試品的制備方法制備供試品并進(jìn)行檢測(cè)，考察色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間、峰面積比值的一致性。采用相似度軟件評(píng)價(jià)，要求相似度大于0.9。人工評(píng)價(jià)：采用HPLC和GC制定指紋圖譜，在指紋圖譜中規(guī)定共有峰面積比值的各色譜峰，其峰面積比值的RSD不得大于3％，其他方法不得大于5％。采用光譜方法檢測(cè)的供試品，RSD不得大于3％。6、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)(1)指紋圖譜根據(jù)供試品的檢測(cè)結(jié)果制定指紋圖譜，采用阿拉伯?dāng)?shù)字標(biāo)示共有峰，用“S”標(biāo)示參照物的峰。采用HPLC和GC制定指紋圖譜，應(yīng)提供對(duì)照指紋圖譜2倍以上的記錄圖，以考察樣品中的主要成分是否完全出峰。提供建立指紋圖譜的有關(guān)數(shù)據(jù)，包括各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間、相似度或各共有峰面積的比值。采用光譜方法建立的指紋圖譜，也必須提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)。(2)共有指紋峰的標(biāo)定根據(jù)10批次以上供試品的檢測(cè)結(jié)果，標(biāo)定中藥材的共有指紋峰。說(shuō)明標(biāo)定共有指紋峰的理由。附各批供試品的圖譜。(3)共有指紋峰面積的比值根據(jù)10批次以上供試品圖譜中各共有指紋峰面積的比值，計(jì)算平均比值。列出各批供試品的檢測(cè)數(shù)據(jù)。分析各批供試品的檢測(cè)結(jié)果是否合格(4)非共有峰面積計(jì)算10批次以上供試品圖譜中非共有峰總面積及占總峰面積的百分比。列出各批供試品的檢測(cè)數(shù)據(jù)。分析各批供試品非共有峰面積是否合格。7、注射劑用中藥材指紋圖譜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)（草案）書寫格式中藥材的名稱、來(lái)源供試品制備對(duì)照品溶液或內(nèi)標(biāo)物溶液的制備測(cè)定方法（包括儀器、試劑、測(cè)定條件和測(cè)定方法）指紋圖譜及各項(xiàng)技術(shù)參數(shù)起草說(shuō)明三、中藥材指紋圖譜研究實(shí)例(一)肉蓯蓉藥材的指紋圖譜研究Lichrosorb250*4.6mm10μm（大連依利特公司Diamasil200*4.6mm5μm（迪馬公司）

Lichrospher250*4mm5μm(默克公司)1、色譜柱考察甲醇－水系統(tǒng)

乙腈－水系統(tǒng)0.095%磷酸乙腈-0.095%磷酸系統(tǒng)2、流動(dòng)相考察3、檢測(cè)波長(zhǎng)考察4、精密度試驗(yàn)樣品12345相關(guān)系數(shù)(中位數(shù))0.99300.99280.98310.99290.99665、穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品0h2h4h8h16h24h相關(guān)系數(shù)中位數(shù)）0.99250.98540.99890.99270.98020.9988樣品12345相關(guān)系數(shù)（中位數(shù)）0.99760.99940.99340.99540.99696、重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)荒漠肉蓯蓉管花肉蓯蓉沙蓯蓉鹽生肉蓯蓉不同產(chǎn)地管花肉蓯蓉C.tubulosa指紋圖譜不同寄主管花肉蓯蓉指紋圖譜相似度比較樣品中國(guó)檉柳甘蒙檉柳短穗檉柳細(xì)穗檉柳甘肅檉柳直立檉柳相似度0.99660.98580.98700.99910.99650.9380(二)白鮮皮藥材的指紋圖譜研究茵芋堿白鮮堿黃柏酮梣酮白鮮皮的對(duì)照指紋圖譜1、中藥白鮮皮指紋圖譜的建立特征區(qū)種內(nèi)指紋區(qū)2、不同產(chǎn)地白鮮皮的指紋圖譜考察特征區(qū)種內(nèi)指紋區(qū)白鮮皮根皮與木心部分指紋圖譜比較根皮木心3、不同藥用部位指紋圖譜的區(qū)別(三)紅花藥材的指紋圖譜研究紅花商品藥材指紋圖譜紅花商品藥材指紋123456紅花商品藥材指紋圖譜新疆產(chǎn)紅花指紋圖譜(四)黃芪藥材的指紋圖譜研究1、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱：十八烷基鍵合硅膠為填充劑，型號(hào)為Polaris5μC18-A250×4.6mm；檢測(cè)器：分別以蒸發(fā)光散射和紫外二種檢測(cè)器檢測(cè)，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器采用法國(guó)SEDEX75型，蒸發(fā)溫度=40℃,氮?dú)鈮毫?2.2Bar，靈敏度=7，Units/Volt=2000；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；柱溫：30℃；理論塔板數(shù)：按黃芪甲苷計(jì)，應(yīng)不低于3000；進(jìn)樣量：20ul；流動(dòng)相：水－乙腈梯度洗脫時(shí)間(min)流速（ml/min）水(%)乙腈(%)01.0973401.07030651.01585701.01585751.0973標(biāo)樣疊加圖芒柄花素苷異黃烷苷-1異黃烷苷-3毛蕊異黃酮黃芪甲苷芒柄花素毛蕊異黃酮苷黃芪藥材蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)指紋圖譜黃芪藥材紫外檢測(cè)器(280nm)檢測(cè)指紋圖譜黃芪甲苷芒柄花素毛蕊異黃酮苷

芒柄花素苷

毛蕊異黃酮

甘肅黑龍江陜西其他河北山西內(nèi)蒙古遼寧不同產(chǎn)地黃芪蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)指紋圖譜比較不同產(chǎn)地黃芪藥材紫外檢測(cè)器檢測(cè)指紋圖譜比較陜西山西甘肅內(nèi)蒙古黑龍江河北其他遼寧4、八個(gè)省50種藥材樣品指紋圖譜考察8個(gè)省50種藥材樣品的紫外檢測(cè)考察結(jié)果條形圖（毛蕊異黃酮苷峰面積）

8個(gè)省50種藥材皂苷類成分的考察圖譜（黃芪甲苷峰面積）

5、黃芪藥材ELSD檢測(cè)相似度結(jié)果6、黃芪藥材紫外檢測(cè)相似度結(jié)果7、黃芪藥材ELSD檢測(cè)重現(xiàn)性考察8、黃芪藥材紫外檢測(cè)重現(xiàn)性考察(五)柴胡藥材揮發(fā)油指紋圖譜研究柴胡藥材芳香水的GC對(duì)照指紋圖譜AgilentHP-5，30m×530mm×5mm

DB-WAX30×530mm×1mm

DB-62430×320mm×1.8mm

AgilentHP-5，30m×3200mm×0.25mm

色譜柱比較流速考察：上圖：柱流速0.8ml/min，中圖：1.0ml/min，下圖：1.5ml/min升溫程序考察：初始100℃3℃/min升至170℃，保持3min初始60℃，保持2min，3℃/min升至70℃，保持3min，5℃/min升至200℃，保持3min

初始40℃，保持2min，1℃/min升至50℃，保持2min，3℃/min升至70℃，保持3min,7℃/min升至220℃，保持3min

初始35℃，保持2min，1℃/min升至40℃，保持2min，3℃/min升至60℃，保持3min,7℃/min升至200℃，保持3min

穩(wěn)定性和精密度試驗(yàn)重現(xiàn)性試驗(yàn)河北易縣北柴胡野生

河北安國(guó)北柴胡

內(nèi)蒙古喀喇沁旗錦山鎮(zhèn)南柴胡野生

山西省寧武縣南柴胡野生

北柴胡南柴胡栽培北柴胡栽培南柴胡第三部分中成藥指紋圖譜的建立供試品的制備方法測(cè)定方法、條件的考察中藥材、中間體、成品的相關(guān)性考察方法學(xué)考察：穩(wěn)定性、精密度、重現(xiàn)性試驗(yàn)指紋圖譜的建立成品的穩(wěn)定性試驗(yàn)中藥注射劑及其有效部位或

中間體指紋圖譜的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)定義：中藥注射劑指紋圖譜系指中藥注射劑經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示該注射劑特性的共有峰的圖譜。要求：以有效部位或中間體投料的中藥注射劑，還需制定有效部位或中間體的指紋圖譜。一、指紋圖譜的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容：供試品和參照物的制備、檢測(cè)方法、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)。1、供試品的制備要求：根據(jù)注射劑、有效部位或中間體中所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)和檢測(cè)方法的需要，選擇適宜的方法進(jìn)行制備。注意：制備方法必須確保該注射劑、有效部位或中間體主要化學(xué)成分在指紋圖譜中的再現(xiàn)。2、參照物的制備制定指紋圖譜必須設(shè)立參照物，應(yīng)根據(jù)供試品中所含化學(xué)成分的性質(zhì)，選擇適宜的對(duì)照品作為參照物；如果沒(méi)有適宜的對(duì)照品，可選擇適宜的內(nèi)標(biāo)物作為參照物。參照物的制備應(yīng)根據(jù)檢測(cè)方法的需要，選擇適宜的方法。3.測(cè)定方法包括測(cè)定方法、儀器、試劑、測(cè)定條件等。應(yīng)根據(jù)注射劑、有效部位和中間體所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)，選擇適宜的檢測(cè)方法。建議優(yōu)先考慮色譜方法。對(duì)于成分復(fù)雜的注射劑、有效部位和中間體，特別是復(fù)方中藥注射劑，必要時(shí)可以考慮采用多種檢測(cè)方法，建立多張指紋圖譜。制定指紋圖譜所采用的色譜柱、薄層板、試劑、測(cè)定條件等必須固定，采用光譜方法制定指紋圖譜，相應(yīng)的測(cè)定條件也必須固定。4.指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)(1)指紋圖譜根據(jù)供試品指紋圖譜的檢測(cè)結(jié)果，建立指紋圖譜。采用HPLC和GC制定指紋圖譜，根據(jù)樣品中所含成分的情況確定記錄時(shí)間；采用薄層掃描法制定指紋圖譜，必須提供從原點(diǎn)至溶劑前沿的圖譜；采用光譜法制定指紋圖譜，必須按各種光譜的相應(yīng)規(guī)定提供全譜。對(duì)于化學(xué)成分類型復(fù)雜的中藥注射劑、有效部位和中間體，特別是中藥復(fù)方注射劑，必要時(shí)建立多張指紋圖譜。2.共有指紋峰的標(biāo)定根據(jù)10批次以上供試品的檢測(cè)結(jié)果，標(biāo)定共有指紋峰。色譜法采用相對(duì)保留時(shí)間標(biāo)定指紋峰，光譜法采用波長(zhǎng)或波數(shù)標(biāo)定指紋峰。色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間根據(jù)參照物的保留時(shí)間計(jì)算。3、指紋圖譜的評(píng)價(jià)以指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件評(píng)價(jià)以色譜峰面積的比值評(píng)價(jià)共有指紋峰面積的比值以對(duì)照品作為參照物的指紋圖譜，以參照物峰面積作為1，計(jì)算各共有指紋峰面積與參照物峰面積的比值；以內(nèi)標(biāo)物作為參照物的指紋圖譜，則以共有指紋峰中其中一個(gè)峰（要求峰面積相對(duì)較大、較穩(wěn)定的共有峰）的峰面積作為1，計(jì)算其他各共有指紋峰面積的比值。未達(dá)基線分離的共有峰，應(yīng)計(jì)算該組峰的總峰面積作為峰面積，同時(shí)標(biāo)定該組各峰的相對(duì)保留時(shí)間。以光譜方法制定指紋圖譜，參照色譜方法的相應(yīng)要求執(zhí)行。峰面積比值的要求：保留時(shí)間小于或等于30分鐘的共有峰：Ai≥20％At：SD≤±20％；

20％At>Ai≥10％At：SD≤±25％；

10％At>Ai≥5％At：SD≤±30％；Ai<5％At：峰面積比值不作要求，但必須標(biāo)定相對(duì)保留時(shí)間。保留時(shí)間超過(guò)30分鐘的共有峰：

Ai≥10％At：按上述規(guī)定執(zhí)行；

Ai<10％At：峰面積比值不作要求，但必須標(biāo)定相對(duì)保留時(shí)間。非共有峰面積

供試品圖譜與指紋圖譜比較，非共有峰總面積不得大于總峰面積的5％。(5)中藥材、有效部位、中間體和注射劑指紋圖譜之間的相關(guān)性

為了確保制備工藝的科學(xué)性和穩(wěn)定性，應(yīng)根據(jù)中藥材、有效部位、中間體和注射劑的指紋圖譜，標(biāo)定各圖譜之間的相關(guān)性。二、起草說(shuō)明目的在于說(shuō)明制定檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中各個(gè)項(xiàng)目的理由，規(guī)定各項(xiàng)目指標(biāo)的依據(jù)、技術(shù)條件和注意事項(xiàng)等，既要有理論解釋，又要有實(shí)踐工作的總結(jié)及試驗(yàn)數(shù)據(jù)。1、供試品的制備

應(yīng)說(shuō)明選用制備方法的依據(jù)。如供試品需要提取、純化，應(yīng)考察提取溶劑、提取方法、純化方法等，提取、純化方法應(yīng)力求最大限度地保留供試品中的化學(xué)成分。

2、參照物的制備

應(yīng)說(shuō)明參照物的選擇和試驗(yàn)樣品制備的依據(jù)。應(yīng)根據(jù)供試品中所含成分的性質(zhì)，選擇適宜的對(duì)照品或內(nèi)標(biāo)物作為參照物。參照物的制備應(yīng)根據(jù)檢測(cè)方法的需要，選擇適宜的方法進(jìn)行，并說(shuō)明制備理由。

3、檢測(cè)方法

根據(jù)供試品的特點(diǎn)和所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)選擇相應(yīng)的檢測(cè)方法。應(yīng)說(shuō)明選擇檢測(cè)方法的依據(jù)和該檢測(cè)方法的原理，確定該檢測(cè)方法的方法學(xué)考察資料和相關(guān)圖（包括穩(wěn)定性、精密度和重現(xiàn)性）。對(duì)于所含成分類型較多的中藥注射劑、有效部位和中間體，特別是復(fù)方中藥注射劑，一種檢測(cè)方法或一張圖譜不能反映該注射劑、有效部位和中間體的固有特性，必要時(shí)可以考慮采用多種檢測(cè)方法或一種檢測(cè)方法的多種測(cè)定條件，制備多張指紋圖譜。制定指紋圖譜所采用的色譜柱、薄層板等必須固定廠家和型號(hào)、規(guī)格，試劑、測(cè)定條件等也必須相應(yīng)固定。采用光譜法建立指紋圖譜，其相應(yīng)的檢測(cè)條件也必須固定。穩(wěn)定性、精密度、重現(xiàn)性的考察方法和要求參見(jiàn)中藥材部分。

4、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)

(1)指紋圖譜

根據(jù)供試品圖譜所給出的相關(guān)參數(shù)，制定指紋圖譜，采用阿拉伯?dāng)?shù)字標(biāo)示共有峰，用“S”標(biāo)示參照物的峰。采用高效液相色譜法和氣相色譜法制定指紋圖譜，應(yīng)提供2倍于對(duì)照指紋圖譜的記錄圖，以考察樣品中的主要成分是否全部出峰。提供建立對(duì)照指紋圖譜的有關(guān)數(shù)據(jù)，包括各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間、各共有峰面積的比值。采用光譜方法建立的指紋圖譜，也必須提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)。

(2)共有指紋峰的標(biāo)定

應(yīng)根據(jù)10批次以上供試品圖譜的檢測(cè)結(jié)果，標(biāo)定中藥注射劑、有效部位和中間體的共有指紋峰。說(shuō)明標(biāo)定共有指紋峰的理由，并附各批供試品圖譜。

(3)共有指紋峰面積的比值

應(yīng)根據(jù)10批次以上供試品圖譜中共有指紋峰面積的比值，計(jì)算平均比值，列出各批供試品的檢測(cè)數(shù)據(jù)。

(4)非共有峰面積

計(jì)算10批次以上供試品圖譜中非共有峰面積及占總峰面積的百分比，列出各批供試品的檢測(cè)數(shù)據(jù)。

(5)中藥材、有效部位、中間體和注射劑指紋圖譜之間的相關(guān)性

應(yīng)根據(jù)中藥材、有效部位、中間體和注射劑的指紋圖譜，標(biāo)定各指紋圖譜之間的相關(guān)性。必要時(shí)可采用加入某一中藥材、有效部位或中間體的供試品或制備某一中藥材、有效部位或中間體陰性供試品的方法標(biāo)定各指紋圖譜之間的相關(guān)性。提供相關(guān)性研究的指紋圖譜。

(6)中試產(chǎn)品的指紋圖譜申報(bào)臨床的中藥注射劑必須提供三批以上中試產(chǎn)品的指紋圖譜。申報(bào)生產(chǎn)的中藥注射劑必須提供十批以上中試產(chǎn)品的指紋圖譜。5、中藥注射劑指紋圖譜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)（草案）書寫格式(1)供試品的制備(2)對(duì)照品溶液或內(nèi)標(biāo)物溶液的制備(3)測(cè)定方法（包括儀器、試劑、測(cè)定條件和測(cè)定方法）(4)指紋圖譜及各項(xiàng)技術(shù)參數(shù)(5)起草說(shuō)明(6)有效部位或中間體的指紋圖譜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)及起草說(shuō)明三、中藥注射劑指紋圖譜研究實(shí)例

參芪注射液指紋圖譜的研究處方：黃芪、黨參黃芪藥材指紋圖譜十批黃芪指紋圖譜相似度結(jié)果黨參藥材指紋圖譜十批黨參指紋圖譜相似度結(jié)果參芪扶正注射液中間體指紋圖譜10批參芪扶正注射液中間體指紋圖譜相似度結(jié)果十批參芪扶正注射液指紋圖譜參芪扶正注射液指紋圖譜相似度結(jié)果黨參參芪中間體黃芪注射液黨參、黃芪——中間體——注射液相關(guān)性注射液中間體、黃芪和黨參提取液

的總離子流圖不同檢測(cè)波長(zhǎng)下的指紋圖譜指紋圖譜中部分指紋峰的結(jié)構(gòu)確證毛蕊異黃酮葡萄糖苷芒柄花素葡萄糖苷9,10-二甲氧基紫檀烷-3-o-β-葡萄糖苷tR＝31.446min毛蕊異黃酮葡萄糖苷

447:M+H469:M+Na915:2M+NaM=446

tR＝42.763min芒柄花素葡萄糖苷431:M+H453:M+Na883:2M+NaM=430第四部分指紋圖譜的其他作用一、指紋圖譜在黃芪注射液制備工藝統(tǒng)一中的作用8個(gè)廠家注射液皂苷成分不同企業(yè)生產(chǎn)注射液指紋圖譜比較(ELSD檢測(cè))8個(gè)廠家注射液黃酮類成分不同企業(yè)生產(chǎn)注射液指紋圖譜比較(紫外檢測(cè))根據(jù)三種制備工藝制備的注射液

紫外檢測(cè)指紋圖譜比較

藥材：山西渾源白：部頒標(biāo)準(zhǔn)紅：企業(yè)1黃：企業(yè)2根據(jù)三種制備工藝制備的注射液ELSD檢測(cè)指紋圖譜比較

藥材：山西渾源白：部頒標(biāo)準(zhǔn)紅：企業(yè)1黃：企業(yè)2二、柴胡注射液的指紋圖譜研究12個(gè)企業(yè)第一階段送檢樣品考察圖譜（1）

江西銀濤批號(hào)020920

河南新鄉(xiāng)新輝批號(hào)021010

焦作康華批號(hào)020705

西安黃河批號(hào)020828

12個(gè)企業(yè)第一階段送檢樣品考察圖譜（2）四川升和批號(hào)020822

昆明興中批號(hào)020307

河南百泉批號(hào)020703

廣東博羅先鋒批號(hào)020703

12個(gè)企業(yè)第一階段送檢樣品考察圖譜（3）山西晉新雙鶴批號(hào)0208192

河南浙川批號(hào)020602

四川升和滬醫(yī)批號(hào)020822

三九萬(wàn)榮批號(hào)020607

研究單位采用三種制備工藝生