毛細(xì)管電泳(劉志廣版本)

第十一章

高效毛細(xì)管電泳分析一、概述generalization二、經(jīng)典電泳分析法traditionalelectrophoresis三、高效毛細(xì)管電泳分析法highperformancecapillaryelectrophoresis第一節(jié)

概述generalizationHighperformancecapillaryelectrophoresis,HPCE2023/2/6一、概述generalization

在電解質(zhì)溶液中，位于電場中的帶電離子在電場力的作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反的電極方向遷移的現(xiàn)象，稱之為電泳。由于不同離子所帶電荷及性質(zhì)的不同，遷移速率不同，可實(shí)現(xiàn)分離。

1937年，Tiselius(瑞典)將蛋白質(zhì)混合液放在兩段緩沖溶液之間，兩端施以電壓進(jìn)行自由溶液電泳，第一次將人血清提取的蛋白質(zhì)混合液分離出白蛋白和α、β、γ球蛋白；

發(fā)現(xiàn)樣品的遷移速度和方向由其電荷和淌度決定；第一次的自由溶液電泳；第一臺(tái)電泳儀；1948年，獲諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)；（動(dòng)畫）2023/2/6二、經(jīng)典電泳分析

traditionalelectrophoresis

利用電泳現(xiàn)象對(duì)某些化學(xué)或生物物質(zhì)進(jìn)行分離分析的方法和技術(shù)叫電泳法或電泳技術(shù)。按形狀分類：U型管電泳、柱狀電泳、板電泳；按載體分類：濾紙電泳、瓊脂電泳、聚丙烯酰胺電泳、自由電泳；傳統(tǒng)電泳分析：操作煩瑣，分離效率低，定量困難，無法與其他分析相比。1981年，Jorgenson和Luckas，用75m內(nèi)徑石英毛細(xì)管進(jìn)行電泳分析，柱效高達(dá)40萬/m，促進(jìn)電泳技術(shù)發(fā)生了根本變革，迅速發(fā)展成為可與GC、HPLC相媲美的嶄新的分離分析技術(shù)——高效毛細(xì)管電泳。2023/2/6三、高效毛細(xì)管電泳分析

highperformancecapillaryelectrophoresis高效毛細(xì)管電泳在技術(shù)上采取了兩項(xiàng)重要改進(jìn)：

一是采用了0.05mm內(nèi)徑的毛細(xì)管,；二是采用了高達(dá)數(shù)千伏的電壓。毛細(xì)管的采用使產(chǎn)生的熱量能夠較快散發(fā)，大大減小了溫度效應(yīng)，使電場電壓可以很高。電壓升高，電場推動(dòng)力大，又可進(jìn)一步使柱徑變小，柱長增加，高效毛細(xì)管電泳的柱效遠(yuǎn)高于高效液相色譜，理論塔板數(shù)高達(dá)幾十萬塊/米，特殊柱子可以達(dá)到數(shù)百萬。2023/2/6分離過程

電場作用下，毛細(xì)管柱中出現(xiàn)：電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象。

帶電粒子的遷移速度=電泳+電滲流；兩種速度的矢量和。

正離子：兩種效應(yīng)的運(yùn)動(dòng)方向一致，在負(fù)極最先流出；

中性粒子無電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽離子后流出；

陰離子：兩種效應(yīng)的運(yùn)動(dòng)方向相反。ν電滲流>ν電泳時(shí),陰離子在負(fù)極最后流出,在這種情況下,不但可以按類分離,除中性粒子外,同種類離子由于受到的電場力大小不一樣也同時(shí)被相互分離。（動(dòng)畫）2023/2/6高效毛細(xì)管電泳的特點(diǎn)1.儀器簡單、易自動(dòng)化

電源、毛細(xì)管、檢測器、溶液瓶2.分析速度快、分離效率高

在3.1min內(nèi)分離36種無機(jī)及有機(jī)陰離子，4.1min內(nèi)分離了24種陽離子；分離柱效：105～107/m理論塔板數(shù)；3.操作方便、消耗少

進(jìn)樣量極少，水介質(zhì)中進(jìn)行；4.應(yīng)用范圍極廣有機(jī)物、無機(jī)物、生物、中性分子；生物大分子等；分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、化學(xué)、環(huán)境保護(hù)、材料等；

2023/2/6內(nèi)容選擇結(jié)束第一節(jié)概述generalization第二節(jié)高效毛細(xì)管電泳的理論基礎(chǔ)basictheoryofHPCE第三節(jié)高效毛細(xì)管電泳儀器highperformancecapillaryelectrophoresisapparatus第四節(jié)高效毛細(xì)管電泳的分離模式separatetypesofHPCE第五節(jié)應(yīng)用與進(jìn)展applicationandadvancesofHPCE2023/2/6第十一章

高效毛細(xì)管電泳分析法一、PHCE基本原理basicprinciplesofPHCE二、電滲現(xiàn)象與電滲流electroosmosisandelectroosmoticflow三、影響電滲流的因素factorsinfluencedelectroosmosis四、淌度mobility五、PHCE中的參數(shù)與關(guān)系式parametersandrelationinHPCE六、影響分離效率的因素factorsinfluencedseparationefficiency第二節(jié)

高效毛細(xì)管電泳理論基礎(chǔ)highperformancecapillaryelectrophoresis,HPCEbasictheoryofHPCE2023/2/6一、高效毛細(xì)管電泳(HPCE)基本原理

basicprinciplesofPHCE

電泳是指帶電離子在電場中的定向移動(dòng)，不同離子具有不同的遷移速度，遷移速度與哪些因素有關(guān)？當(dāng)帶電離子以速度ν

在電場中移動(dòng)時(shí)，受到大小相等、方向相反的電場推動(dòng)力和平動(dòng)摩擦阻力的作用。電場力：FE=qE

阻力：F=fν故：qE=fνq—離子所帶的有效電荷；E—電場強(qiáng)度；ν—離子在電場中的遷移速度；f—平動(dòng)摩擦系數(shù)(對(duì)于球形離子：f=6πηγ；γ—離子的表觀液態(tài)動(dòng)力學(xué)半徑；η—介質(zhì)的粘度；)2023/2/6所以，遷移速度：（球形離子）

物質(zhì)離子在電場中差速遷移是電泳分離的基礎(chǔ)。淌度μ

：單位電場強(qiáng)度下的平均電泳速度。

2023/2/6二、電滲現(xiàn)象與電滲流

electroosmosisandelectroosmoticflow1.電滲流現(xiàn)象

當(dāng)固體與液體接觸時(shí)，固體表面由于某種原因帶一種電荷，則因靜電引力使其周圍液體帶有相反電荷，在液-固界面形成雙電層，二者之間存在電位差。

當(dāng)液體兩端施加電壓時(shí)，就會(huì)發(fā)生液體相對(duì)于固體表面的移動(dòng)，這種液體相對(duì)于固體表面的移動(dòng)的現(xiàn)象叫電滲現(xiàn)象。

電滲現(xiàn)象中整體移動(dòng)著的液體叫電滲流（electroosmoticflow，簡稱EOF）。

2023/2/62.HPCE中的電滲現(xiàn)象與電滲流

石英毛細(xì)管柱，內(nèi)充液pH>3時(shí)，表面電離成-SiO-,管內(nèi)壁帶負(fù)電荷，形成雙電層。

在高電場的作用下，帶正電荷的溶液表面及擴(kuò)散層向陰極移動(dòng)，由于這些陽離子實(shí)際上是溶劑化的，故將引起柱中的溶液整體向負(fù)極移動(dòng)，速度ν電滲流。2023/2/63.HPCE中電滲流的大小與方向

電滲流的大小用電滲流速度ν電滲流表示，取決于電滲淌度μ和電場強(qiáng)度E。即

ν電滲流=μE電滲淌度取決于電泳介質(zhì)及雙電層的Zeta電勢，即

μ=ε0εξε0—真空介電常數(shù)；ε—介電常數(shù)；ξ—毛細(xì)管壁的Zeta電勢。

ν電滲流=ε0εξ

E實(shí)際電泳分析，可在實(shí)驗(yàn)測定相應(yīng)參數(shù)后，按下式計(jì)算

ν電滲流=Lef/teoLef—毛細(xì)管有效長度；teo—電滲流標(biāo)記物（中性物質(zhì)）的遷移時(shí)間。2023/2/6HPCE中電滲流的方向

電滲流的方向取決于毛細(xì)管內(nèi)表面電荷的性質(zhì)：內(nèi)表面帶負(fù)電荷，溶液帶正電荷，電滲流流向陰極；內(nèi)表面帶正負(fù)電荷，溶液帶負(fù)電荷，電滲流流向陽極；石英毛細(xì)管；帶負(fù)電荷，電滲流流向陰極；改變電滲流方向的方法：

（1）毛細(xì)管改性表面鍵合陽離子基團(tuán)；

（2）加電滲流反轉(zhuǎn)劑內(nèi)充液中加入大量的陽離子表面活性劑，將使石英毛細(xì)管壁帶正電荷，溶液表面帶負(fù)電荷。電滲流流向陽極。2023/2/64.HPCE中電滲流的流形電荷均勻分布，整體移動(dòng)，電滲流的流動(dòng)為平流，塞式流動(dòng)（譜帶展寬很?。?；液相色譜中的溶液流動(dòng)為層流，拋物線流型，管壁處流速為零，管中心處的速度為平均速度的2倍（引起譜帶展寬較大）。2023/2/65.HPCE中電滲流的作用

電滲流的速度約等于一般離子電泳速度的5～7倍；

各種電性離子在毛細(xì)管柱中的遷移速度為：

ν+=ν電滲流+ν+ef陽離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致；

ν-=ν電滲流-ν-ef陰離子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流相反；

ν0=ν電滲流中性粒子運(yùn)動(dòng)方向與電滲流一致；（1）可一次完成陽離子、陰離子、中性粒子的分離；（2）改變電滲流的大小和方向可改變分離效率和選擇性，如同改變LC中的流速；（3）電滲流的微小變化影響結(jié)果的重現(xiàn)性；在HPCE中，控制電滲流非常重要。2023/2/6三、HPCE中影響電滲流的因素

factorsinfluencedelectroosmosis1.電場強(qiáng)度的影響

電滲流速度和電場強(qiáng)度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長度一定時(shí)，電滲流速度正比于工作電壓。2.毛細(xì)管材料的影響

不同材料毛細(xì)管的表面電荷特性不同，產(chǎn)生的電滲流大小不同；2023/2/63.電解質(zhì)溶液性質(zhì)的影響（1）溶液pH的影響

對(duì)于石英毛細(xì)管，溶液pH增高時(shí)，表面電離多，電荷密度增加，管壁zeta電勢增大，電滲流增大，pH=7，達(dá)到最大；pH<3，完全被氫離子中和，表面電中性，電滲流為零。分析時(shí)，采用緩沖溶液來保持pH穩(wěn)定。（2）陰離子的影響在其他條件相同，濃度相同而陰離子不同時(shí)，毛細(xì)管中的電流有較大差別，產(chǎn)生的焦耳熱不同。緩沖溶液離子強(qiáng)度，影響雙電層的厚度、溶液黏度和工作電流，明顯影響電滲流大小。緩沖溶液離子強(qiáng)度增加，電滲流下降。2023/2/62023/2/64.溫度的影響

毛細(xì)管內(nèi)溫度的升高，使溶液的黏度下降，電滲流增大。溫度變化來自于“焦耳熱”；

焦耳熱：毛細(xì)管溶液中有電流通過時(shí)，產(chǎn)生的熱量；

HPCE中的焦耳熱與背景電解質(zhì)的摩爾電導(dǎo)、濃度及電場強(qiáng)度成正比。溫度每變化1，將引起背景電解質(zhì)溶液黏度變化2%～3%；2023/2/65.添加劑的影響（1）加入濃度較大的中性鹽，如K2SO4，溶液離子強(qiáng)度增大，使溶液的黏度增大，電滲流減小。（2）加入表面活性劑，可改變電滲流的大小和方向；加入不同陽離子表面活性劑來控制電滲流。加入陰離子表面活性劑，如十二烷基硫酸鈉（SDS），可以使壁表面負(fù)電荷增加，zeta電勢增大，電滲流增大；（3）加入有機(jī)溶劑如甲醇、乙腈，使電滲流增大。2023/2/6四、淌度mobility

淌度：帶電離子在單位電場下的遷移速度；

淌度不同是電泳分離的基礎(chǔ)。1.絕對(duì)淌度(absolutemobility)μab無限稀釋溶液中帶電離子在單位電場強(qiáng)度下的平均遷移速度，簡稱淌度?？稍谑謨?cè)中查閱。2.有效淌度(effectivemobility)μef實(shí)際溶液中的淌度(實(shí)驗(yàn)中測定的)。μef=∑aiμi

ai—溶質(zhì)i的解離度；μi—溶質(zhì)i在解離狀態(tài)下的絕對(duì)淌度3.表觀淌度

μap離子在實(shí)際分離過程中的遷移速度（表觀遷移速度）：

νap=μapE2023/2/6五、HPCE中的參數(shù)與關(guān)系式

parametersandrelationinHPCE1.遷移時(shí)間（保留時(shí)間）

HPCE兼具有電化學(xué)的特性和色譜分析的特性。有關(guān)色譜理論也適用。V—外加電壓；L—毛細(xì)管總長度；2.分離效率（塔板數(shù)）

在HPCE中，僅存在縱向擴(kuò)散，σ2=2Dt

擴(kuò)散系數(shù)小的溶質(zhì)比擴(kuò)散系數(shù)大的分離效率高，分離生物大分子的依據(jù)。2023/2/63.分離度

影響分離度的主要因素；工作電壓V；毛細(xì)管有效長度與總長度比；有效淌度差。分離度可按譜圖直接由下式計(jì)算：2023/2/6六、影響分離效率的因素—區(qū)帶展寬

factorsinfluencedtheefficiency—bandbroadening

1.縱向擴(kuò)散的影響

在HPCE中，縱向擴(kuò)散引起的峰展寬：σ2=2Dt由擴(kuò)散系數(shù)和遷移時(shí)間決定。大分子的擴(kuò)散系數(shù)小，可獲得更高的分離效率，大分子生物試樣分離的依據(jù)。2.進(jìn)樣的影響

當(dāng)進(jìn)樣塞長度太大時(shí)，引起的峰展寬大于縱向擴(kuò)散。分離效率明顯下降；理想情況下，進(jìn)樣塞長度：

Winj=(24Dt)1/2實(shí)際操作時(shí)進(jìn)樣塞長度小于或等于毛細(xì)管總長度的1%～2%。2023/2/63.焦耳熱與溫度梯度的影響

電泳過程產(chǎn)生的焦耳熱可由下式計(jì)算：m—電解質(zhì)溶液的摩爾電導(dǎo)；I—工作電流：cm—電解質(zhì)濃度；

散熱過程中，在毛細(xì)管內(nèi)形成溫度梯度（中心溫度高），破壞了塞流，導(dǎo)致區(qū)帶展寬。改善方法：（1）減小毛細(xì)管內(nèi)徑；（2）控制散熱；2023/2/64.溶質(zhì)與管壁間的相互作用

存在吸附與疏水作用，造成譜帶展寬；蛋白質(zhì)、多肽帶電荷數(shù)多，有較多的疏水基，吸附問題特別嚴(yán)重，是目前分離分析該類物質(zhì)的一大難題。細(xì)內(nèi)徑毛細(xì)管柱，一方面有利于散熱，另一方面比表面積大，又增加了溶質(zhì)吸附的機(jī)會(huì)。減小吸附的方法和途徑：加入兩性離子代替強(qiáng)電解質(zhì)，兩性離子一端帶正電，另一端帶負(fù)電，帶正電一端與管壁負(fù)電中心作用，濃度約為溶質(zhì)的100-1000倍時(shí)，抑制對(duì)蛋白質(zhì)吸附，又不增加溶液電導(dǎo)，對(duì)電滲流影響不大。2023/2/65.其他影響因素

（1）電分散作用對(duì)譜帶展寬的影響當(dāng)溶質(zhì)區(qū)帶與緩沖溶液區(qū)帶的電導(dǎo)不同時(shí)，也造成譜帶展寬；盡量選擇與試樣淌度相匹配的背景電解質(zhì)溶液。（2）“層流”現(xiàn)象對(duì)譜帶展寬的影響一般情況下，HPCE中不存在層流，但當(dāng)毛細(xì)管兩端存在壓力差時(shí)，出現(xiàn)拋物線形的層流；

產(chǎn)生的原因：毛細(xì)管兩端液面高度不同。實(shí)際操作時(shí)，保持毛細(xì)管兩端緩沖溶液平面高度相同。2023/2/6請(qǐng)選擇內(nèi)容第一節(jié)概述generalization第二節(jié)高效毛細(xì)管電泳的理論基礎(chǔ)basictheoryofHPCE第三節(jié)高效毛細(xì)管電泳儀器highperformancecapillaryelectrophoresisapparatus第四節(jié)高效毛細(xì)管電泳的分離模式separatetypesofHPCE第五節(jié)應(yīng)用與進(jìn)展applicationandadvancesofHPCE結(jié)束2023/2/6第十一章

高效毛細(xì)管電泳分析法一、高效毛細(xì)管電泳儀highperformancecapillaryelectrophoresisapparatus二、流程與主要部件processandmainassembly三、進(jìn)樣方式injectionmethod第三節(jié)

高效毛細(xì)管電泳儀highperformancecapillaryelectrophoresis,HPCEhighperformancecapillaryelectrophoresisapparatus2023/2/6一、高效毛細(xì)管電泳儀

highperformancecapillaryelectrophoresisapparatus2023/2/6儀器22023/2/6儀器32023/2/6二、儀器流程與主要部件

processandmainassembly

電壓：0～30kV；

分離柱不涂敷任何固定液；紫外或激光誘導(dǎo)熒光檢測器；（可檢測到：10-19～10-21

mol/L）2023/2/61.高壓電源（1）0～30

kV穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源；（2）具有恒壓、恒流、恒功率輸出；（3）電場強(qiáng)度程序控制系統(tǒng)；（4）電壓穩(wěn)定性：0.1%；（5）電源極性易轉(zhuǎn)換；2.毛細(xì)管柱

（1）材料：石英：各項(xiàng)性能好；玻璃：光學(xué)、機(jī)械性能差；（2）規(guī)格：內(nèi)徑20～75μm，外徑350～400μm；長度<=1m2023/2/63.緩沖液池

化學(xué)惰性，機(jī)械穩(wěn)定性好；4.檢測器

要求：具有極高靈敏度，可柱端檢測；檢測器、數(shù)據(jù)采集與計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理一體化；

類型檢測限/mol特點(diǎn)紫外-可見10-13～10-15加二極管陣列，光譜信息熒光10-15～10-17靈敏度高，樣品需衍生激光誘導(dǎo)熒光10-18～10-20靈敏度極高，樣品需衍生電導(dǎo)10-18～10-19離子靈敏，需專用的裝置；2023/2/6三、毛細(xì)管電泳的進(jìn)樣方式

injectionmethodof

HPCE進(jìn)樣量：毛細(xì)管長度的1%-2%；納升級(jí)、非常小；1.流體力學(xué)進(jìn)樣方式

（1）進(jìn)樣端加壓（2）出口端抽真空（3）虹吸進(jìn)樣2023/2/6

毛細(xì)管一端插入樣品瓶，加電壓；2.電動(dòng)進(jìn)樣方式

進(jìn)樣不均：電歧視現(xiàn)象，淌度大的離子比淌度大的進(jìn)樣量大；離子丟失：淌度大且與電滲流方向相反的離子可能進(jìn)不去；

特別適合黏度大的試樣；3.擴(kuò)散進(jìn)樣試樣通過擴(kuò)散作用進(jìn)入分離柱端口處。2023/2/6內(nèi)容選擇結(jié)束第一節(jié)概述generalization第二節(jié)高效毛細(xì)管電泳的理論基礎(chǔ)basictheoryofHPCE第三節(jié)高效毛細(xì)管電泳儀器highperformancecapillaryelectrophoresisapparatus第四節(jié)高效毛細(xì)管電泳的分離模式separatetypesofHPCE第五節(jié)應(yīng)用與進(jìn)展applicationsandadvancesofHPCE2023/2/6第十一章

高效毛細(xì)管電泳分析法一、毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)capillaryzoneelectrophoresis二、毛細(xì)管凝膠電泳(CZE)capillarygelelectrophoresis三、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜micelleelectrokineticcapillaryelectrophoresis四、毛細(xì)管等電聚焦(CIEF)capillaryisoelectricfocusing五、毛細(xì)管等速電泳capillaryisotachophoresis第四節(jié)

高效毛細(xì)管電泳分離模式highperformancecapillaryelectrophoresis,HPCEseparatetypesofHPCE

2023/2/6分離類型八種分離類型，介紹常用的幾種；根據(jù)試樣性質(zhì)不同，采用不同的分離類型；每種機(jī)理的選擇性不同；2023/2/6一、毛細(xì)管區(qū)帶電泳

capillaryzoneelectrophoresis，CZE

帶電粒子的遷移速度=電泳和電滲流速度的矢量和。

正離子：兩種效應(yīng)的運(yùn)動(dòng)方向一致，在負(fù)極最先流出；中性粒子：無電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽離子后流出；

陰離子：兩種效應(yīng)的運(yùn)動(dòng)方向相反；ν電滲流>ν電泳時(shí),陰離子在負(fù)極最后流出,在這種情況下,不但可以按類分離,同種類離子由于差速遷移被相互分離。

最基本、應(yīng)用廣的分離模式；2023/2/6二、毛細(xì)管凝膠電泳

capillarygelelectrophoresis，CGE

將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分?jǐn)U散，所得峰型尖銳，分離效率高。蛋白質(zhì)、DNA等的電荷/質(zhì)量比與分子大小無關(guān)，CZE模式很難分離，采用CGE能獲得良好分離，DAN排序的重要手段。特點(diǎn)：抗對(duì)流性好，散熱性好，分離度極高。無膠篩分技術(shù)：采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚丙烯酰胺。柱便宜、易制備。2023/2/6

1.緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，其濃度達(dá)到臨界濃度，形成一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束。三、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（MECC，MEKC）

micellarelectrokineticcapillarychromatography，MEKC

在電場力的作用下，膠束在柱中移動(dòng)。2023/2/6

2.電泳流和電滲流的方向相反，且ν電滲流>ν電泳，負(fù)電膠束以較慢的速度向負(fù)極移動(dòng)；

5.色譜與電泳分離模式的結(jié)合。3.中性分子在膠束相和溶液（水相）間分配，疏水性強(qiáng)的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時(shí)間長；4.可用來分離中性物質(zhì)，擴(kuò)展了高效毛細(xì)管電泳的應(yīng)用范圍；2023/2/6

1.根據(jù)等電點(diǎn)差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù)；2.毛細(xì)管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)（合成的具有不同等電點(diǎn)范圍的脂肪族多胺基多羧酸混合物），當(dāng)施加直流電壓（6～8V）時(shí)，管內(nèi)將建立一個(gè)由陽極到陰極逐步升高的pH梯度；3.氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液pH有關(guān)，在酸性溶液中帶正電荷，反之帶負(fù)電荷。在其等電點(diǎn)時(shí)，呈電中性，淌度為零；四、毛細(xì)管等電聚焦

capillaryisoelectricfocusing，CIEF2023/2/6

4.聚焦：具有不同等電點(diǎn)的生物試樣在電場力的作用下遷移，分別到達(dá)滿足其等電點(diǎn)pH的位置時(shí)，呈電中性，停止移動(dòng)，形成窄溶質(zhì)帶而相互分離；

5.陽極端裝稀磷酸溶液，陰極端裝稀NaOH溶液；6.加壓將毛細(xì)管內(nèi)分離后的溶液推出經(jīng)過檢測器檢測；7.電滲流在CIEF中不利，應(yīng)消除或減小。2023/2/6

1.將兩種淌度差別很大的緩沖液分別作為前導(dǎo)離子(充滿毛細(xì)管)和尾隨離子，試樣離子的淌度全部位于兩者之間，并以同一速度移動(dòng)。2.負(fù)離子分析時(shí)，前導(dǎo)電解質(zhì)的淌度大于試樣中所有負(fù)離子的。所有試樣都按前導(dǎo)離子的速度等速向陽極前進(jìn)，逐漸形成各自獨(dú)立的區(qū)帶而分離。陰極進(jìn)樣，陽極檢測。五、毛細(xì)管等速電泳

capillaryisotachophoresis，CITP2023/2/6

3.不同離子的淌度不同，所形成區(qū)帶的電場強(qiáng)度不同(ν=μE)，淌度大的離子區(qū)帶電場強(qiáng)度小；沿出口到進(jìn)口，將不同區(qū)帶依次排序1、2、3、4電場強(qiáng)度依次增大。假設(shè)“2”號(hào)中離子擴(kuò)散到“3”號(hào)，該區(qū)電場強(qiáng)度大，離子被加速，返回到“2”區(qū)；當(dāng)“2”號(hào)中離子跑到“1”號(hào)區(qū)，離子被減速使之歸隊(duì)；4.特點(diǎn)：界面明顯，富集、濃縮作用；capillaryisotachophoresis，CITP2023/2/6

在毛細(xì)管壁上鍵合或涂漬高效液相色譜的固定液，以電滲流為流動(dòng)相，試樣組分在兩相間的分配為分離機(jī)理的電動(dòng)色譜過程；六、毛細(xì)管電滲色譜

capillaryelectroosmosticchromatography，CEC2023/2/6請(qǐng)選擇內(nèi)容第一節(jié)概述generalization第二節(jié)高效毛細(xì)管電泳的理論基礎(chǔ)basictheoryofHPCE第三節(jié)高效毛細(xì)管電泳儀器highperformancecapillaryelectrophoresisapparatus第四節(jié)高效毛細(xì)管電泳的分離模式separatetypesofHPCE第五節(jié)應(yīng)用與進(jìn)展applicationandadvancesofHPCE結(jié)束2023/2/6第十一章

高效毛細(xì)管電泳分析法一、離子分析analysisofion二、藥物分析analysisofpharmaceutics三、手性化合物分析analysisofchiralcompounds四、氨基酸分析analysisofaminoacids五、核酸分析及DNA測序analysisofnucleicacidsandsequenceofDNA六、新進(jìn)展及熱點(diǎn)問題advancesandspecialtopics第五節(jié)

高效毛細(xì)管電泳應(yīng)用與進(jìn)展highperformancecapillaryelectrophoresis,HPCEapplicationandadvancesofHPCE2023/2/6一、離子分析

analysisofion陽離子分析

遷移方向和電滲流方向一致；4.5min內(nèi)分離了24種金屬離子；陽極進(jìn)樣，陰極檢測；具有很高的靈敏度；2023/2/6陰離子分析陰離子電泳方向和電滲流方向相反、速度接近，分析時(shí)間長、效率低；質(zhì)量小、電荷密度大的離子如：SO4-2、Cl-、F-等，電泳速率大于電滲流，陽極端流出，在陰極端無法檢測；加入電滲流改性劑，十六烷基三甲基溴化