高效液相色譜儀器的使用

關(guān)于高效液相色譜儀器的使用第一頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日儀器的構(gòu)造原理實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作開機(jī)程序化學(xué)工作站簡(jiǎn)介關(guān)機(jī)程序儀器的維護(hù)和保養(yǎng)第二頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日儀器的構(gòu)造原理第三頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日第四頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作濾膜的選擇流動(dòng)相應(yīng)該：HPLC級(jí)過(guò)濾：(最大0.45mm,0.2mm最好)脫氣，尤其在低流速時(shí)互溶準(zhǔn)備流動(dòng)相選擇合適的濾膜聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，醋酸纖維濾膜：適用于水基溶劑，不適用于有機(jī)溶劑。尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，不適用于DMF二甲基甲酰胺。注意：1，每張濾膜只能用一次。

2，水相和有機(jī)相不要搞混。第五頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日流動(dòng)相使用時(shí)的注意事項(xiàng)？1、流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭?、高純水或重蒸?酸堿液及緩沖液需經(jīng)過(guò)濾后使用，過(guò)濾時(shí)注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；2、水需經(jīng)常更換〈一般不超過(guò)2天〉,防止長(zhǎng)菌變質(zhì)；避免溶劑瓶直接日照。有條件的單位可向溶劑中加入的疊氮化鈉。3、使用雙泵時(shí),A、B、C、D四相中,若所用流動(dòng)相中有含鹽,則A、D(進(jìn)液口位于混合器下方〉放置含鹽流動(dòng)相,B、C(進(jìn)液口位于混合器上方〉放置不含鹽流動(dòng)相A、B、C、D四個(gè)儲(chǔ)液器中其中一個(gè)為棕色瓶,用于存放水相流動(dòng)相。第六頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日樣品的準(zhǔn)備：1、采用過(guò)濾或離心方法處理樣品,確保樣品中不含固體顆粒；2、用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱的溶劑制備樣品溶液,盡量用流動(dòng)相制備樣品溶液；3、手動(dòng)進(jìn)樣時(shí),進(jìn)樣量盡量小,使用定量管定量時(shí),進(jìn)樣體積應(yīng)為定量管的3~5倍；第七頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日溶劑截止波長(zhǎng)溶劑UV截止波長(zhǎng)（nm）乙睛190水190環(huán)己烷195己烷200甲醇210乙醇210乙醚220二氯甲烷220氯仿240四氯化碳265四氫呋喃280（220）甲苯285所以，波長(zhǎng)應(yīng)至少比所用溶劑的截止波長(zhǎng)大20nm以上。在使用紫外檢測(cè)器時(shí)，所用波長(zhǎng)與所用溶劑的截止波長(zhǎng)接近（或低于截止波長(zhǎng)）時(shí)，容易產(chǎn)生噪音干擾，從而影響檢測(cè)結(jié)果。第八頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日開機(jī)（關(guān)）程序1、打開SealWash清洗液開關(guān)，調(diào)節(jié)流速為2-3滴/min。2、打開計(jì)算機(jī)，進(jìn)入Window操作系統(tǒng)，并運(yùn)行CAGBootpsrever程序。3、打開1100LC各模塊的電源，等待儀器自檢完畢，1-2min。4、雙擊桌面上“Instrument1Online”圖標(biāo)，進(jìn)入1100化學(xué)工作站。開機(jī)操作：第九頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日進(jìn)入Windows系統(tǒng)后BootpServer自動(dòng)運(yùn)行，電擊將BootpServer窗口最大化，開啟儀器電源后上面會(huì)出現(xiàn)七行通訊信息記錄，表明工作站通訊成功，可以進(jìn)入Agilent化學(xué)工作站。注意：不能關(guān)閉BootpServer窗口，只能最小化，否則將影響工作站通訊。第十頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日熟悉化學(xué)工作站狀態(tài)工具條快捷工具條自動(dòng)進(jìn)樣控制在線信號(hào)顯示儀器參數(shù)顯示區(qū)儀器控制區(qū)第十一頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日通過(guò)View切換不同的任務(wù)界面1，方法與運(yùn)行控制-信號(hào)采集；2，數(shù)據(jù)處理；3，報(bào)告設(shè)計(jì)；4，OQ/PV認(rèn)證；5，診斷功能；第十二頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日輸入流動(dòng)相的量對(duì)著瓶子擊左鍵，然后左鍵單擊SolventbottlesFilling，顯示右面對(duì)話框在TotalVolume下輸入溶劑瓶容量，一般為1.00Liter，ActualVolume下輸入溶劑實(shí)際加入的量，比如0.5Liter選中下面兩個(gè)選項(xiàng)后，在溶劑低于0.1Liter時(shí)停止樣品分析，溶劑用完后泵自動(dòng)關(guān)閉。第十三頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日在工作站上開啟儀器每個(gè)模塊右下方都有開關(guān)鍵，點(diǎn)擊后出現(xiàn)開泵、開燈等提示，選擇“Yes”即將泵、燈等打開。點(diǎn)擊“on”將打開所有模塊，點(diǎn)擊“off”將關(guān)閉所有模塊。第十四頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日改變儀器運(yùn)行參數(shù)對(duì)著儀器模塊點(diǎn)擊左鍵然后點(diǎn)擊SetupPump…,顯示右面的對(duì)話框,在此對(duì)話框中可以設(shè)置泵的參數(shù)。柱箱、檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器等參數(shù)改變操作與此相同第十五頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日調(diào)用/儲(chǔ)存方法方法信息編輯完整方法調(diào)方法存方法/覆蓋保存另存方法右圖為方法存/取對(duì)話框，方法文件后綴名為.m第十六頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日其它功能菜單文件處理運(yùn)行控制儀器控制序列放棄任務(wù)在線幫助工作站任務(wù)切換快捷鍵方法存取快捷鍵序列存取快捷鍵運(yùn)行方法運(yùn)行序列第十七頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日第十八頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日關(guān)機(jī)操作：1，如果使用了緩沖溶液流動(dòng)相應(yīng)先水：甲醇=90：10沖洗系統(tǒng)30min。2，用純有機(jī)相沖洗系統(tǒng)30min。反相色譜用甲醇沖洗。正相色譜用相應(yīng)的溶劑沖洗3，在工作站上關(guān)閉各個(gè)模塊。4，退出工作站，關(guān)閉計(jì)算機(jī)。5，關(guān)閉1100LC各個(gè)模塊的電源。6，關(guān)閉SealWash清洗液開關(guān)。第十九頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日儀器的維護(hù)和保養(yǎng)Agilent1100LC泵如何維護(hù)？Agilent1100LC泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無(wú)脈動(dòng)、流量準(zhǔn)確的流動(dòng)相，及時(shí)合理的維護(hù)非常重要。A：流動(dòng)相使用前請(qǐng)必須過(guò)濾脫氣、。B：使用緩沖鹽時(shí)，要加在線Seal-wash選項(xiàng)。C：關(guān)機(jī)前，用90%的水沖洗系統(tǒng)30分鐘，然后用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng)30分鐘（如甲醇），然后關(guān)泵，（適于反相色譜柱）。[正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗]D：及時(shí)更換PurgeValve內(nèi)的過(guò)濾芯。（當(dāng)打開PurgeValve時(shí)，壓力高于10bar，表明過(guò)濾芯已堵）。E：使用合適的密封圈。第二十頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日色譜柱：1、使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說(shuō)明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動(dòng)相類型等；2、使用符合要求的流動(dòng)相；3、使用保護(hù)柱；4、如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水(如5%甲醇水溶液〉，再用甲醇沖洗；5、色譜柱在不使用時(shí),應(yīng)用甲醇沖洗,取下后緊密封閉兩端保存；6、不要高壓沖洗柱子；7、不要在高溫下長(zhǎng)時(shí)間使用硅膠鍵合相色譜柱；使用過(guò)程中注意輕拿輕放。第二十一頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日使用梯度比例閥時(shí)要注意那些事項(xiàng)？當(dāng)鹽溶液與有機(jī)溶劑溶液混合時(shí)，鹽溶液能與有機(jī)溶劑溶液完全混溶，而不會(huì)出現(xiàn)沉淀。但是在比例閥的混合點(diǎn)，重力作用使鹽顆粒沉淀下來(lái)，通常，閥A接水相/鹽溶液，D接有機(jī)溶劑，此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中，并被溶解。若顛倒過(guò)來(lái)，鹽可能落在有機(jī)溶劑中，出現(xiàn)問(wèn)題。強(qiáng)烈建議：當(dāng)使用緩沖鹽溶液和有機(jī)溶劑時(shí)，推薦將緩沖鹽通道接在A通道上，有機(jī)溶劑通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水沖洗所有的通道，以除去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。第二十二頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日更換色譜柱時(shí)要注意什么事項(xiàng)?

在使用HPLC時(shí),應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對(duì)分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小4~5個(gè)數(shù)量級(jí)，液體流動(dòng)相的流速也比氣相慢1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，樣品進(jìn)入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管、檢測(cè)器）中，樣品分子的擴(kuò)散和滯留，都會(huì)引起色譜峰的展寬，而使柱效降低。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果，儀器的流動(dòng)相管路連接非常重要,一般Agilent1100LC在第一次安裝時(shí),均有受過(guò)專業(yè)培訓(xùn)的安裝工程師負(fù)責(zé)安裝,各種接頭會(huì)處理的非常完美。我們只需在更換色譜柱時(shí)注意接頭處理就可以了，一般柱子入口接頭為不銹鋼卡套接頭，柱子出口為不銹鋼卡套接頭或PEEK管線手?jǐn)Q接頭，當(dāng)完成第一次安裝后，不銹鋼卡套已固定死，當(dāng)接不同的柱子時(shí)，要注意柱子接頭處的形狀和長(zhǎng)度，否則會(huì)產(chǎn)生一個(gè)非常大的死體積。第二十三頁(yè)，共二十五頁(yè)，2022年，8月28日手動(dòng)進(jìn)樣閥需做那些維護(hù)，使用時(shí)要注意什么？對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣器，當(dāng)使用緩沖溶液后，或者進(jìn)濃度差異比較大的樣品時(shí)要用專用工具而不是用帶針頭的注射器沖洗進(jìn)樣口，同時(shí)搬動(dòng)進(jìn)樣閥數(shù)次，每次數(shù)毫升。注意事項(xiàng)：A：安裝時(shí)六通閥的5，6出口要與注射器在同一水平線上，以防止虹吸現(xiàn)象的發(fā)生，導(dǎo)致進(jìn)樣量的重復(fù)性變異。B