高效液相色譜儀器的使用

關(guān)于高效液相色譜儀器的使用第一頁，共二十五頁，2022年，8月28日儀器的構(gòu)造原理實驗前的準(zhǔn)備工作開機程序化學(xué)工作站簡介關(guān)機程序儀器的維護和保養(yǎng)第二頁，共二十五頁，2022年，8月28日儀器的構(gòu)造原理第三頁，共二十五頁，2022年，8月28日第四頁，共二十五頁，2022年，8月28日實驗前的準(zhǔn)備工作濾膜的選擇流動相應(yīng)該：HPLC級過濾：(最大0.45mm,0.2mm最好)脫氣，尤其在低流速時互溶準(zhǔn)備流動相選擇合適的濾膜聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，醋酸纖維濾膜：適用于水基溶劑，不適用于有機溶劑。尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機溶劑和水溶液，不適用于DMF二甲基甲酰胺。注意：1，每張濾膜只能用一次。

2，水相和有機相不要搞混。第五頁，共二十五頁，2022年，8月28日流動相使用時的注意事項？1、流動相應(yīng)選用色譜純試劑、高純水或重蒸水,酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用，過濾時注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；2、水需經(jīng)常更換〈一般不超過2天〉,防止長菌變質(zhì)；避免溶劑瓶直接日照。有條件的單位可向溶劑中加入的疊氮化鈉。3、使用雙泵時,A、B、C、D四相中,若所用流動相中有含鹽,則A、D(進液口位于混合器下方〉放置含鹽流動相,B、C(進液口位于混合器上方〉放置不含鹽流動相A、B、C、D四個儲液器中其中一個為棕色瓶,用于存放水相流動相。第六頁，共二十五頁，2022年，8月28日樣品的準(zhǔn)備：1、采用過濾或離心方法處理樣品,確保樣品中不含固體顆粒；2、用流動相或比流動相弱的溶劑制備樣品溶液,盡量用流動相制備樣品溶液；3、手動進樣時,進樣量盡量小,使用定量管定量時,進樣體積應(yīng)為定量管的3~5倍；第七頁，共二十五頁，2022年，8月28日溶劑截止波長溶劑UV截止波長（nm）乙睛190水190環(huán)己烷195己烷200甲醇210乙醇210乙醚220二氯甲烷220氯仿240四氯化碳265四氫呋喃280（220）甲苯285所以，波長應(yīng)至少比所用溶劑的截止波長大20nm以上。在使用紫外檢測器時，所用波長與所用溶劑的截止波長接近（或低于截止波長）時，容易產(chǎn)生噪音干擾，從而影響檢測結(jié)果。第八頁，共二十五頁，2022年，8月28日開機（關(guān)）程序1、打開SealWash清洗液開關(guān)，調(diào)節(jié)流速為2-3滴/min。2、打開計算機，進入Window操作系統(tǒng)，并運行CAGBootpsrever程序。3、打開1100LC各模塊的電源，等待儀器自檢完畢，1-2min。4、雙擊桌面上“Instrument1Online”圖標(biāo)，進入1100化學(xué)工作站。開機操作：第九頁，共二十五頁，2022年，8月28日進入Windows系統(tǒng)后BootpServer自動運行，電擊將BootpServer窗口最大化，開啟儀器電源后上面會出現(xiàn)七行通訊信息記錄，表明工作站通訊成功，可以進入Agilent化學(xué)工作站。注意：不能關(guān)閉BootpServer窗口，只能最小化，否則將影響工作站通訊。第十頁，共二十五頁，2022年，8月28日熟悉化學(xué)工作站狀態(tài)工具條快捷工具條自動進樣控制在線信號顯示儀器參數(shù)顯示區(qū)儀器控制區(qū)第十一頁，共二十五頁，2022年，8月28日通過View切換不同的任務(wù)界面1，方法與運行控制-信號采集；2，數(shù)據(jù)處理；3，報告設(shè)計；4，OQ/PV認證；5，診斷功能；第十二頁，共二十五頁，2022年，8月28日輸入流動相的量對著瓶子擊左鍵，然后左鍵單擊SolventbottlesFilling，顯示右面對話框在TotalVolume下輸入溶劑瓶容量，一般為1.00Liter，ActualVolume下輸入溶劑實際加入的量，比如0.5Liter選中下面兩個選項后，在溶劑低于0.1Liter時停止樣品分析，溶劑用完后泵自動關(guān)閉。第十三頁，共二十五頁，2022年，8月28日在工作站上開啟儀器每個模塊右下方都有開關(guān)鍵，點擊后出現(xiàn)開泵、開燈等提示，選擇“Yes”即將泵、燈等打開。點擊“on”將打開所有模塊，點擊“off”將關(guān)閉所有模塊。第十四頁，共二十五頁，2022年，8月28日改變儀器運行參數(shù)對著儀器模塊點擊左鍵然后點擊SetupPump…,顯示右面的對話框,在此對話框中可以設(shè)置泵的參數(shù)。柱箱、檢測器、自動進樣器等參數(shù)改變操作與此相同第十五頁，共二十五頁，2022年，8月28日調(diào)用/儲存方法方法信息編輯完整方法調(diào)方法存方法/覆蓋保存另存方法右圖為方法存/取對話框，方法文件后綴名為.m第十六頁，共二十五頁，2022年，8月28日其它功能菜單文件處理運行控制儀器控制序列放棄任務(wù)在線幫助工作站任務(wù)切換快捷鍵方法存取快捷鍵序列存取快捷鍵運行方法運行序列第十七頁，共二十五頁，2022年，8月28日第十八頁，共二十五頁，2022年，8月28日關(guān)機操作：1，如果使用了緩沖溶液流動相應(yīng)先水：甲醇=90：10沖洗系統(tǒng)30min。2，用純有機相沖洗系統(tǒng)30min。反相色譜用甲醇沖洗。正相色譜用相應(yīng)的溶劑沖洗3，在工作站上關(guān)閉各個模塊。4，退出工作站，關(guān)閉計算機。5，關(guān)閉1100LC各個模塊的電源。6，關(guān)閉SealWash清洗液開關(guān)。第十九頁，共二十五頁，2022年，8月28日儀器的維護和保養(yǎng)Agilent1100LC泵如何維護？Agilent1100LC泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無脈動、流量準(zhǔn)確的流動相，及時合理的維護非常重要。A：流動相使用前請必須過濾脫氣、。B：使用緩沖鹽時，要加在線Seal-wash選項。C：關(guān)機前，用90%的水沖洗系統(tǒng)30分鐘，然后用有機溶劑沖洗系統(tǒng)30分鐘（如甲醇），然后關(guān)泵，（適于反相色譜柱）。[正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗]D：及時更換PurgeValve內(nèi)的過濾芯。（當(dāng)打開PurgeValve時，壓力高于10bar，表明過濾芯已堵）。E：使用合適的密封圈。第二十頁，共二十五頁，2022年，8月28日色譜柱：1、使用前仔細閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動相類型等；2、使用符合要求的流動相；3、使用保護柱；4、如所用流動相為含鹽流動相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水(如5%甲醇水溶液〉，再用甲醇沖洗；5、色譜柱在不使用時,應(yīng)用甲醇沖洗,取下后緊密封閉兩端保存；6、不要高壓沖洗柱子；7、不要在高溫下長時間使用硅膠鍵合相色譜柱；使用過程中注意輕拿輕放。第二十一頁，共二十五頁，2022年，8月28日使用梯度比例閥時要注意那些事項？當(dāng)鹽溶液與有機溶劑溶液混合時，鹽溶液能與有機溶劑溶液完全混溶，而不會出現(xiàn)沉淀。但是在比例閥的混合點，重力作用使鹽顆粒沉淀下來，通常，閥A接水相/鹽溶液，D接有機溶劑，此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中，并被溶解。若顛倒過來，鹽可能落在有機溶劑中，出現(xiàn)問題。強烈建議：當(dāng)使用緩沖鹽溶液和有機溶劑時，推薦將緩沖鹽通道接在A通道上，有機溶劑通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水沖洗所有的通道，以除去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。第二十二頁，共二十五頁，2022年，8月28日更換色譜柱時要注意什么事項?

在使用HPLC時,應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體流動相中的擴散系數(shù)比在氣體中小4~5個數(shù)量級，液體流動相的流速也比氣相慢1-2個數(shù)量級。因此，樣品進入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進樣器、柱接頭、連接管、檢測器）中，樣品分子的擴散和滯留，都會引起色譜峰的展寬，而使柱效降低。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果，儀器的流動相管路連接非常重要,一般Agilent1100LC在第一次安裝時,均有受過專業(yè)培訓(xùn)的安裝工程師負責(zé)安裝,各種接頭會處理的非常完美。我們只需在更換色譜柱時注意接頭處理就可以了，一般柱子入口接頭為不銹鋼卡套接頭，柱子出口為不銹鋼卡套接頭或PEEK管線手擰接頭，當(dāng)完成第一次安裝后，不銹鋼卡套已固定死，當(dāng)接不同的柱子時，要注意柱子接頭處的形狀和長度，否則會產(chǎn)生一個非常大的死體積。第二十三頁，共二十五頁，2022年，8月28日手動進樣閥需做那些維護，使用時要注意什么？對于手動進樣器，當(dāng)使用緩沖溶液后，或者進濃度差異比較大的樣品時要用專用工具而不是用帶針頭的注射器沖洗進樣口，同時搬動進樣閥數(shù)次，每次數(shù)毫升。注意事項：A：安裝時六通閥的5，6出口要與注射器在同一水平線上，以防止虹吸現(xiàn)象的發(fā)生，導(dǎo)致進樣量的重復(fù)性變異。B