實(shí)驗(yàn)三、口服撲熱息痛生物利用度和藥代動力學(xué)參數(shù)測定

實(shí)驗(yàn)三口服撲熱息痛生物利用度

和藥代動力學(xué)參數(shù)的測定生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.掌握口服給藥后測定制劑生物利用度的原理和計(jì)算藥物動力學(xué)參數(shù)的方法；2.熟悉撲熱息痛血液樣品的處理和檢測；3.熟悉家兔口服給藥。生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件二、基本原理1.血管外給藥藥物動力學(xué)血管外給藥途徑包括口服、肌肉注射、皮下注射、透皮給藥、粘膜給藥等，相比于血管內(nèi)給藥，血管外給藥后，藥物有一個吸收過程。因此血管外給藥后，藥物的吸收和消除常用一級過程描述，即藥物以一級速度過程吸收進(jìn)入體內(nèi)，然后以一級速度過程從體內(nèi)消除，為一級藥物動力學(xué)吸收模型。2.撲熱息痛

為乙酰苯胺類解熱鎮(zhèn)痛藥。通過抑制環(huán)氧化酶，選擇性抑制下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞前列腺素的合成，導(dǎo)致外周血管擴(kuò)張、出汗而達(dá)到解熱的作用，其解熱作用強(qiáng)度與阿司匹林相似；通過抑制前列腺素等的合成和釋放，提高痛閾而起到鎮(zhèn)痛作用，屬于外周性鎮(zhèn)痛藥，作用較阿司匹林弱，一般口服給藥有效。撲熱息痛口服易吸收，血藥濃度0.5-1.0

h達(dá)峰值，吸收后在體內(nèi)分布均勻，約有25%與血漿蛋白結(jié)合，大劑量時與血漿蛋白結(jié)合可達(dá)43%；因此本實(shí)驗(yàn)采用血漿作為測定樣品（加肝素鈉抗凝）。生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件血管外給藥后藥物的吸收以及消除過程：X0X0為給藥劑量；F為吸收率；Xa為吸收部位藥量；Ka為一級吸收速率常數(shù)；X為體內(nèi)藥量；K為一級消除速率常數(shù)。藥學(xué)代謝動力學(xué)公式：tmax=2.303/(Ka-K)lg(Ka/K)

Cmax=FX0/V*e-ktmax應(yīng)用拋物線法擬合計(jì)算藥代動力學(xué)參數(shù)（tmax、Cmax、K、Ka等），殘數(shù)法計(jì)算ka、ka、V、t1/2、AUC。取近峰值三個血藥濃度Ｃ－時間ｔ點(diǎn)，代入拋物線方程：Y=aX＋ｂｘ＋Ｃ生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件FXaKaXK拋物線擬合tmax代入方程求Cmax２＝－ｂ／２ａ生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件家兔口服給藥操作示意圖開口器生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件所用材料日本大耳白或新西蘭兔兔子固定器灌胃器具1.5

ml

EP管其它:肝素鈉，漩渦振蕩器，離心機(jī)，紫外檢測儀，10

ml離心管,三氯醋酸等.撲熱息痛片劑生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件三、實(shí)驗(yàn)操作1.撲熱息痛血藥標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：①標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：精密吸取400

ug/ml的濃儲備液1.25,2.5,3.75,5.0,6.25

ml于100

ml容量瓶中，用蒸餾水定容得50,100,150,200,250

ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。②空白血漿制備：將家兔耳緣靜脈處拔毛，將耳緣靜脈橫向切開，采血9ml，裝入1%肝素潤洗過離心管，離心（2500r/min，15min）得上清空白血漿。③標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：取1.5

mlEP管，分別加入上述配制標(biāo)準(zhǔn)液0.5ml，加入空白血漿0.5ml，再加入0.5ml三氯醋酸，靜止5

min，10000

rpm離心5

min，取上清液0.5

ml，加入3.5ml蒸餾水，渦旋1min，離心（4000rpm,10min)，取上清液在245

nm處測吸光度A（以空白血漿相同處理結(jié)果為對照），繪制濃度c-吸光度?A標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.口服給藥途徑血藥濃度的測定①取體重2.5~3.0kg健康雄性家兔1只，禁食12

h，口服灌胃給藥0.5g（1片）。分別在給藥前（0時間）和給藥后20、40、60、90、120、150、180

min用銳利刀片切割耳緣靜脈，用肝素鈉潤洗好的EP管取血約1.5ml。②分離血漿：將取血后的EP管馬上離心(10000r/min，15s)，取上清液血漿約0.5ml至一新的1.5mlEP管中。③沉淀蛋白：往血漿中加入0.5

ml三氯醋酸，蝸旋震蕩后靜止5

min，10000

rpm離心5

min，取上清液0.5

ml，加入3.5ml蒸餾水，渦旋1min，離心（4000r/min,10min)；取上清液在245

nm處測吸光度A（以空白血漿相同方法處理為對照），代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度c。3.假設(shè)F=0.9，撲熱息痛藥物含量：90%，單室模型給藥，求計(jì)算藥動學(xué)相關(guān)參數(shù)：tmax、Cmax、K、Ka、t1/2、V、AUC。4.本實(shí)驗(yàn)3人一組：每組進(jìn)行家兔口服給藥及血藥濃度藥物動力學(xué)數(shù)據(jù)的計(jì)算。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件T(min)20406090120150180△AC(μg/ml)二、撲熱息痛血藥濃度-時間表一、撲熱息痛血藥濃度與△A的標(biāo)準(zhǔn)曲線C=28.228*△A-6.6085C單位：ug/ml,r=0.99882三、藥物動力學(xué)參數(shù)的計(jì)算結(jié)果生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件作時間t-濃度C-lgC表，畫lgC

–

t圖，求算tmax、Cmax、K、Ka、t1/2、V、AUC。五、討論與思考1.

做好本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵是什么？操作中注意哪些

生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件T(min)20406090120150180△A0.02640.03230.04590.07840.07270.04740.0396C(μg/ml)二、撲熱息痛血藥濃度-時間表一、撲熱息痛血藥濃度與△A的標(biāo)準(zhǔn)曲線C=28.228*△A-6.6085C單位：ug/ml,r=0.99882生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件六、參考結(jié)果：序號時間（min）不同波長下吸光度△A濃度（mg/ml）245nm1200.2740.10.18412400.1680.070.12893600.1390.0640.11784900.1550.0620.114151200.2630.0560.103161500.1480.0560.103171800.2740.10.1841C=28.228*△A-6.6085C單位：ug/ml,r=0.9988二、撲熱息痛血藥濃度-時間表一、撲熱息痛血藥濃度與△A的標(biāo)準(zhǔn)曲線生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件T(min)20406090120150180C(mg/ml)1.841.291.1781.1411.0311.0311.841lgC0.2650.1100.0710.0570.01330.0130.265二、撲熱息痛口服灌胃后時間t

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C

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lgC表生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)實(shí)驗(yàn)課件七、注意事項(xiàng)：（1）為得到血漿，需將盛放血液的EP管加低濃度肝素鈉（肝素鈉：蒸餾水=1：9）1滴潤洗，防止血液凝固；（2）本實(shí)驗(yàn)家兔給藥前要先取空白血漿，血樣處理方法與含藥血漿相同；（3）撲熱息痛藥物用灌胃前用5ml蒸餾水配成混懸液，灌胃后再用5ml蒸餾水沖洗燒杯和管路；（4）灌胃操作小心，防止家兔將灌胃管咬斷；灌胃前先通水試一下灌胃管是否通暢；給藥時要確定導(dǎo)管進(jìn)入兔子食道，可將導(dǎo)管插入口腔2/3后用吹氣實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，看水杯中是否有氣泡冒出，防止給藥入氣管從而導(dǎo)致動物死亡；（5）所得濃度數(shù)據(jù)需*16，才是家兔真正的血中藥物濃度；數(shù)據(jù)計(jì)算和計(jì)算的過程均需