標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 35909-2018 豬肺炎支原體PCR檢測(cè)方法》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn),規(guī)定了使用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction, PCR)技術(shù)對(duì)豬肺炎支原體進(jìn)行檢測(cè)的具體步驟與要求。該標(biāo)準(zhǔn)適用于疑似感染豬肺炎支原體的豬只樣本,包括但不限于肺組織、鼻拭子等生物材料的病原學(xué)診斷。
根據(jù)文件內(nèi)容,首先明確了實(shí)驗(yàn)所需的基本條件和設(shè)備,比如核酸提取試劑盒、PCR擴(kuò)增儀以及電泳系統(tǒng)等,并對(duì)這些儀器設(shè)備提出了具體的技術(shù)參數(shù)要求。對(duì)于樣本采集,標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)描述了不同類型的樣本應(yīng)該如何正確地收集與保存,以確保后續(xù)分析過程中的準(zhǔn)確性與可靠性。
在核酸提取環(huán)節(jié),標(biāo)準(zhǔn)推薦了幾種常用的DNA提取方法,并給出了每一步操作的具體指導(dǎo),如裂解細(xì)胞、去除蛋白質(zhì)污染、沉淀DNA等步驟的操作細(xì)節(jié)。此外,還特別強(qiáng)調(diào)了如何避免交叉污染,保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)有效性。
PCR擴(kuò)增部分,則是整個(gè)檢測(cè)流程的核心所在。這里不僅列出了引物序列的設(shè)計(jì)原則及其選擇依據(jù),還提供了詳細(xì)的反應(yīng)體系配置表,包括各種組分的比例關(guān)系及最終體積大小。同時(shí),對(duì)于退火溫度、循環(huán)次數(shù)等關(guān)鍵參數(shù)也給予了明確指示,以便于實(shí)驗(yàn)室人員能夠按照統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行實(shí)驗(yàn)。
最后,在產(chǎn)物分析階段,標(biāo)準(zhǔn)介紹了如何通過瓊脂糖凝膠電泳來觀察并判斷目標(biāo)片段是否成功擴(kuò)增出來。如果出現(xiàn)預(yù)期大小的條帶,則可以認(rèn)為樣本中含有豬肺炎支原體;反之,則為陰性結(jié)果。此外,為了進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度和特異性,還可以采用熒光定量PCR或巢式PCR等更為先進(jìn)的技術(shù)手段。
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2018-02-06 頒布
- 2018-09-01 實(shí)施
文檔簡介
ICS11220
B41.
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
GB/T35909—2018
豬肺炎支原體PCR檢測(cè)方法
DetectionofmycoplasmahyopneumoniaeusingPCRmethod
2018-02-06發(fā)布2018-09-01實(shí)施
中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布
中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)
中華人民共和國
國家標(biāo)準(zhǔn)
豬肺炎支原體PCR檢測(cè)方法
GB/T35909—2018
*
中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行
北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號(hào)
2(100029)
北京市西城區(qū)三里河北街號(hào)
16(100045)
網(wǎng)址
:
服務(wù)熱線
:400-168-0010
年月第一版
20182
*
書號(hào)
:155066·1-59535
版權(quán)專有侵權(quán)必究
GB/T35909—2018
前言
本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出
。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口
(SAC/TC181)。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
:。
本標(biāo)準(zhǔn)起草人邵國青馮志新熊祺琰劉茂軍張磊王海燕武昱孜韋艷娜劉蓓蓓甘源華利忠
:、、、、、、、、、、、
王佳王麗
、。
Ⅰ
GB/T35909—2018
豬肺炎支原體PCR檢測(cè)方法
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬肺炎支原體檢測(cè)的操作方法
PCR。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于實(shí)驗(yàn)室對(duì)豬臨床樣品豬鼻拭子肺組織和支氣管肺泡灌洗液細(xì)菌培養(yǎng)物和動(dòng)物產(chǎn)
(、)、
品中豬肺炎支原體核酸的快速檢測(cè)
。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文
。,
件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件
。,()。
分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
GB/T6682
實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求
GB19489
實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范動(dòng)物檢疫
GB/T27401
病死及病害動(dòng)物無害化處理技術(shù)規(guī)范農(nóng)醫(yī)發(fā)號(hào)
[2017]25
獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全管理規(guī)范中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第號(hào)
(302)
3術(shù)語和定義及縮略語
31術(shù)語和定義
.
下列術(shù)語和定義適用于本文件
。
311
..
豬肺炎支原體MycoplasmahyopneumoniaeMHP
;
支原體科支原體屬M(fèi)ycoplasma成員是豬支原體肺炎的主要病原體
(),(MPS)。
注豬支原體肺炎又稱豬氣喘病是一種經(jīng)呼吸道感染的慢性病對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重危害
:,,。
32縮略語
.
下列縮略語適用于本文件
。
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
PCR(polymerasechainreaction)
磷酸鹽緩沖液
PBS(phosphate-bufferedsalinebuffer)
電泳緩沖液
TAETAE(tris-acetate-ethylenediaminetetraaceticacidbuffer)
電泳緩沖液
TBETBE(tris-borate-ethylenediaminetetraaceticacidbuffer)
Taq酶Taq聚合酶Taq
DNA(DNApolymerase)
脫氧核糖核苷三磷酸
dNTPs(deoxyribonucleosidetriphosphates)
脫氧核糖核酸
DNA(deoxyribonucleicacid)
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