GB/T 35526-2017化學(xué)品(抗)雄性性征短期篩選試驗(yàn)大鼠Hershberger生物檢測(cè)法

ICS1330011100

;

A80..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T35526—2017

化學(xué)品抗雄性性征短期篩選試驗(yàn)

()

大鼠Hershberger生物檢測(cè)法

Chemicals—Ashort-termscreeninassaforantiandroenicroerties—

gy()gpp

Hershbergerbioassayinrats

2017-12-29發(fā)布2018-07-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

中華人民共和國(guó)

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

化學(xué)品抗雄性性征短期篩選試驗(yàn)

()

大鼠Hershberger生物檢測(cè)法

GB/T35526—2017

*

中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽(yáng)區(qū)和平里西街甲號(hào)

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號(hào)

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

:400-168-0010

年月第一版

20181

*

書(shū)號(hào)

:155066·1-58303

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T35526—2017

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)與經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織化學(xué)品測(cè)試方法大鼠生物檢測(cè)

(OECD)NO.441《Hershberger:

抗雄性性征短期篩選試驗(yàn)

()》[Hershbergerbioassayinrats:Ashort-termscreeningassayfor(anti)

技術(shù)內(nèi)容一致

androgenicpropertiest](2009)。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)危險(xiǎn)化學(xué)品管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC251)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國(guó)上海出入境檢驗(yàn)檢疫局中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院復(fù)旦大學(xué)

:、、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人姚麗芳陳俊水蔣偉陳相陳會(huì)明張靜李蔚繆文彬趙頤晴鄭華鄔春華

:、、、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T35526—2017

引言

年開(kāi)始修訂并發(fā)展檢測(cè)和篩選內(nèi)分泌干擾物的試驗(yàn)方法上述活動(dòng)之一就是發(fā)展了

1998,OECD。

大鼠生物篩選試驗(yàn)方法通過(guò)在醫(yī)藥工業(yè)使用幾十年后年該方法首次被官方專

Hershberger。,1962,

業(yè)委員會(huì)作為一種雄性激素化學(xué)品的標(biāo)準(zhǔn)篩選工具年年生物篩選試驗(yàn)進(jìn)

。2001—2007,Hershberger

行了大量的驗(yàn)證項(xiàng)目包括方法背景資料研究具體試驗(yàn)方法匯總解剖技術(shù)的發(fā)展以及實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部和

:、、

實(shí)驗(yàn)室之間試驗(yàn)方法可靠性和重現(xiàn)性的驗(yàn)證研究上述驗(yàn)證研究使用雄性激素參照物丙酸睪丸酮

。()、

兩種合成的雄性激素醋酸去甲雄三烯醇酮和甲基睪丸素抗雄性激素藥物氟他胺天然雄性激素合

()、()、

成抑制劑非那雄胺幾種弱抗雄性激素農(nóng)藥利谷隆乙烯菌核利速克靈和和α還原酶

()、(、、p,p'-DDE)5-

抑制劑非那雄胺和兩種陰性對(duì)照物二硝基苯酚和壬基苯酚本標(biāo)準(zhǔn)是長(zhǎng)期生物鑒定試驗(yàn)和驗(yàn)證

()()。

試驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

。

生物篩選試驗(yàn)是一種使用雄性生殖系統(tǒng)中有關(guān)組織的短期在體篩選方法試驗(yàn)始于

Hershberger。

世紀(jì)年代年代的時(shí)候增加了雄性生殖系統(tǒng)中的雄性激素反應(yīng)肌世紀(jì)年代使用標(biāo)準(zhǔn)

2030,40。2060,

方法對(duì)多種可能的雄性激素進(jìn)行了評(píng)估本標(biāo)準(zhǔn)是基于檢測(cè)去勢(shì)后的雄性大鼠體內(nèi)五種雄性激素

700。

依賴組織質(zhì)量改變的一種篩選方法本方法用于評(píng)估化學(xué)品類似雄性激素激動(dòng)劑雄性激素拮抗劑或

。、

者還原酶抑制劑的生物活性五種雄性激素依賴組織為腹側(cè)前列腺精囊包括液體和

5α-。(VP)、(SV)(

凝固腺提肛肌球海綿體肌復(fù)合體肌成對(duì)的尿道球腺和龜頭在去勢(shì)的雄性

)、-(LABC)、(COW)(GP)。

大鼠中受雄性激素的影響上述五種組織的質(zhì)量會(huì)發(fā)生相應(yīng)增加同一受試動(dòng)物使用雄性激素參照

,,。,

物后五種組織的質(zhì)量均發(fā)生增長(zhǎng)再使用雄性激素拮抗劑能使五種組織的質(zhì)量均發(fā)生下降三個(gè)階段

,。

的驗(yàn)證試驗(yàn)證實(shí)生物篩選試驗(yàn)的首選動(dòng)物模型是去勢(shì)的青春期前的雄性大鼠

,Hershberger。

生物篩選試驗(yàn)是一種雄性激素受體激動(dòng)劑雄性激素拮抗劑和α還原酶抑制劑的篩

Hershberger、5-

選方法作為提供單一的內(nèi)分泌機(jī)理數(shù)據(jù)的體內(nèi)篩選試驗(yàn)方法被包括在內(nèi)分泌干擾化學(xué)品的

。OECD

測(cè)試和評(píng)估框架第級(jí)中本試驗(yàn)包含在內(nèi)分泌干擾物體內(nèi)和體外系列試驗(yàn)中用于判斷受試物是否

3。,

對(duì)內(nèi)分泌系統(tǒng)產(chǎn)生潛在干擾作用從而導(dǎo)致人類健康和環(huán)境的危害

,。

考慮到動(dòng)物福利未經(jīng)去勢(shì)的剛斷奶的雄性大鼠也可以作為生物篩選的替代動(dòng)物模

,Hershberger

型這種方法也通過(guò)驗(yàn)證但是微量的抗雄性激素驗(yàn)證研究中未經(jīng)去勢(shì)的剛斷奶的雄性大鼠不能夠產(chǎn)

。,,

生一致的響應(yīng)因此本標(biāo)準(zhǔn)中并不包括這項(xiàng)試驗(yàn)的內(nèi)容

。,。

作為雄性激素受體的配體雄性激素受體激動(dòng)劑和拮抗劑可分別激活或抑制受體控制的基因轉(zhuǎn)錄

,。

此外在一些雄性激素的靶組織中某些化學(xué)品會(huì)抑制睪酮轉(zhuǎn)化為更有活性的二氫睪酮α還原酶抑制

,,(5-

劑這些物質(zhì)有可能對(duì)生殖和發(fā)育產(chǎn)生不利影響因此需要迅速評(píng)估并評(píng)價(jià)化學(xué)品是否是雄性激素

)。。,

受體激動(dòng)劑拮抗劑或α還原酶抑制劑雖然通過(guò)受體結(jié)合體外報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄激活效應(yīng)檢測(cè)到的

、5-。、

雄性激素配體對(duì)受體的親和力與其產(chǎn)生危害有一定關(guān)系但并不是潛在危害的決定性因素其他因素

,。

還包括進(jìn)入體內(nèi)之后的代謝活化滅活靶器官中的分布情況和體內(nèi)的清除情況這就需要在篩選化學(xué)

、、。

品的時(shí)候在相關(guān)的條件和暴露下進(jìn)行如果化學(xué)品的吸收分布代謝清除已知?jiǎng)t體內(nèi)

?！?ADME),

的評(píng)估就相對(duì)不重要一些在雄性激素刺激下去勢(shì)的青春期前的雄性大鼠體內(nèi)雄性激素依賴組織生

。,

長(zhǎng)迅速明顯嚙齒類動(dòng)物特別是大鼠廣泛用于毒性危害研究因此本試驗(yàn)中使用去勢(shì)的青春期

、。,,。,,

前的雄性大鼠和五種靶組織篩選雄性激素受體激動(dòng)劑拮抗劑和α還原酶抑制劑

、5-。

本標(biāo)準(zhǔn)的可信性和重現(xiàn)性是通過(guò)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部和實(shí)驗(yàn)室間的比對(duì)驗(yàn)證了的所有的雄性激

OECD。

素和雄性激素拮抗劑的操作步驟均在本標(biāo)準(zhǔn)中體現(xiàn)

。

雖然在檢測(cè)抗雄性激素的驗(yàn)證試驗(yàn)中不同實(shí)驗(yàn)室使用的丙酸睪丸酮?jiǎng)┝坑兴鶇^(qū)別分別為

,,

Ⅱ

GB/T35526—2017

或皮下注射但強(qiáng)抗雄性激素物質(zhì)和弱抗雄性激素物質(zhì)的檢測(cè)結(jié)

0.2mg/(kg·d)0.4mg/(kg·d)(),

果表示不同劑量的丙酸睪丸酮試驗(yàn)結(jié)果沒(méi)有差別但是應(yīng)明確丙酸睪丸酮的劑量不應(yīng)該太高以免影

。,,

響弱雄激素受體拮抗劑的作用也不能太低否則即使沒(méi)有雄性激素拮抗劑的情況下雄性激素依賴組

,,,,

織也不發(fā)生質(zhì)量變化

。

單個(gè)雄性激素依賴組織的生長(zhǎng)反應(yīng)并不完全是由雄性激素引起的即雄性激素激動(dòng)劑之外的化合

。

物可能改變特定組織的質(zhì)量然而幾個(gè)組織同時(shí)發(fā)生反應(yīng)則證明雄性激素的特定反應(yīng)機(jī)理例如

。,,。:

高劑量的雌激素可以增加精囊的質(zhì)量但不會(huì)增加其他雄性激素依賴組織的質(zhì)量抗雄性激素化學(xué)品

,。

既可以是雄性激素受體拮抗劑也可以是α還原酶抑制劑不同組織轉(zhuǎn)化成二氫睪酮不同因此α

,5-。,5-

還原酶抑制劑對(duì)不同組織具有不同的效應(yīng)與雄性激素拮抗劑氟他胺相比抑制α還原酶的抗雄性

。,5-

激素非那雄胺對(duì)腹側(cè)前列腺作用更大這種差異可用于區(qū)別是由于雄性激素受體介導(dǎo)的反應(yīng)還是α

。5-

還原酶的介導(dǎo)的反應(yīng)此外在生物進(jìn)化上雄性激素受體與類固醇激素和其他激素有關(guān)如加強(qiáng)類固

。,,,

醇的代謝降低血清睪酮含量也可能抑制雄性激素依賴組織的生長(zhǎng)因此生物篩選試驗(yàn)

、,,,Hershberger

的任何陽(yáng)性結(jié)果均應(yīng)結(jié)合雄性激素受體和雌性激素受體結(jié)合試驗(yàn)轉(zhuǎn)錄活化分析等體外試驗(yàn)或者檢測(cè)

、

類似雄性激素靶器官的體內(nèi)試驗(yàn)如雄性動(dòng)物發(fā)育試驗(yàn)天成年雄性動(dòng)物試驗(yàn)天或天重復(fù)劑

,、15、2890

量試驗(yàn)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)

。

經(jīng)驗(yàn)表明雄性激素比抗雄性激素更加罕見(jiàn)因此生物篩選試驗(yàn)更廣泛應(yīng)用于抗雄

,。,Hershberger

性激素的篩選然而雄性激素檢測(cè)方法可用于甾體類或類固醇類化學(xué)品或者框架文件第級(jí)或第

。,12

級(jí)試驗(yàn)結(jié)果顯示具有疑似雄性激素作用的化學(xué)品的檢測(cè)類似的與抗雄性激素相關(guān)的危害可以在

。,()

第級(jí)試驗(yàn)中觀察得到用于評(píng)估化學(xué)物的危害是否與內(nèi)分泌有關(guān)

5,。

所有的動(dòng)物相關(guān)的程序應(yīng)該符合地方動(dòng)物保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)本標(biāo)準(zhǔn)中描述的動(dòng)物保護(hù)和使用標(biāo)準(zhǔn)都是最

,

低標(biāo)準(zhǔn)可被地方性法規(guī)代替

,。

Ⅲ

GB/T35526—2017

化學(xué)品抗雄性性征短期篩選試驗(yàn)

()

大鼠Hershberger生物檢測(cè)法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化學(xué)品抗雄性性征短期篩選試驗(yàn)大鼠生物檢測(cè)法的術(shù)語(yǔ)和定義試

()Hershberger、

驗(yàn)原理試驗(yàn)方法與步驟數(shù)據(jù)與報(bào)告

、、。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于評(píng)估化學(xué)品類似雄性激素激動(dòng)劑雄性激素拮抗劑或還原酶抑制劑的生物活性

、5α-。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施

GB14925

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件

。

31

.

雄性激素效應(yīng)androgenicity

化學(xué)品對(duì)雄性激素依賴組織的促進(jìn)作用

。

32

.

抗雄性激素效應(yīng)antiandrogenicity

化學(xué)品抑制哺乳動(dòng)物體內(nèi)丙酸睪丸酮號(hào)活性的作用

(TP,CAS57-82-5)。

33

.

劑量dose

給予受試物的量用每天單位體重動(dòng)物給予受試物的質(zhì)量來(lái)表示即