GB/T 34776-2017T4 DNA連接酶酶活及雜質(zhì)檢測(cè)方法

ICS07080

A40.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T34776—2017

T4DNA連接酶酶活及雜質(zhì)檢測(cè)方法

T4DNAligase—Detectionmethodsofactivityandimpuritiesofenzyme

2017-11-01發(fā)布2018-05-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T34776—2017

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)工具酶工作組歸口

(SAC/SWG11)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)測(cè)試技術(shù)研究院深圳華因康基因科技有限公司福建華燦制藥有限公司

:、、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人周李華李懷平盛司潼孫登峰譚輝彪黃發(fā)燦金虹馬麗俠葉德萍李花

:、、、、、、、、、、

王智沈興中譚和平

、、。

Ⅰ

GB/T34776—2017

T4DNA連接酶酶活及雜質(zhì)檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了連接酶的活力雜質(zhì)的檢測(cè)方法

T4DNA、。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于作為分子生物學(xué)研究用的連接酶

T4DNA。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

電泳裝置

YY/T0087

醫(yī)用離心機(jī)

YY/T0657

移液器檢定規(guī)程

JJG646

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件

。

31

.

DNA連接酶DNAligase

一種封閉鏈上的缺口酶借助或水解提供的能量催化相鄰的核苷酸分子間羥

DNA,ATPNAD3'-

基和磷酸基形成磷酸二酯鍵

5'-。

注連接酶催化底物可以是或依據(jù)酶的類型不同反應(yīng)中產(chǎn)生高能中間產(chǎn)物的輔助因子可以是

:DNADNARNA。,

或+

ATPNAD。

32

.

T4DNA連接酶T4DNAligase

一種噬菌體基因的編碼產(chǎn)物以作為輔助因子催化雙鏈或的磷酸末

T430,ATP,DNARNA5'-

端和羥基末端形成磷酸二酯鍵

3'-。

注帶有分子質(zhì)量約為來(lái)源于轉(zhuǎn)化有連接酶表達(dá)載體的E.Coli菌株主要作用是催化

:His-Tag,70ku,T4DNA。

末端之間的連接修復(fù)雙鏈核酸中的單鏈切刻

DNA,。

33

.

酶活力單位unitactivity

在連接酶反應(yīng)緩沖液中反應(yīng)條件下能使的經(jīng)消

20μL1×T4DNA,16℃,30min50%HindⅢ

化的片段端濃度為連接所需的酶量即為活力單位

λDNA[5'0.12μmol/L(300μg/mL)]1。

4縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件

。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR(polymerasechainreaction)。