標準解讀

《GB/T 34738-2017 蜜蜂囊狀幼蟲病熒光PCR檢測方法》是一項國家標準，專門針對蜜蜂中囊狀幼蟲病的檢測制定了詳細的熒光定量PCR技術規(guī)范。該標準適用于對蜜蜂樣本進行囊狀幼蟲病毒（Chronic bee paralysis virus, CBPV）感染狀態(tài)的快速準確鑒定。

標準首先定義了適用范圍、術語和定義等基本內(nèi)容，為后續(xù)操作提供理論基礎。其中明確了“囊狀幼蟲病”是由特定病毒引起的一種蜜蜂疾病，主要影響幼齡階段的蜜蜂，并通過直接接觸傳播給其他個體。

接著，《GB/T 34738-2017》詳細描述了實驗所需材料與試劑的選擇要求，包括但不限于核酸提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄酶、Taq DNA聚合酶以及特異性引物探針設計原則等關鍵組分。這些成分對于確保實驗結(jié)果準確性至關重要。

在樣品處理方面，本標準提供了從采集到保存再到前處理的具體步驟指導，強調(diào)了正確采集方法的重要性及如何避免交叉污染等問題。此外還特別指出了不同類型的樣品（如活體成年蜜蜂、死亡蜜蜂或疑似受感染區(qū)域）應采用相適應的方法來進行處理。

關于PCR反應體系建立，《GB/T 34738-2017》給出了推薦使用的反應條件參數(shù)設置建議，比如退火溫度、延伸時間長度等，同時也允許根據(jù)實驗室具體情況適當調(diào)整以達到最佳擴增效果。同時，在數(shù)據(jù)解釋部分，則是基于Ct值來判斷樣本是否含有目標病毒序列，并設定了陽性對照和陰性對照作為質(zhì)量控制手段之一。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2017-11-01 頒布
  • 2018-05-01 實施
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文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T34738—2017

蜜蜂囊狀幼蟲病熒光PCR檢測方法

Methodofthereal-timePCRforthedetectionofhoneybeessacbrooddisease

2017-11-01發(fā)布2018-05-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T34738—2017

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標準由全國動物衛(wèi)生標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位中華人民共和國吉林出入境檢驗檢疫局吉林大學中華人民共和國福建出入境

:、、

檢驗檢疫局

。

本標準起草人宋戰(zhàn)昀馮新孟日增劉金華魏春艷牟峻王振國鄭騰孟慶峰蔡陽肖成蕊

:、、、、、、、、、、、

王偉利

。

Ⅰ

GB/T34738—2017

蜜蜂囊狀幼蟲病熒光PCR檢測方法

1范圍

本標準規(guī)定了蜜蜂囊狀幼蟲病熒光檢測方法

PCR。

本標準適用于蜜蜂及其幼蟲中囊狀幼蟲病的檢測

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

出入境動物檢疫采樣

GB/T18088

3試劑和材料

除非另有規(guī)定僅使用分析純試劑所有試劑均用無酶污染的容器用焦碳酸二乙酯水處理

,。RNA(

后高壓滅菌分裝

)。

31水三級

.,GB/T6682,。

32蜜蜂囊狀幼蟲病毒

.。

33引物和探針上游引物下游引物

.,F1(10pmol/μL):5’-AAGTTGGAGGCGCGYATTTG-3’,

探針

R1(10pmol/μL):5’-CAAATGTCTTCTTACDAGAAGYAAGGATTG-3’,P1(5pmol/μL):

5’-FAM-CGGAGTGGAAAGAT-TAMRA-3’。

34磷酸鹽緩沖鹽水配制方法見

.,A.1。

35總抽提試劑

.RNA。

36氯仿

.。

37異丙醇

.。

38乙醇

.75%。

注用新開啟的無水乙醇和焦碳酸二乙酯水配制

:。

39焦碳酸二乙酯處理的水

.。

310反轉(zhuǎn)錄酶

.。

311酶抑制劑

.RNA(40U/μL)。

312反轉(zhuǎn)錄酶緩沖液

.5×。

313反應緩沖液含鎂離子

.10×PCR()。

314聚合酶

.DNA(5U/μL)。

315三磷酸脫氧核糖核苷酸每種濃度均為

.(dNPTs

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