二：菌種的管理和保藏2

菌種的保藏和管理2009年10月2/4/20231菌種保藏

微生物實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)菌株可能是最敏感的，因?yàn)樗鼈兊纳锘钚院吞匦砸蕾囉诤线m的試驗(yàn)操作和貯藏條件。2/4/20232實(shí)驗(yàn)室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備菌株是微生物試驗(yàn)結(jié)果一致性的重要保證。2/4/20233菌種保藏是微生物學(xué)檢驗(yàn)工作中的一項(xiàng)常規(guī)技術(shù)，菌種的科學(xué)保藏和管理直接關(guān)系到檢驗(yàn)結(jié)果的正確性

試驗(yàn)菌種應(yīng)是從國家菌種中心獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌種，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后保存.2/4/20234

菌種保藏的中心任務(wù)是廣泛收集各種有用的微生物菌種，選擇最適宜的保藏方法，避免在保藏和傳代過程中死亡、變異、衰退及活力減弱，以保持菌種原有的各種生物學(xué)特性，從而達(dá)到保證研究、檢驗(yàn)、交換和使用要求的目的。2/4/20235菌種保藏機(jī)構(gòu)中國菌種保藏管理委員會（CCCCM）成立于1979年。下設(shè)7個菌種保藏管理中心及有關(guān)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室，共12個單位實(shí)行統(tǒng)一領(lǐng)導(dǎo)，按專業(yè)分工管理。國外的菌種保藏機(jī)構(gòu)2/4/20236常用菌種保藏方法

菌種保藏的原則根據(jù)微生物菌種的生理、生化特性，在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細(xì)胞的代謝強(qiáng)度，使細(xì)胞基本上處于休眠狀態(tài)，生長繁殖受到抑制但由不至于死亡，以減低菌種的變異率。

2/4/20237標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按驗(yàn)證的方法進(jìn)行。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株-從國內(nèi)、外菌種收藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后,既為標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株。常用菌種保藏方法2/4/20238低溫、干燥、缺氧、缺乏營養(yǎng)等環(huán)境條件都可以抑制微生物的代謝和生長繁殖，因此低溫、干燥和真空是菌種保藏的重要手段。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株經(jīng)純度和特性確認(rèn)后保存°

2/4/20239

工作菌株不可代替標(biāo)準(zhǔn)菌株，標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。2/4/202310不同的微生物，應(yīng)根據(jù)其生物特征來選擇最適宜的保藏方法，菌種的保藏方法一般分四個階段：2/4/202311⑴

挑選特征典型的純菌菌落⑵確定保藏的合適菌體形態(tài)⑶選擇最適宜的方法保藏⑷定期對保藏的菌種進(jìn)行檢查2/4/202312二、菌種的傳代和使用工作菌種的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過5代，（從菌種保藏中心獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代）防止過度的傳代造成菌種變異。1代是指將活的培養(yǎng)物接種到新鮮培養(yǎng)基中，任何亞培養(yǎng)的形式均被認(rèn)為是轉(zhuǎn)種或傳代一次。必要時，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn)。

2/4/202313

細(xì)菌的接種、分離和培養(yǎng)接種、分離、培養(yǎng)是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本作技術(shù)，要求嚴(yán)格的無菌操作和在無菌環(huán)境下進(jìn)行。2/4/202314常用培養(yǎng)基種類斜面接種半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基平板培養(yǎng)基2/4/202315接種方法涂布法劃線法穿刺法直接加入法等2/4/202316分離：分段劃線法、連續(xù)劃線法、涂布分離法、傾注分離法等。2/4/202317

培養(yǎng)：接種后的培養(yǎng)基，根據(jù)不同微生物生長條件的要求，置培養(yǎng)基于適宜微生物生長的環(huán)境中，使其生長繁殖的過程。需氣培養(yǎng)法厭氧培養(yǎng)法2/4/202318培養(yǎng)后微生物的生長判斷固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基2/4/202319

菌種的傳代和使用菌液的制備和使用2/4/202320

三、菌種的檢查與復(fù)壯

菌種的衰退菌種經(jīng)過長期人工傳代培養(yǎng)或保藏，由自發(fā)突變的作用而引起某些優(yōu)良特性變?nèi)趸蛳У默F(xiàn)象。

2/4/202321控制菌種的衰退方法

⑴控制傳代次數(shù)⑵創(chuàng)造適宜的培養(yǎng)條件⑶用不同類型的細(xì)胞進(jìn)行傳代⑷采用有效的保藏方法2/4/202322定期檢查

菌種在保藏期間必須定期檢查，發(fā)現(xiàn)變異或衰退，應(yīng)及時給予恢復(fù)。

2/4/202323菌種的復(fù)壯

使衰退的菌種重新恢復(fù)原來的優(yōu)良特性的過程。實(shí)驗(yàn)室主要采用分離純化的方法。2/4/202324

四、菌種的管理

1、使用菌種的單位，應(yīng)具備從事微生物工作的條件和設(shè)備。

菌種應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理，管理人員應(yīng)具有微生物專業(yè)知識和技術(shù)水平，并應(yīng)具有較強(qiáng)的責(zé)任心。

2/4/202325

2、實(shí)驗(yàn)室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度.3、菌種應(yīng)冷藏或冷凍保存，保存菌種的冰箱不得放置食品和易揮發(fā)性藥品，放置菌種的專門冰箱，應(yīng)上鎖管理。

2/4/2023264、應(yīng)由專人按操作規(guī)程和有關(guān)要求定期進(jìn)行傳代，并定期對保存的菌種進(jìn)行檢查，一般每年1～2次，（或定期更換棟干菌種）。

2/4/202327詳細(xì)記錄菌種的來源、接收、傳代、分離、復(fù)壯、使用和鑒定等均應(yīng)做好詳細(xì)記錄。包括菌種傳代或使用時間、名稱、菌號、代數(shù)、傳代或保存形式、分離復(fù)壯方式、使用內(nèi)容、鑒定情況等都應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)的記錄。2/4/202328菌種不得隨意帶出實(shí)驗(yàn)室，外單位索取、購買應(yīng)由登記，并包裝嚴(yán)密。菌種處理應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行，滅菌處理應(yīng)有詳細(xì)記錄。

2