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動(dòng)物繁殖學(xué)學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)實(shí)習(xí)指導(dǎo)導(dǎo)
萊陽農(nóng)學(xué)院院動(dòng)物科科技學(xué)院院
2004年年1月
動(dòng)物繁殖學(xué)學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)實(shí)習(xí)指導(dǎo)導(dǎo)
實(shí)驗(yàn)一
動(dòng)動(dòng)物生殖殖器官的的觀察實(shí)驗(yàn)二
動(dòng)動(dòng)物睪丸丸、卵巢巢及附性性器官的的組織學(xué)學(xué)觀察實(shí)驗(yàn)三
PPMSGG或FSSH的生生物測定定法實(shí)驗(yàn)四
精精液品質(zhì)質(zhì)常規(guī)檢檢查及理理化因素素的影響響實(shí)驗(yàn)五
精精子數(shù)量量計(jì)算和和畸形率率的測定定實(shí)驗(yàn)六
精精子頂體體完整率率的測定定實(shí)驗(yàn)七
人人工授精精器械的的認(rèn)識及及假陰道道的準(zhǔn)備備實(shí)驗(yàn)八
動(dòng)動(dòng)物精液液的冷凍凍操作實(shí)驗(yàn)九
動(dòng)動(dòng)物的發(fā)發(fā)情鑒定定實(shí)驗(yàn)十
母母牛的直直腸檢查查實(shí)驗(yàn)十一
動(dòng)物物的采精精與輸精精實(shí)驗(yàn)十二
動(dòng)物物的胚胎胎觀察與與鑒定實(shí)驗(yàn)十三
牛、羊羊的胚胎胎移植實(shí)驗(yàn)十四
卵母母細(xì)胞體體外培養(yǎng)養(yǎng)與體外外受精
實(shí)驗(yàn)一
動(dòng)物生生殖器官官的觀察察
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)磕康恼J(rèn)識各種動(dòng)動(dòng)物生殖殖器官的的形態(tài)、大大小,及及其特點(diǎn)點(diǎn),為生生殖器官官的直腸腸檢查、陰陰道檢查查、妊娠娠診斷及及人工授授精等操操作奠定定基礎(chǔ)。二、實(shí)驗(yàn)材材料1、各種雄雄性動(dòng)物物生殖器器官標(biāo)本本、模型型及掛圖圖2、各種雌雌性動(dòng)物物活體及及生殖器器官標(biāo)本本、模型型及掛圖圖。3、解剖刀刀、剪刀刀、鑷子子、卷尺尺、搪瓷瓷盤。4、腹腔鏡鏡:主件件(觀察察鏡、變變壓器、光光源、光光纜),附附件(套套管針、探探針、照照相設(shè)備備、監(jiān)視視系統(tǒng)、手手術(shù)器械械、送氣氣設(shè)備、抽抽吸裝置置)。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)內(nèi)容(一)雄性性動(dòng)物生生殖器官官1、觀察各各種動(dòng)物物睪丸和和附睪的的形狀、相相對位置置和大體體構(gòu)造。睪丸均為長長卵圓形形,牛、羊羊、豬的的睪丸相相對較大大,尤其其是羊的的最大。馬馬睪丸的的縱軸方方向與地地面平行行;附睪睪位于睪睪丸的背背外緣,頭頭端在前前、尾端端在后。牛牛、羊睪睪丸的方方向與地地面垂直直;其附附睪位于于后緣,頭頭端在上上,尾端端在下。豬豬睪丸的的方向呈呈前低后后高傾斜斜,位于于股部之之后;附附睪位于于睪丸的的前上緣緣,頭端端在下,尾尾端在上上。2、副性腺腺:比較較各種動(dòng)動(dòng)物副性性腺的大大小、形形狀、位位置及內(nèi)內(nèi)部構(gòu)造造。①精囊腺::成對位位于膀胱胱頸背面面的兩旁旁,輸卵卵管的末末端兩側(cè)側(cè)。馬的精囊腺腺為長圓圓形囊狀狀,牛、羊羊和豬的的精囊腺腺都是由由緊密的的腺體組組織所構(gòu)構(gòu)成,豬豬的特別別發(fā)達(dá)。②前列腺::位于膀膀胱頸尿尿道開始始處精囊囊腺之后后。馬的前列腺腺,由兩兩個(gè)側(cè)葉葉和一個(gè)個(gè)峽所構(gòu)構(gòu)成,形形似蝴蝶蝶。牛和和豬的前前列腺分分為體部部和彌散散部兩部部分,羊羊的前列列腺最不不發(fā)達(dá),只只有彌散散部。③尿道球腺腺:位于于骨盆出出口附近近的尿道道兩旁,各各有一個(gè)個(gè)排出管管開口于于尿道內(nèi)內(nèi)。豬的尿道球球腺最為為發(fā)達(dá),呈呈圓柱狀狀,上面面覆蓋的的尿道肌肌很薄。其其它家畜畜的呈球球狀,上上面覆蓋蓋的尿道道肌較厚厚。在尿尿生殖道道骨盆部部的腹面面中線上上作縱切切口,觀觀察尿道道上壁的的精阜,上上有射精精孔。前前列腺的的開口在在兩側(cè),尿尿道球腺腺的開口口在其后后方。3、陰莖和和龜頭::陰莖由由白膜內(nèi)內(nèi)的兩個(gè)個(gè)陰莖海海綿體和和其腹面面的尿道道海綿體體組成,為為陰莖的的勃起組組織。馬馬的陰莖莖長而粗粗大,龜龜頭窩內(nèi)內(nèi)有尿道道突,牛牛的陰莖莖在陰囊囊之后形形成一“S”狀彎曲曲。羊的的陰莖比比牛的細(xì)細(xì)小,尿尿道突細(xì)細(xì)而長,綿綿羊的較較長,山山羊的較較短。豬豬的陰莖莖“S”狀彎曲曲在陰囊囊之前,龜龜頭呈螺螺旋狀。(二)雌性性動(dòng)物生生殖器官官雌性動(dòng)物可可以觀察察生殖器器官的標(biāo)標(biāo)本、模模型及掛掛圖,也也可以采采用腹腔腔鏡法進(jìn)進(jìn)行活體體觀察。1、生殖器器官的組組成及位位置雌性動(dòng)物的的生物器器官包括括:卵巢巢、輸卵卵管、子子宮、陰陰道、尿尿生殖前前庭、陰陰唇和陰陰蒂。前前四部分分稱為內(nèi)內(nèi)生殖器器官,后后三部分分稱為外外生殖器器官,也也稱外陰陰部。雌性動(dòng)物的的整個(gè)生生殖器官官都位于于骨盆腔腔和骨盆盆腔前方方的腹腔腔內(nèi),上上面為直直腸和小小結(jié)腸,下下面是膀膀胱。2、卵巢①觀察未孕孕動(dòng)物性性周期各各時(shí)期卵卵巢的外外形并測測量其體體積。②作卵巢的的水平切切面,觀觀察其內(nèi)內(nèi)部構(gòu)造造。馬的卵巢::為豆形形,體積積如鴿蛋蛋大,成成熟后卵卵巢的一一邊(自自由邊)內(nèi)內(nèi)陷形成成排卵窩窩,朝向向內(nèi)側(cè)的的輸卵管管傘。發(fā)發(fā)情周期期的不同同時(shí)期馬馬卵巢的的直徑大大小不等等。牛的卵巢::為橢圓圓形,沒沒有排卵卵窩,如如青棗大大,排卵卵以后多多不形成成紅體,黃黃體往往往凸出于于卵巢表表面。其其位置在在兩側(cè)子子宮角尖尖端的外外側(cè)下方方。羊的卵巢::比牛的的圓,體體積也小小,其他他特點(diǎn)同同牛。豬的卵巢::有很發(fā)發(fā)達(dá)的卵卵巢囊,卵卵巢和輸輸卵管傘傘有時(shí)被被包在卵卵巢囊內(nèi)內(nèi),其形形狀隨機(jī)機(jī)體成熟熟的程度度而有不不同。幼幼小母豬豬卵巢的的形狀極極似腎臟臟,接近近性成熟熟時(shí)為桑桑椹形,達(dá)達(dá)到性成成熟時(shí)似似串狀葡葡萄。3、輸卵管管觀察輸卵管管的形狀狀及其與與卵巢、子子宮角的的關(guān)系。馬的輸卵管管有很多多彎曲,傘傘較發(fā)達(dá)達(dá)。牛、羊的輸輸卵管彎彎曲較少少,傘不不發(fā)達(dá)。豬的輸卵管管有許多多小彎曲曲,輸卵卵管傘最最發(fā)達(dá)。其其傘的開開口接近近卵巢囊囊的底部部。各種動(dòng)物輸輸卵管的的子宮端端均與子子宮角尖尖端相連連,馬及及豬的輸輸卵管與與子宮角角之間具具有明顯顯界限,牛牛、羊的的則不明明顯。4、子宮①觀察子宮宮角和子子宮體的的形狀、粗粗細(xì)、長長度及粘粘膜上的的特點(diǎn)(沿沿子宮大大彎切開開);②觀察子宮宮頸的粗粗細(xì)、長長度及其其構(gòu)造特特點(diǎn);③沿陰道上上面縱切切,觀察察陰道和和子宮頸頸及前庭庭的關(guān)系系。馬:其整個(gè)個(gè)子宮呈呈“丫”形,子子宮角為為扁帶狀狀。小彎彎在上,大大彎在下下,子宮宮頸外口口突入陰陰道,子子宮頸的的肌肉層層比較薄薄,管道道比較粗粗。牛、羊:其其子宮角角的形狀狀如同彎彎曲的綿綿羊角,大大彎向上上,小彎彎向下,子子宮粘膜膜上有子子宮阜,且且羊子宮宮阜的中中央有一一個(gè)小的的凹陷。牛牛、羊子子宮頸的的肌肉層層發(fā)達(dá),堅(jiān)堅(jiān)硬,管管道細(xì)且且有大而而厚的皺皺襞,子子宮頸外外口突出出于陰道道,但較較馬的短短,似菜菜花樣。豬:其子宮宮角長而而有許多多彎曲,子子宮頸與與子宮體體、陰道道都沒有有明顯的的界限,子子宮頸管管的粘膜膜上有兩兩排交錯(cuò)錯(cuò)的突起起。5、陰道是是由陰道道穹窿至至處女膜膜(陰道道外口)的的管道部部分。6、外生殖殖器官::包括尿尿生殖前前庭、陰陰唇及陰陰蒂。①尿生殖前前庭:由由處女膜膜至陰門門的部分分。②陰唇及陰陰蒂是雌雌性動(dòng)物物生殖道道的最后后一部分分。實(shí)驗(yàn)二
動(dòng)物睪睪丸、卵卵巢及其其他性器器官的組組織學(xué)觀觀察
一、目的要要求:通過對雄性性動(dòng)物睪睪丸和雌雌性動(dòng)物物卵巢、子子宮、輸輸卵管組組織切片片的觀察察,了解解睪丸、卵卵巢、子子宮、輸輸卵管的的組織結(jié)結(jié)構(gòu)及其其形態(tài)。了了解精子子的發(fā)生生過程,卵卵子的發(fā)發(fā)生、卵卵泡的發(fā)發(fā)育過程程及其形形態(tài)。二、實(shí)驗(yàn)材材料:1、顯微鏡鏡。2、動(dòng)物睪睪丸、卵卵巢、子子宮、輸輸卵管的的標(biāo)本及及組織切切片。3、動(dòng)物睪睪丸、卵卵巢、子子宮、輸輸卵管的的組織圖圖片(幻幻燈片)。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)內(nèi)容:(一)雄性性動(dòng)物睪睪丸的組組織學(xué)觀觀察:1、低倍鏡鏡觀察::(1)被膜膜:由漿漿膜和白白膜構(gòu)成成。外層層膜為一一層較薄薄的固有有鞘膜,內(nèi)內(nèi)層白膜膜為較厚厚的致密密結(jié)締組組織構(gòu)成成。(2)縱隔隔和中隔隔:縱隔隔為由睪睪丸的一一端伸向向睪丸實(shí)實(shí)質(zhì)的結(jié)結(jié)締組織織索,并并向四周周發(fā)出許許多放射射狀的結(jié)結(jié)締組織織小梁直直達(dá)白膜膜,形成成中隔。(3)小葉葉:由中中隔將睪睪丸實(shí)質(zhì)質(zhì)分成許許多基部部向外,頂頂端向內(nèi)內(nèi)的錐形形小葉,每每個(gè)小葉葉由2--3條盤盤曲的精精細(xì)管組組成。精精細(xì)管之之間有疏疏松的結(jié)結(jié)締組織織,內(nèi)含含有血管管和間質(zhì)質(zhì)細(xì)胞。(4)附睪睪:由精精細(xì)管匯匯合成的的直精細(xì)細(xì)管,穿穿入睪丸丸縱隔的的結(jié)締組組織,形形成彎曲曲的睪丸丸網(wǎng),睪睪丸網(wǎng)又又分出110-220條睪睪丸輸出出管形成成附睪,附附睪頭也也由結(jié)締締組織分分成若干干附睪小小葉,各各附睪小小葉的管管子匯成成附睪管管,經(jīng)附附睪體,附附睪尾最最后過渡渡為輸精精管。2、高倍鏡鏡觀察::從睪丸丸小葉中中仔細(xì)觀觀察精細(xì)細(xì)管及間間質(zhì)細(xì)胞胞的結(jié)構(gòu)構(gòu)和形態(tài)態(tài)。精細(xì)細(xì)管的管管壁的外外向由結(jié)結(jié)締組織織、基膜膜和復(fù)層層的生殖殖上皮構(gòu)構(gòu)成。生生殖上皮皮又由生生精細(xì)胞胞和支持持細(xì)胞組組成。仔仔細(xì)觀察察精子發(fā)發(fā)生周期期中主要要階段和和支持細(xì)細(xì)胞形態(tài)態(tài):(1)支持持細(xì)胞::又稱足足細(xì)胞和和塞托利利氏細(xì)胞胞。為高高柱狀或或錐狀細(xì)細(xì)胞。從從基膜一一直伸達(dá)達(dá)精細(xì)管管的管腔腔,該細(xì)細(xì)胞高低低不等,界界限不清清,細(xì)胞胞核較大大位于細(xì)細(xì)胞基部部,著色色淺,核核仁明顯顯。支持持細(xì)胞的的游離端端常嵌含含有許多多精子,其其側(cè)面嵌嵌含各個(gè)個(gè)發(fā)育階階段的生生精細(xì)胞胞,并對對生精細(xì)細(xì)胞起支支持、營營養(yǎng)、保保護(hù)、促促使其發(fā)發(fā)育的作作用。(2)精原原細(xì)胞::是精子子形成過過程的干干細(xì)胞,位位于基膜膜,細(xì)胞胞為多邊邊形或圓圓形,核核大而圓圓,染色色較深。仔仔細(xì)觀察察A、BB、中間間型三類類。(3)初級級精母細(xì)細(xì)胞:由由精原細(xì)細(xì)胞分裂裂而成,位位于精原原細(xì)胞內(nèi)內(nèi)側(cè),排排列成幾幾層,細(xì)細(xì)胞呈圓圓形,體體積較大大,著色色深,經(jīng)經(jīng)第一次次成熟分分裂形成成二個(gè)次次級精母母細(xì)胞。(4)次級級精母細(xì)細(xì)胞:由由初級精精母細(xì)胞胞分裂而而成,位位于初級級精母細(xì)細(xì)胞內(nèi)側(cè)側(cè),細(xì)胞胞體積較較小,呈呈圓形,細(xì)細(xì)胞核為為球形,染染色質(zhì)呈呈細(xì)粒狀狀,不見見核仁,由由于其存存在時(shí)間間很短,很很快經(jīng)過過第二次次成熟分分裂成為為二個(gè)精精子細(xì)胞胞,因而而在切片片上很難難找到。(5)精子子細(xì)胞::由次級級精母細(xì)細(xì)胞分裂裂而成,位位于精母母細(xì)胞內(nèi)內(nèi)側(cè),靠靠近細(xì)管管的管腔腔,排成成數(shù)層,細(xì)細(xì)胞呈圓圓形,體體積更小小,核小小呈球狀狀,染色色深,核核仁清晰晰。精子子細(xì)胞不不再分裂裂,在支支持細(xì)胞胞頂部經(jīng)經(jīng)過變態(tài)態(tài)過程成成為精子子。(6)精子子:由精精子細(xì)胞胞變態(tài)形形成,位位于精細(xì)細(xì)管的管管腔內(nèi),剛剛形成的的精子頭頭部常深深入支持持細(xì)胞游游離端,尾尾部朝管管腔,隨隨著精子子發(fā)育成成熟,便便脫離支支持細(xì)胞胞,游離離在管腔腔內(nèi),精精子分頭頭、頸、尾尾三部分分,形似似蝌蚪,頭頭部多呈呈扁卵圓圓形,染染色深。(7)附睪睪管:管管壁由環(huán)環(huán)形平滑滑肌纖維維和假復(fù)復(fù)層柱狀狀纖毛細(xì)細(xì)胞和基基底細(xì)胞胞組成,柱柱狀細(xì)胞胞有分泌泌作用,基基底細(xì)胞胞緊貼基基膜,外外形為圓圓形或卵卵圓形,染染色較淺淺,核呈呈球形,精精子在附附睪管內(nèi)內(nèi)借助分分泌液,纖纖毛運(yùn)動(dòng)動(dòng)和管壁壁蠕動(dòng)來來運(yùn)行。(二)雌性性動(dòng)物卵卵巢的組組織學(xué)觀觀察:卵巢的組織織由被膜膜、皮質(zhì)質(zhì)和髓質(zhì)質(zhì)組成。1、低倍鏡鏡觀察::(1)被膜膜:卵巢巢表面由由特殊的的生殖上上皮被覆覆,生殖殖上皮多多為單層層立方形形細(xì)胞組組成。生生殖上皮皮下面有有一層致致密結(jié)締締組織形形成的白白膜。(2)皮質(zhì)質(zhì):位于于卵巢的的外周,占占大部分分,與髓髓質(zhì)無明明顯界限限,由許許多不同同發(fā)育期期的卵泡泡和少量量黃體等等組成。(3)髓質(zhì)質(zhì):位于于卵巢的的中央(馬馬屬動(dòng)物物例外),由由富有彈彈性纖維維的疏松松結(jié)締組組織構(gòu)成成。內(nèi)有有大量的的血管、淋淋巴管和和少量平平滑肌纖纖維。2、高倍鏡鏡觀察::主要觀觀察卵巢巢皮質(zhì)部部不同發(fā)發(fā)育階段段的卵泡泡,每個(gè)個(gè)卵泡都都由位于于中央的的卵母細(xì)細(xì)胞和圍圍繞在卵卵母細(xì)胞胞周圍的的卵泡細(xì)細(xì)胞組成成。(1)原始始卵泡::位于生生殖上皮皮層內(nèi),中中間為一一卵原細(xì)細(xì)胞,周周圍由一一層扁平平卵泡細(xì)細(xì)胞所圍圍繞。(2)初級級卵泡::卵泡呈呈球形,卵卵原細(xì)胞胞位于卵卵泡中央央,周圍圍包有一一層立方方或柱狀狀的卵泡泡細(xì)胞。卵卵原細(xì)胞胞的體積積較大,中中央有個(gè)個(gè)圓形的的泡狀核核,核內(nèi)內(nèi)染色質(zhì)質(zhì)較少,著著色較淺淺,核仁仁明顯。(3)次級級卵泡::其主要要變化是是卵原細(xì)細(xì)胞體積積增大,卵卵母細(xì)胞胞和顆粒粒細(xì)胞共共同分泌泌出粘多多糖,聚聚集在顆顆粒細(xì)胞胞與卵黃黃膜之間間形成透透明帶。(4)三級級卵泡::出現(xiàn)小小的卵泡泡腔,隨隨著卵泡泡的生長長,許多多小腔合合并為一一個(gè)大的的卵泡腔腔;卵母母細(xì)胞被被擠向一一邊,并并包裹在在一團(tuán)顆顆粒細(xì)胞胞中,形形成半島島突出在在卵泡腔腔內(nèi),稱稱卵丘;;在顆粒粒層外周周形成兩兩層卵泡泡膜;卵卵的透明明帶周圍圍的柱狀狀上皮細(xì)細(xì)胞呈放放射狀排排列,稱稱為放射射冠,放放射冠細(xì)細(xì)胞有微微絨毛,并并伸入透透明帶內(nèi)內(nèi)。(5)成熟熟卵泡::三級卵卵泡繼續(xù)續(xù)生長,卵卵泡液增增多,卵卵泡腔增增大,卵卵泡擴(kuò)展展到整個(gè)個(gè)皮質(zhì)部部而突出出卵巢表表面。(6)黃體體:是排排卵后的的卵泡轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)變成的的富于血血管的內(nèi)內(nèi)分泌器器官,牛牛、羊、豬豬的黃體體位于卵卵巢皮質(zhì)質(zhì),突出出于卵巢巢表面,馬馬的黃體體則完全全埋藏在在卵巢基基質(zhì)內(nèi)。黃黃體由顆顆粒黃體體細(xì)胞和和泡膜黃黃體細(xì)胞胞組成,顆顆粒黃體體細(xì)胞占占多數(shù),大大部分位位于黃體體中間,細(xì)細(xì)胞呈多多面體,著著色淺,排排列緊密密,含有有球形細(xì)細(xì)胞核;;泡膜黃黃體細(xì)胞胞則小,大大部分位位于黃體體外周,包包在顆粒粒黃體細(xì)細(xì)胞外周周或位于于其之間間,核占占胞體的的大部分分,核與與胞質(zhì)染染色較深深。(7)閉鎖鎖卵泡::卵巢內(nèi)內(nèi)在各個(gè)個(gè)發(fā)育階階段逐漸漸退化的的卵泡叫叫閉鎖卵卵泡,即即退化的的卵母細(xì)細(xì)胞存在在于未破破裂的卵卵泡中,可可觀察到到萎縮的的卵母細(xì)細(xì)胞和膨膨脹塌陷陷的透明明帶。(三)雌性性動(dòng)物子子宮、輸輸卵管的的組織學(xué)學(xué)觀察::1.子宮子宮的組織織構(gòu)造從從外向里里為漿膜膜、肌層層和粘膜膜。肌肉肉層的外外層薄,為為縱行的的肌纖維維;內(nèi)層層厚,為為螺旋形形的環(huán)狀狀肌纖維維。子宮宮頸肌可可看作子子宮肌的的附著點(diǎn)點(diǎn),同時(shí)時(shí)也是子子宮的括括約肌,其其內(nèi)層特特別厚,且且有致密密的膠原原纖維和和彈性纖纖維,是是子宮頸頸皺襞的的主要構(gòu)構(gòu)成部分分,內(nèi)外外兩層交交界處有有交錯(cuò)的的肌束和和血管網(wǎng)網(wǎng),固有有層含有有子宮腺腺,子宮宮腺以子子宮角最最發(fā)達(dá),子子宮體較較少,子子宮頸則則在皺襞襞之間的的深處有有腺狀結(jié)結(jié)構(gòu),其其余部分分為柱狀狀細(xì)胞,能能分泌粘粘液。2.輸卵管管輸卵管的管管壁組織織結(jié)構(gòu)從從外向內(nèi)內(nèi)由漿膜膜、肌層層和粘膜膜組成,肌肌層可分分為內(nèi)層層環(huán)狀或或螺旋狀狀肌束和和外層縱縱行肌束束,其中中混有斜斜行纖維維,使整整個(gè)管壁壁能協(xié)調(diào)調(diào)的收縮縮。肌層層從卵巢巢端到子子宮端逐逐漸增厚厚,輸卵卵管粘膜膜形成若若干初級級縱襞,在在壺腹部部又分出出許多次次級縱襞襞。輸卵卵管上皮皮細(xì)胞有有柱狀纖纖毛細(xì)胞胞和無纖纖毛細(xì)胞胞,柱狀狀纖毛細(xì)細(xì)胞在輸輸卵管的的卵巢端端,特別別在傘,越越向子宮宮端越少少,這種種細(xì)胞伸伸入管腔腔。
實(shí)驗(yàn)三
PMSSG或FFSH的的生物測測定法
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)磕康臏y定PMSSG(或或FSHH)的活活性,掌掌握該激激素的簡簡易效價(jià)價(jià)測定方方法。二、實(shí)驗(yàn)原原理FSH為垂垂體促性性腺激素素,作用用于即將將達(dá)到性性成熟年年齡的雌雌性小白白鼠,可可促進(jìn)卵卵巢上的的卵泡發(fā)發(fā)育,分分泌雌激激素。在在雌激素素的作用用下,又又可促進(jìn)進(jìn)子宮、卵卵巢及整整個(gè)生殖殖器官的的發(fā)育、增增大。PPMSGG因?yàn)橐惨埠蠪FSH,因因此具有有與FSSH相同同的生物物學(xué)作用用,也能能促進(jìn)性性成熟前前的小白白鼠子宮宮發(fā)育增增大。PMSG在在機(jī)體內(nèi)內(nèi)的作用用期比FFSH長長,因此此在測試試效價(jià)過過程中,PPMSGG可作一一次注射射,而FFSH需需經(jīng)多次次注射。三、實(shí)驗(yàn)材材料1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)動(dòng)物
健康康無傷殘殘的188-233日齡(即即將達(dá)到到性成熟熟日齡)、體體重9--13gg的同源源雌性小小白鼠。各各測試組組實(shí)驗(yàn)鼠鼠出生日日齡相差差不得越越過三天天,體重重相差不不得超過過2g。2、測定樣樣品
PMMSG(或或FSHH)、生生理鹽水水。3、測定器器具
1mml注射射器、44號針頭頭、0..1mll微量注注射器、11ml和和2mll吸管、吸吸耳球、酒酒精棉球球、剪刀刀、鑷子子、搪瓷瓷盤、解解剖板、鼠鼠罐和青青霉素瓶瓶(稀釋釋瓶)。四、測試方方法1、測試組組的確定定為了測得精精確效價(jià)價(jià),應(yīng)先先將各測測試樣品品濃度組組距加大大進(jìn)行粗粗測,從從而確定定樣品的的大致效效價(jià)范圍圍,再將將測試樣樣品濃度度組距減減少,以以測得樣樣品較為為精確的的效價(jià),可可按下表表選擇確確定測試試組。①PMSGG測試組組的確定定每0.1mmlPMMSG,按按下表加加入不同同量的生生理鹽水水,稀釋釋成不同同濃度作作為各測測試組。PMSG稀稀釋濃度度換算小小白鼠單單位每mlPMMSG中中加入生生理鹽水水量稀釋液中PPMSGG濃度PMSG小小白鼠單單位(MMu/mml)111/1260151/1680191/20100231/24120271/28140311/32160351/36180391/40200431/44220471/48240②FSH測測試組的的確定FSH是瓶瓶裝粉劑劑,故在在配制不不同濃度度的測試試組之前前,需用用一定量量的生理理鹽水稀稀釋成溶溶液,測測出每mml溶液液中的效效價(jià)值后后,即可可換算出出該瓶裝裝內(nèi)FSSH的效效價(jià)值。每每只鼠注注入總劑劑量需分分作五次次注射,每每天注射射兩次。在在常溫條條件下,稀稀釋后的的FSHH容易失失活,效效價(jià)降低低。因此此在注射射期間的的FSHH溶液應(yīng)應(yīng)在低溫溫下保存存。在測測試中,每每瓶FSSH準(zhǔn)確確取5mml生理理鹽水稀稀釋作為為母液,于于0-55℃下存放放。用FFSH母母液為小小白鼠作作五次注注射,故故每次注注射劑量量應(yīng)是總總劑量的的五分之之一。因因此取配配制好的的母液00.2mml加生生理鹽水水0.88ml,經(jīng)經(jīng)一次稀稀釋成工工作液,再再取0..1mll工作液液,按下下表所示示加入不不同量的的生理鹽鹽水,即即可配制制成不同同濃度的的測試組組。加生理鹽水水(mll)溶液量(mml)溶液濃度注射鼠數(shù)(只只)母液/只鼠鼠(mll)Mu/mll2.04.81/121/161/201/241/281/361/361/401/441/4855555555551/601/801/10001/12001/14001/16001/18001/20001/22001/24006080100120140160180200200240一瓶裝的FFSH經(jīng)經(jīng)1mll生理鹽鹽水稀釋釋成母液液,可配配制成110個(gè)測測試組,為為50只只小白鼠鼠注射。2、小白鼠鼠稱重分分組各測試組小小白鼠組組內(nèi)體重重的差異異不得超超過2gg,將小小白鼠分分為5組組,每組組5只,分分別編號號,其中中一組為為對照組組,注射射同樣劑劑量的生生理鹽水水。其余余四組為為測試不不同濃度度樣品的的測試組組。3、注射將稀釋好的的藥劑分分別給各各組的小小白鼠腹腹部皮下下注射00.2mml,對對照組注注射生理理鹽水,注注意注射射量力求求準(zhǔn)確,不不得使藥藥液注射射胸腔或或腹腔或或逸出體體外。4、剖檢于注射藥液液后722~766小時(shí),先先用頸椎椎脫臼法法或撞擊擊頭部法法處死小小白鼠,用用圖釘將將小白鼠鼠固定于于解剖板板上,用用剪刀剪剪開腹腔腔,將子子宮卵巢巢剝離取取出,觀觀察子宮宮增大情情況。5、效價(jià)確確定將各組子宮宮與對照照組比較較,每組組5只小小白鼠中中有3只只或3只只以上子子宮增大大一倍以以上,則則定為陽陽性反應(yīng)應(yīng)。根據(jù)據(jù)各測試試組中呈呈陽性反反應(yīng)的最最低濃度度組效價(jià)價(jià)值,換換算出被被測樣品品中PMMSG(或或FSHH)的小小白鼠單單位。假設(shè)稀釋液液中PMMSG濃濃度為11/x,若若稀釋后后濃度在在1/xx以上各各組均呈呈陽性反反應(yīng),則則1/xx濃度的的測試組組為呈陽陽性反應(yīng)應(yīng)的最低低濃度。實(shí)實(shí)際注入入鼠體內(nèi)內(nèi)的供試試品藥液液量為11/x··1/55ml==1/55xmml,則則1mll供試品品藥液中中含有的的生物效效價(jià)為55x小白白鼠單位位(Muu)。實(shí)驗(yàn)四
精液品品質(zhì)常規(guī)規(guī)檢查及及理化因因素的影影響
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)磕康恼莆諜z查精精子密度度、活率率的方法法,熟悉悉肉眼檢檢查精液液品質(zhì)的的方法,驗(yàn)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)驗(yàn)觀察理理化因素素對精子子運(yùn)動(dòng)及及生存能能力的影影響。二、實(shí)驗(yàn)材材料1、動(dòng)物::種公羊羊、母羊羊、種公公牛、母母牛。2、藥械用用品:牛牛、羊假假陰道全全套、33%和00.9%%氯化鈉鈉溶液、浸浸潤劑(111份石石蠟油++2份凡凡士林)、溫溫度計(jì)、鑷鑷子、漏漏斗、玻玻璃棒、大大搪瓷盤盤、熱水水、顯微微鏡、載載玻片、蓋蓋玻片、乙乙醚、紗紗布、試試管、22%煤酚酚皂液、11/10000新新潔爾滅滅、保溫溫箱、冰冰、酒精精、美蘭蘭。3、凍精顆顆粒三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)內(nèi)容(一)精液液的肉眼眼檢查
1、射精量量:將采采得的精精液倒入入有刻度度的試管管或杯中中,測其其容量。各各種家畜畜的平均均射精量量為:馬馬70(330-1100)毫毫升;驢驢50(220-880)毫毫升;牛牛(2--10)毫毫升;羊羊1(00.7--2)毫毫升;豬豬2500(1550-5500)毫毫升。2、觀察精精液的色色澤并嗅嗅聞氣味味。3、云霧狀狀的觀察察:觀察察精液的的云霧狀狀翻騰滾滾動(dòng)。按按以下符符號記入入表內(nèi),云云霧狀顯顯著者,以以“++++”表示,有有云霧狀狀以“++”表示;;云霧狀狀不明顯顯者以“+”表示。(二)精子子密度檢檢查及活活率評定定1、檢查精精子的密密度:取取一小滴滴精液于于清潔的的載玻片片上,加加上蓋玻玻片,使使精液分分散成均均勻一薄薄層,但但不得有有氣泡,也也不能使使精液外外流或溢溢于蓋玻玻片上,置置顯微鏡鏡下放大大4000-6000倍觀觀察,按按下列等等級評定定其密度度。密——在整整個(gè)視野野中精子子密度很很大,彼彼此間空空隙很小小,看不不清各個(gè)個(gè)精子運(yùn)運(yùn)動(dòng)的活活動(dòng)情況況,這一一級屬于于“密”,每毫毫升含精精子數(shù)約約在100億以上上。中——精子子之間的的空隙明明顯,精精子彼此此之間距距離約有有一個(gè)精精子的長長度。有有些精子子的活動(dòng)動(dòng)情況可可以清楚楚地看到到。這種種精液的的密度評評為“中”,每毫毫升所含含精子數(shù)數(shù)約在22-100億之間間。稀——精子子分散存存在,精精子間的的空隙超超過一個(gè)個(gè)精子長長度,這這種精液液每毫升升所含精精子在22億以下下。2、評定精精子的活活率:必必須于采采精后立立刻在118-225℃實(shí)驗(yàn)室室中進(jìn)行行,最好好在377℃保溫箱箱內(nèi)進(jìn)行行,同時(shí)時(shí)也可以以測定精精子的密密度。用玻棒蘸取取一滴原原精液或或稀釋的的精液(馬馬、豬精精液密度度低不須須稀釋,牛牛、羊密密度大,需需用0..9%氯氯化鈉溶溶液稀釋釋,其溫溫度相近近),滴滴在載玻玻片上,也也可滴在在載玻片片上翻放放于凹玻玻片的凹凹窩上,最最后置于于顯微鏡鏡下,放放大2550-4400倍倍檢查,顯顯微鏡載載物臺須須放平。并并最好在在暗視野野中進(jìn)行行。精子的活動(dòng)動(dòng)有三種種類型::前進(jìn)運(yùn)運(yùn)動(dòng)、旋旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)動(dòng)和振擺擺運(yùn)動(dòng),評評價(jià)精子子活率是是根據(jù)前前進(jìn)運(yùn)動(dòng)動(dòng)精子數(shù)數(shù)多少而而定。
目前評定精精子活率率等級的的方法有有兩種::十級制———在顯微微鏡下估估計(jì)直線線前進(jìn)運(yùn)運(yùn)動(dòng)精子子所占百百分?jǐn)?shù),直直線前進(jìn)進(jìn)運(yùn)動(dòng)精精子為1100%%者評為為1.00級;990%者者評為00.9級級,依此此類推。五級制———全部精精子呈前前進(jìn)運(yùn)動(dòng)動(dòng)者屬于于“5”級,絕絕大多數(shù)數(shù)精子(約約80%%)呈前前進(jìn)運(yùn)動(dòng)動(dòng)者為“4”級,前前進(jìn)運(yùn)動(dòng)動(dòng)的精子子略多于于半數(shù)者者(約660%)為為“3”級;不不及半數(shù)數(shù)者為“2”級,呈呈前進(jìn)運(yùn)運(yùn)動(dòng)的精精子數(shù)目目極少者者屬“1”級。牛及羊的精精液中由由于副性性腺分泌泌物少,要要求“密5”即密度度為“密”,活率率為“5”級及“密4”或“中5”及“中4”一級才才能作為為輸精之之用。馬馬與豬的的精液中中副性腺腺分泌多多,就是是“稀5”甚至“稀3”的亦可可用于輸輸精。(三)理化化因素對對精子的的影響1、溫度的的影響①取采得的的原精液液一滴滴滴在載玻玻片上,放放在顯微微鏡下觀觀察其活活率,再再放在445-550℃下2分分鐘觀察察精子活活率有何何變化。②將新采得得精液立立即檢查查其活率率后,隨隨后即移移入0--5℃溫度下下2-33分鐘,溫溫度回升升到377-388℃后再檢檢查精子子活率,注注意降溫溫前后精精子活率率變化情情況。2、滲透壓壓的影響響:觀察察原精液液的活率率后,分分別在三三滴原精精液內(nèi)各各加入11%氯化化鈉溶液液、3%%氯化鈉鈉溶液和和蒸餾水水,觀察察其活率率及形態(tài)態(tài)有何變變化。3、取1--2毫升升經(jīng)稀釋釋過的精精液放入入小試管管中,經(jīng)經(jīng)檢查活活率后,用用手上下下劇烈振振動(dòng)2--3分鐘鐘,再觀觀察精子子活率有有何變化化。4、取1--2毫升升稀釋過過的精液液放入小小試管中中,經(jīng)檢檢查活率率后,在在太陽光光下照射射10分分鐘,觀觀察精子子活率有有何變化化。5、化學(xué)藥藥品的影影響:取取一滴精精液于載載玻片上上,用滴滴管分別別滴入以以下藥液液混合后后復(fù)以蓋蓋玻片。①2%煤酚酚皂液。②1/30000新新潔爾滅滅液。③75%酒酒精。分別觀察其其精子活活率及形形態(tài)有何何變化。四、作業(yè)將本次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)所測結(jié)結(jié)果分別別填入下下列表內(nèi)內(nèi)。理化因素對對精子活活率影響響記載表表處理前活率評分處理后活率評分37~388℃
40~455℃
降溫處理前前
降溫處理后后
加入不同濃濃度溶液液前
加入1%NNacll溶液后后加入3%NNacll溶液后后加入蒸餾水水后
振蕩前
經(jīng)劇烈振動(dòng)動(dòng)
陽光照射前前
陽光照射后后
加入藥液前前
加入2%棉棉酚皂液液加入1/110000新潔爾爾滅溶液液加入75%%酒精后后
4—3
實(shí)驗(yàn)五
精子數(shù)數(shù)量計(jì)算算和畸形形率的測測定
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)磕康恼莆沼醚蚯蛴?jì)數(shù)板板檢查單單位容積積(毫升升)中所所含精子子數(shù)的方方法,以以及測定定精子畸畸形率的的操作要要點(diǎn)。二、實(shí)驗(yàn)材材料1、材料::公牛、公公羊、公公馬、公公豬精液液。2、器械及及用品::顯微鏡鏡、載玻玻片、玻玻棒、00.9%%Naccl溶液液、955%和775%的的酒精、染染色缸、33%鹽水水、蘭墨墨水、00.5%%龍膽紫紫酒精溶溶液、紅紅、白血血球稀釋釋管、血血球計(jì)數(shù)數(shù)板、55ml試試管、血血吸管和和1mll吸管。3、畸形精精子形態(tài)態(tài)圖。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)內(nèi)容血球計(jì)算盤盤構(gòu)造模模式圖。(一)精子子數(shù)量計(jì)計(jì)算1、精液稀稀釋:①用1mll吸管吸吸3%NNaCll0..2mll或2mml,放放入小試試管中,(根根據(jù)稀釋釋倍數(shù)確確定)用用血吸管管吸出110或220mllNaCCl拋掉掉。②用血吸管管將精液液吸至刻刻度100或200ml處處。③用紗布擦擦去吸管管尖端所所附的精精液。④用拇指按按住試管管口,振振蕩2--3分鐘鐘使其均均勻混合合。2、精子的的計(jì)數(shù)::①將擦洗干干凈的計(jì)計(jì)數(shù)板放放于顯微微鏡的載載物臺上上,蓋上上蓋玻片片。②將試管中中稀釋好好的精液液滴一滴滴于計(jì)數(shù)數(shù)板蓋玻玻片的邊邊緣使精精液自動(dòng)動(dòng)滲進(jìn)計(jì)計(jì)數(shù)室,注注意不要要使精液液溢出于于蓋玻片片處,并并不可使使精液不不夠而致致計(jì)數(shù)室室內(nèi)有氣氣泡或干干燥之處處,如有有這些現(xiàn)現(xiàn)象應(yīng)重重做。③靜置3分分鐘便可可在4000-6600倍倍的顯微微鏡下檢檢查。④數(shù)出計(jì)數(shù)數(shù)室的四四角及中中央共五五個(gè)大方方格即880個(gè)小小方格內(nèi)內(nèi)的精子子數(shù)。⑤計(jì)數(shù)每小小格內(nèi)的的精子,只只數(shù)格內(nèi)內(nèi)及壓在在左線和和上線者者。⑥由五個(gè)大大方格(880個(gè)小小方格)所所數(shù)到的的精子數(shù)數(shù)代入下下式,即即得出每每毫升的的精子數(shù)數(shù):1ml原精精液內(nèi)的的精子數(shù)數(shù)=x(55個(gè)大方方格內(nèi)的的精子數(shù)數(shù))×5(等等于255個(gè)大方方格內(nèi)的的精子數(shù)數(shù))×10(等等于1mmm3內(nèi)內(nèi)的精子子數(shù))××10000(等等于1mml被檢檢稀釋精精液樣品品內(nèi)精子子數(shù))××被檢精精液稀釋釋倍數(shù)為了減少誤誤差,必必須進(jìn)行行兩次計(jì)計(jì)數(shù),如如果前后后兩次誤誤差大于于10%%,應(yīng)作作第三次次檢查。最最后在三三次檢查查中取兩兩次誤差差不超過過10%%的,求求出平均均數(shù),即即為所確確定的精精子數(shù)。5—2
(二)直線線運(yùn)動(dòng)精精子數(shù)的的計(jì)算(精精子活率率的計(jì)算算)方法基本和和精子數(shù)數(shù)量計(jì)算算法相同同,有以以下幾點(diǎn)點(diǎn)不同。1、用0..9%生生理鹽水水作為稀稀釋劑,以以保持正正常活精精子運(yùn)動(dòng)動(dòng)。2、顯微鏡鏡置于保保溫箱中中,保持持37--38℃℃。3、計(jì)數(shù)四四角及中中央五個(gè)個(gè)方格中中的非直直線運(yùn)動(dòng)動(dòng)精子數(shù)數(shù)(包括括死精子子,擺動(dòng)動(dòng)旋轉(zhuǎn)運(yùn)運(yùn)動(dòng)的精精子),求求出每毫毫升精液液中非直直線運(yùn)動(dòng)動(dòng)的精子子數(shù)。5、計(jì)算直直線運(yùn)動(dòng)動(dòng)精子的的百分?jǐn)?shù)數(shù)(三)測定定精子畸畸形率1、以細(xì)玻玻璃棒蘸蘸精液一一滴,滴滴于載玻玻片上一一端,如如果是牛牛羊精液液應(yīng)再加加1-22滴0..9%氯氯化鈉溶溶液。2、以另一一載玻片片的頂端端呈355°角抵于于精液滴滴上,并并向另一一端推去去,將精精液均勻勻涂抹于于載玻片片上。3、將抹片片放于空空氣中干干燥。4、用下列列方法中中的任一一方法固固定染色色。①用0.55%的龍龍膽紫酒酒精染色色三分鐘鐘,水洗洗,待干干后即可可鏡檢(也也可用由由普通紅紅藍(lán)墨水水代替)②置95%%酒精中中(或55%福爾爾馬林溶溶液)固固定5--6分鐘鐘,取出出以水沖沖洗后,涼涼干或烘烘干,用用藍(lán)、紅紅墨水等等染色33-5分分鐘,再再用水沖沖洗,干干燥后置置于顯微微鏡下檢檢查。5、鏡檢::將制好好的抹片片置于顯顯微鏡下下,查數(shù)數(shù)不同視視野的5500個(gè)個(gè)精子,計(jì)計(jì)算出其其中所含含畸形精精子數(shù),求求出畸形形百分率率。四、作業(yè)1、列表記記載本次次實(shí)習(xí)所所得數(shù)值值。2、分析所所得數(shù)值值和一般般常數(shù)的的差異。
實(shí)驗(yàn)六
精子頂頂體完整整率的測測定
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)磕康?、學(xué)習(xí)精精液抹片片染色方方法。2、觀察正正常精子子頂體和和異常精精子頂體體狀態(tài),計(jì)計(jì)算精子子頂體完完整率。二、實(shí)驗(yàn)材材料(一)精液液樣品::液態(tài)精液或或解凍精精液。(二)福爾爾馬林磷磷酸鹽固固定液配配制1、取2..25ggNaHH2POO4·12HH2O和和55ggNaHH2POO4·2H22O于1100mml容量量并加入入0.889%NNaCll溶液約約30mml,在在30℃℃溫度下下靜置33-4hh使之溶溶解。2、加入經(jīng)經(jīng)MgCCO3飽飽和的甲甲醛溶液液8毫升升,其配配制方法法是在5500mml甲醛醛中加入入8gMMgCOO3,須須在一周周前配制制好,使使PH值值由原來來3.884提高高到5..0左右右。3、加0..89%%NaCCl液至至1000ml,靜靜置244h,PPH值為為7.00-7..2。(三)磷酸酸鹽緩沖沖液配制制取2.2ggNa22HPOO4·12HH2O和和0.555gNNaH22PO44·2H22O置于于1000ml容容量瓶中中,加入入約300ml蒸蒸餾水溶溶解后用用蒸餾水水定容至至1000ml,PPH值為為7.00-7..2。(四)姬姆姆薩原液液配制稱取姬姆薩薩染料11g,甘甘油666ml,甲甲醇666ml,將將研細(xì)的的姬姆薩薩染料加加入少量量溫?zé)幔?60℃)的甘甘油,在在研缽內(nèi)內(nèi)研磨直直至完全全無顆粒粒呈勻漿漿而止,再再將剩余余全部甘甘油倒入入置566℃恒溫箱箱中2hh,分次次用甲醇醇清洗容容器于棕棕色瓶保保存,二二周后使使用,此此原液放放置時(shí)間間越長越越好,使使用前過過濾。(五)姬姆姆薩染液液的配制制根據(jù)每個(gè)抹抹片需染染液2mml來確確定所需需染液量量,配置置好的染染液需立立即使用用染色,放放置時(shí)間間過長會會使染色色效果減減退。姬姆薩染液液的配制制方法為為原染液液、緩沖沖液、蒸蒸餾水的的比例為為2:33:5。(六)蘇木木精———伊紅染染液的配配制1.蘇木精精染液2.伊紅染染液:00.5%%伊紅溶溶液(七)生物物顯微鏡鏡(10000××油鏡)(八)血球球計(jì)數(shù)板板(九)載玻玻片、蓋蓋玻片、滴滴管、紅紅布、染染色缸、染染色架、玻玻片鑷
三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)內(nèi)容(一)抹片片將需測定精精液樣品品搖勻,在在精液的的中層用用吸管吸吸取一小小滴精液液,平滴滴在載玻玻片的右右端,取取另一邊邊緣光滑滑平直的的載玻片片呈355°角自精精液滴的的左面向向右接觸觸樣品,樣樣品精液液即呈條條狀分布布在兩個(gè)個(gè)載玻片片接觸邊邊緣之間間,將上上面的載載玻片貼貼著平置置的載玻玻片表面面自右向向左移動(dòng)動(dòng),帶著著精液滴滴均勻地地涂抹在在載玻片片上,切切忌將精精液滴“推”過去,否否則易造造成精子子的人為為損傷,制制作另一一抹片時(shí)時(shí),須重重新?lián)Q取取載玻片片,在抹抹片的右右端背面面用特種種鉛筆注注明標(biāo)號號,每份份精液樣樣品須同同時(shí)制作作兩個(gè)抹抹片。(二)風(fēng)干干自然干燥55-200分鐘后后即固定定染色,不不可久置置。(三)固定定將風(fēng)干抹片片平置于于染色架架上,用用滴管吸吸取1--2mll福爾馬馬林磷酸酸鹽緩沖沖固定液液,滴在在抹片上上,輕輕輕搖動(dòng),使使固定液液布滿在在整個(gè)抹抹片表面面,靜置置固定115分鐘鐘。(四)水洗洗用玻片鑷夾夾住抹片片一端,將將固定液液棄至染染色缸內(nèi)內(nèi),在蒸蒸餾水缸缸中涮洗洗,取出出立于瓷瓷盤邊待待干。(五)染色色將經(jīng)固定風(fēng)風(fēng)干后的的抹片平平置于染染色架上上,選用用下列任任意一種種染色液液進(jìn)行染染色。1、用滴管管吸取新新配制的的姬姆薩薩染色液液2mll,自左左向右滴滴在涂片片上,使使染液均均勻布滿滿抹片上上,靜置置染色990分鐘鐘。2、取蘇木木精染液液,滴于于風(fēng)干后后的抹片片上,靜靜置155分鐘,用用蒸餾水水洗去染染色液體體,待其其自然風(fēng)風(fēng)干后,再再用0..5%伊伊紅復(fù)染染液滴于于經(jīng)蘇木木精初染染的抹片片上復(fù)染染2-33分鐘。(六)水洗洗用(四)的的方法水水洗除去去抹片上上的染色色體液,每每張抹片片經(jīng)數(shù)次次涮洗,直直至水洗洗液無色色為止,風(fēng)風(fēng)干待鏡鏡檢觀察察。(七)精子子頂體的的觀察將精液樣品品抹片置置于10000倍倍生物顯顯微鏡下下用油鏡鏡頭觀察察或者用用相差顯顯微鏡(110×40×1.225倍)觀觀察。用用姬姆薩薩液染色色時(shí),精精子的頂頂體呈紫紫色,而而用蘇木木精———伊紅液液染色時(shí)時(shí),精子子的細(xì)胞胞膜呈黑黑色,頂頂體和核核染成紫紫紅色。按照精子形形態(tài),細(xì)細(xì)胞膜及及頂體的的完整與與否,將將精子頂頂體狀態(tài)態(tài)分為四四種類型型。1、頂體完完整型::精子頭頭部外形形正常,細(xì)細(xì)胞膜和和頂體完完整、著著色均勻勻、頂脊脊、赤道道段清晰晰。2、頂體膨膨變型::頂體著著色均勻勻,但頭頭部邊緣緣不整齊齊呈畸形形,核前前細(xì)胞膜膜不明顯顯或部分分缺損。3、頂體破破損型::頂體著著色不均均勻,頂頂體脫離離細(xì)胞核核,形成成缺口或或陷凹。4、頂體全全脫型::赤道段段以前的的細(xì)胞膜膜缺損,頂頂體已全全部脫離離細(xì)胞核核。
(八)計(jì)算算在每張抹片片上觀察察3000個(gè)精子子,并統(tǒng)統(tǒng)計(jì)出頂頂體完整整型精子子數(shù)。精子頂體完完整率(%%)=要求每張抹抹片精子子頂體完完整率差差異不超超過155%,求求出二張張抹片平平均頂體體完整率率,即為為樣品精精液的頂頂體完整整率。四、作業(yè)將試驗(yàn)結(jié)果果填入下下表畜種(號)::
精液類類型:
精精液活率率:
抹片號頂體完整型型(個(gè))異常頂體類類型(個(gè)個(gè))頂體完整率率(%)平均頂體完整率(%%)頂體膨變型型頂體破損型型頂體全脫型型1
2
實(shí)驗(yàn)七
人工授授精器械械的認(rèn)識識及假陰陰道的準(zhǔn)準(zhǔn)備
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)磕康恼J(rèn)識各種家家畜人工工授精所所用的器器械,了了解其構(gòu)構(gòu)造、用用途和使使用方法法,初步步掌握假假陰道的的安裝方方法。二、實(shí)驗(yàn)材材料1、各種家家畜的采采精器械械。2、各種家家畜的輸輸精器械械。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)內(nèi)容(一)各種種家畜采采精器械械的認(rèn)識識各種家畜的的采精器器械主要要是假陰陰道,由由外殼、內(nèi)內(nèi)胎、集集精杯33部分組組成。各各種家畜畜的假陰陰道分別別介紹如如下:馬:其假陰陰道外殼殼是由鍍鍍鋅鐵皮皮制成的的圓筒,外外形似大大暖瓶,筒筒體中部部有把手手,便于于采精時(shí)時(shí)把握,側(cè)側(cè)面有注注水孔,可可塞進(jìn)帶帶氣嘴的的橡皮塞塞子,由由此灌水水和充氣氣。內(nèi)胎胎是由優(yōu)優(yōu)質(zhì)橡膠膠制成長長筒,裝裝于外殼殼內(nèi),兩兩端翻卷卷固定在在外殼內(nèi)內(nèi),集精精杯為短短圓狀的的黑色橡橡皮杯,套套在外殼殼的小端端。牛:其假陰陰道有美美式、蘇蘇式兩種種,外殼殼是由硬硬橡膠或或塑料制制成的圓圓筒,中中部有注注水孔,塞塞有帶氣氣嘴的橡橡皮塞,灌灌水和充充氣用,內(nèi)內(nèi)胎同馬馬;集精精杯有二二種:一一種是棕棕色的雙雙層集精精杯,夾夾層可盛盛37℃℃以下溫溫水以保保護(hù)精液液;另一一種是在在橡皮漏漏斗上接接上一個(gè)個(gè)玻璃管管或離心心管。羊:其假陰陰道構(gòu)造造基本與與牛相同同,只是是較小,集集精杯是是棕色的的雙層杯杯。豬:其假陰陰道構(gòu)造造基本與與牛、羊羊相同,只只是較牛牛的短,比比羊的粗粗,集精精杯為有有色的廣廣口玻璃璃瓶,容容量為3350--5000ml。在在生產(chǎn)實(shí)實(shí)踐中,豬豬采精通通常用手手握法,須須醫(yī)用乳乳膠手套套和一個(gè)個(gè)保溫杯杯即可。(二)各種種家畜輸輸精器械械的認(rèn)識識各種家畜的的輸精器器械為開開張器,輸輸精器和和照明燈燈。開張器有二二種:一一種是金金屬的鴨鴨嘴式開開張型的的,一種種是玻璃璃或塑料料的圓筒筒式的,各各種家畜畜的開張張器只是是大小有有別。輸精器有玻玻璃、金金屬、塑塑料、橡橡皮制成成的。馬馬、豬的的輸精器器,為一一端尖細(xì)細(xì)的優(yōu)質(zhì)質(zhì)橡皮管管,其大大小不一一,它的的一端接接注射器器。牛、羊羊的輸精精器有玻玻璃和金金屬兩種種,其中中大小不不一,牛牛采用直直腸把握握法輸精精多用金金屬輸精精器。細(xì)細(xì)管冷凍凍精液,有有專用的的金屬細(xì)細(xì)管輸精精槍———卡蘇槍槍。照明燈:可可用手電電筒、頭頭燈,最最實(shí)用的的為固定定在開張張器或輸輸精器上上的照明明燈。(三)假陰陰道的安安裝安裝前的準(zhǔn)準(zhǔn)備首先檢查::(1)外殼殼有無裂裂縫或小小孔。(2)內(nèi)胎胎是否漏漏氣,邊邊緣是否否裂口。(3)氣門門活塞是是否有裂裂口漏氣氣,開關(guān)關(guān)是否靈靈活。2、安裝方方法(1)內(nèi)胎胎光滑面面朝內(nèi)腔腔裝入外外殼,兩兩端翻卷卷于外殼殼兩端,不不得扭轉(zhuǎn)轉(zhuǎn),中軸軸與外殼殼重合呈呈同心圓圓位置,并并用橡皮皮圈固定定兩端。(2)由外外殼的注注水孔注注入455~555℃的溫水水,使采采精時(shí)的的溫度為為38~~42℃℃,水量量為外殼殼內(nèi)胎之之間容積積的1//3~11/2。(3)裝上上氣門活活塞,于于一端裝裝上集精精杯和保保護(hù)套。(4)用玻玻璃棒涂涂布潤滑滑劑凡士士林或石石蠟油。由由內(nèi)向外外均勻涂涂布,深深度不超超過1//2。(5)打開開開關(guān)充充氣,使使內(nèi)胎呈呈“Y”形。(6)用溫溫度計(jì)插插入假陰陰道,測測量溫度度為388~422℃,準(zhǔn)備備采精。四、作業(yè)試述牛假陰陰道的組組成及安安裝方法法。
實(shí)驗(yàn)八
動(dòng)物精精液的冷冷凍技術(shù)術(shù)操作
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)磕康牧私饩豪淅鋬霰4娲婕夹g(shù)的的操作過過程,基基本掌握握冷凍精精液的制制作技術(shù)術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)材材料1、牛、豬豬精液。2、藥品::葡萄糖糖、蔗糖糖、檸檬檬酸鈉、氨氨基乙酸酸、三羥羥基甲基基氨基甲甲烷、甘甘油、雞雞蛋、青青霉素、鏈鏈霉素。3、器具::液氮罐罐、保溫溫瓶、溫溫度計(jì)、鑷鑷子、鋁鋁飯盒、氟氟板、銅銅紗網(wǎng)、滴滴管、細(xì)細(xì)管、封封口粉、燒燒杯、量量筒、三三角燒瓶瓶、瓷盤盤、紗布布、棉花花、顯微微鏡、顯顯微鏡保保溫箱、載載玻片、蓋蓋玻片、天天平、濾濾紙、玻玻璃球、磁磁力攪拌拌器。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)內(nèi)容(一)公牛牛精液的的冷凍::1、稀釋液液的配制制稀釋液配方方:122%蔗糖糖溶液775mll,卵黃黃20mml,甘甘油5mml,青青霉素5500--10000單位位/mll,鏈霉霉素5000-110000μg/mml。首先配制112%蔗蔗糖溶液液,過濾濾后在水水浴中煮煮沸消毒毒15分分鐘,待待涼后按按比例加加卵黃、甘甘油和青青鏈霉素素,用磁磁力攪拌拌器或玻玻璃棒充充分?jǐn)噭騽颉?、解凍液液的配制制解凍液配方方:檸檬檬酸鈉22.9((g),蒸蒸餾水1100mml,配配好后過過濾,煮煮沸消毒毒。3、顆粒法法與細(xì)管管法(見見流程圖圖)(二)公豬豬精液的的冷凍1、稀釋液液配制稀釋液配方方:122%蔗糖糖溶液
755ml
氨氨基乙酸酸
0..5g
檸檬檬酸鈉
0..5g
Trris
0.22g
卵黃黃
20mml雙雙重蒸餾餾水加至至
1000mll
甘油油最終濃濃度
1%%
青鏈鏈霉素
5000-10000μμg/mml甘油配制112%蔗蔗糖溶液液,并加加入氨基基乙酸,檸檸檬酸鈉鈉和Trris后后過濾煮煮沸155分鐘消消毒,待待涼后按按比例加加入卵黃黃、甘油油、青鏈鏈霉素,充充分?jǐn)嚢璋杈鶆颉?、解凍稀稀釋液的的配制解凍稀釋液液配方::葡萄糖糖
5gg
雙蒸水水
1000mll
檸檬檬酸鈉
0..5g
10%%安鈉加加
5mml配好后過濾濾煮沸消消毒
顆
粒
法
細(xì)
管
法
3、冷凍工工藝流程程:鏡檢:精液采得后在38-40℃下顯微鏡檢查,活力不低于0.7
釋釋:用稀稀釋液11:1等等溫稀釋釋
四、作業(yè)::1、評定冷冷凍精液液解凍后后的活力力。2、試述如如何提高高冷凍精精液的質(zhì)質(zhì)量。
實(shí)驗(yàn)九
動(dòng)物的的發(fā)情鑒鑒定
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)磕康挠^察識別母母牛、母母羊和母母豬發(fā)情情時(shí)外部部表現(xiàn)(性性興奮),陰陰道的變變化和性性欲表現(xiàn)現(xiàn),利用用腹腔鏡鏡觀察卵卵巢的發(fā)發(fā)育情況況,確定定母畜是是否發(fā)情情。二、實(shí)驗(yàn)材材料陰道開張器器、載玻玻片、消消毒棉簽簽、腹腔腔鏡、溫溫水、11%煤酚酚皂溶液液、755%酒精精棉球、生生理鹽水水。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)內(nèi)容(一)外部部觀察法法發(fā)情動(dòng)物常常表現(xiàn)為為精神不不安,鳴鳴叫,食食欲減退退,外陰陰部充血血腫脹,濕濕潤,有有粘液流流出,對對周圍的的環(huán)境和和雄性動(dòng)動(dòng)物的反反應(yīng)敏感感。母牛發(fā)情表表現(xiàn)不安安,哞叫叫,食欲欲和奶量量都減少少,尾巴巴常不停停地?fù)u擺擺和高舉舉。放牧牧?xí)r通常常不安靜靜吃草而而亂走。明明顯的特特征是接接受其它它母牛的的爬跨,拱拱腰站立立不動(dòng),發(fā)發(fā)情母牛牛也追逐逐其它牛牛。其它它牛常嗅嗅聞發(fā)情情母牛的的陰門,但但發(fā)情母母牛從不不去嗅聞聞其它母母牛的陰陰門。陰陰道排出出蛋清樣樣的粘液液,打開開陰道從從開張器器中間滴滴溜垂落落地下。母羊發(fā)情亦亦表現(xiàn)不不安,高高聲鳴叫叫,不停停地?fù)u尾尾巴,用用手按壓壓其臀部部搖尾更更甚,食食欲減退退,反芻芻停止,放放牧?xí)r常常有離群群現(xiàn)象,上上述表現(xiàn)現(xiàn),山羊羊比綿羊羊表現(xiàn)強(qiáng)強(qiáng)烈。母豬的發(fā)情情表現(xiàn)在在各種母母畜中表表現(xiàn)最為為強(qiáng)烈,食食欲劇減減甚至廢廢絕,在在圈內(nèi)不不停走動(dòng)動(dòng),碰撞撞騷擾,拱拱地,啃啃嚼門閂閂企圖外外出,不不停爬跨跨其它母母豬,而而且也接接受其它它母豬的的爬跨。(二)陰道道檢查1、開張器器法(1)檢查查前的準(zhǔn)準(zhǔn)備工作作保定:根據(jù)據(jù)現(xiàn)場條條件和習(xí)習(xí)慣,利利用繩索索,三角角絆或六六柱欄保保定母馬馬;將尾尾毛理齊齊,由一一側(cè)拉向向前方。外陰部的洗洗滌和清清毒:先先用溫水水(或肥肥皂、22-3%%的蘇打打水等)洗洗凈外陰陰部,然然后用11%煤酚酚皂溶液液進(jìn)行消消毒,最最后用消消毒紗布布或酒精精棉球擦擦干。在洗凈或消消毒時(shí),應(yīng)應(yīng)先由陰陰門裂開開始,逐逐漸向外外擴(kuò)大。如如果準(zhǔn)備備用手臂臂檢查,洗洗滌及消消毒范圍圍應(yīng)該上上至尾根根,兩側(cè)側(cè)達(dá)到臀臀端外側(cè)側(cè)。開張器的準(zhǔn)準(zhǔn)備:先先用755%的酒酒精棉球球清毒開開張器的的內(nèi)外面面,然后后用無煙煙火焰燒燒灼消毒毒亦可用用消毒液液浸泡消消毒,然然后,用用開水沖沖去藥液液并在其其濕潤時(shí)時(shí)使用之之。(2)方法法步驟①用左手拇拇指和食食指(或或中指)開開張陰門門,以右右手轉(zhuǎn)開開張器把把柄向右右或向左左。把柄柄向右或或向左,尖尖端斜向向前上方方插入陰陰門。②當(dāng)開張器器的前11/3進(jìn)進(jìn)入陰門門后,即即改成水水平方向向插入陰陰道,同同時(shí)以順順時(shí)針或或反時(shí)針針方向放放置開張張器,使使其柄部部向下。③輕輕撐開開陰道,用用手電筒筒或反光光鏡照明明陰道,迅迅速進(jìn)行行觀察。④觀察陰道道應(yīng)特別別注意陰陰道粘膜膜的色澤澤及濕潤潤程度,子子宮頸口口是否開開張及其其開張程程度。⑤雌性動(dòng)物物未發(fā)情情時(shí),陰陰門緊縮縮,并有有皺紋,開開張器插插入有干干澀的感感覺,陰陰道粘膜膜蒼白,粘粘液呈漿漿糊狀或或很少,子子宮頸口口緊縮。2、粘液抹抹片法(1)用經(jīng)經(jīng)消毒的的開張器器擴(kuò)張陰陰道。(2)將用用生理鹽鹽水浸濕濕的消毒毒棉簽插插入陰道道,在子子宮頸外外口沾取取陰道粘粘液。(3)將沾沾取的粘粘液均勻勻地涂抹抹于載玻玻片上。待待自然干干燥后在在顯微鏡鏡下觀察察結(jié)晶花花紋。也也可用110%AgNNO3溶溶液滴于于玻片上上,待其其自然干干燥后在在顯微鏡鏡下鏡檢檢。牛的的粘液抹抹片可放放大1000倍。羊羊的放大大2000倍觀察察。(4)粘液液抹片無無花紋時(shí)時(shí),以“-”記錄;;有少量量樹枝狀狀花紋時(shí)時(shí)以“+”記錄;;有較多多花紋時(shí)時(shí)以“++”記錄;;整個(gè)視視野全部部為結(jié)晶晶花紋,以以“++++”記錄,表表示母畜畜正處發(fā)發(fā)情盛期期。(三)性欲欲表現(xiàn)1、母牛的的性欲表表現(xiàn)(1)將母母牛拴在在牛舍或或交配架架內(nèi)(樹樹上亦可可),牽牽公牛接接近母牛牛,如果果母牛發(fā)發(fā)情,則則當(dāng)試情情公牛接接近時(shí),母母牛安靜靜不動(dòng),并并彎背拱拱腰,作作交配姿姿勢。(2)為了了在大群群牛中發(fā)發(fā)現(xiàn)發(fā)情情母牛,亦亦可于母母牛逍遙遙在運(yùn)動(dòng)動(dòng)場中時(shí)時(shí),將試試情公牛牛放入牛牛群內(nèi)。由由試情公公牛在牛牛群中尋尋找發(fā)情情母牛。若若某頭母母牛發(fā)情情,則當(dāng)當(dāng)公牛爬爬跨時(shí)即即安靜不不動(dòng)。2、母羊的的性欲表表現(xiàn)發(fā)情母羊隨隨著發(fā)情情時(shí)間的的發(fā)展,表表現(xiàn)有強(qiáng)強(qiáng)烈的交交配欲,如如主動(dòng)接接近公羊羊,接受受爬跨。母母羊的發(fā)發(fā)情外部部表現(xiàn)常常常在接接近公羊羊時(shí)表現(xiàn)現(xiàn)的最為為明顯,同同時(shí),公公羊?qū)Πl(fā)發(fā)情母羊羊具有特特殊靈敏敏的識別別能力,因因此在生生產(chǎn)實(shí)踐踐中,常常常采用用公羊試試情。3、母豬的的性欲表表現(xiàn)發(fā)情母豬當(dāng)當(dāng)聽到公公豬叫聲聲,則四四處張望望,當(dāng)公公豬接近近時(shí),頓頓時(shí)變得得溫順安安靜,接接受公豬豬交配。發(fā)發(fā)情鑒定定時(shí)常采采用一種種“止動(dòng)反反射”視察,即即用手按按壓發(fā)情情母豬背背部時(shí),母母豬站立立不動(dòng)尾尾翹起凹凹腰拱背背,向前前推動(dòng),不不僅不逃逃脫反而而有抵抗抗的反作作用力,將將這種現(xiàn)現(xiàn)象也可可以作為為一種性性欲表現(xiàn)現(xiàn)。(四)腹腔腔鏡法通過腹腔鏡鏡觀察到到,排卵卵前卵巢巢體積達(dá)達(dá)到最大大,系膜膜內(nèi)的血血管很粗粗。卵泡泡呈球狀狀突出于于卵巢表表面。卵卵泡壁很很薄,卵卵泡內(nèi)充充滿半透透亮的暗暗紅色的的卵泡液液。排卵卵前約112小時(shí)時(shí),卵泡泡壁開始始變薄,卵卵泡顏色色變淡稍稍白。排排卵前約約5~77小時(shí),卵卵泡壁進(jìn)進(jìn)一步變變薄,出出現(xiàn)較細(xì)細(xì)的血管管網(wǎng)。排排卵前22~3小小時(shí),卵卵泡壁中中央部血血管變粗粗呈樹枝枝狀,卵卵泡進(jìn)一一步增大大。排卵卵前約11.5小小時(shí),卵卵泡中央央部的血血管崩解解,血液液外溢,血血管形態(tài)態(tài)模糊,卵卵泡壁染染紅。約約1小時(shí)時(shí)后可見見卵泡壁壁頂端變變薄,隨隨后外膜膜崩解,出出現(xiàn)小孔孔,卵泡泡內(nèi)膜和和卵泡液液從小孔孔中突出出,形成成一透明明的小乳乳突,數(shù)數(shù)分鐘后后乳突破破裂,外外膜孔擴(kuò)擴(kuò)大,卵卵泡液隨隨之流出出,排卵卵結(jié)束。四、作業(yè)
試述述就觀察察到的母母牛、母母羊和母母豬有哪哪些發(fā)情情表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)十
母牛的的直腸檢檢查一、實(shí)驗(yàn)?zāi)磕康氖煜つ概B崖殉病⒆幼訉m、子子宮頸的的自然位位置、大大小、形形狀、質(zhì)質(zhì)地和相相互關(guān)系系,掌握握直腸檢檢查的基基本操作作方法,為為在生產(chǎn)產(chǎn)實(shí)踐中中鑒定母母牛發(fā)情情狀態(tài)、妊妊娠診斷斷和檢查查卵巢子子宮疾病病奠定基基礎(chǔ)。二、實(shí)驗(yàn)材材料空懷和妊娠娠母牛、搪搪瓷盆、肥肥皂、毛毛巾等。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)內(nèi)容(一)直腸腸檢查前前的準(zhǔn)備備工作1、將母牛牛保定于于六柱欄欄中,尾尾巴拉向向一側(cè),清清洗陰戶戶。2、檢查人人剪去指指甲并挫挫圓,以以防損傷傷腸壁,手手臂清洗洗涂抹肥肥皂以滑滑潤。(二)直腸腸檢查的的方法1、檢查者者站于母母牛身后后,手成成錐形,輕輕輕插入入直腸,緩緩緩向里里推進(jìn)。2、手伸入入直腸后后,如有有宿糞可可用手指指擴(kuò)張肛肛門,使使空氣進(jìn)進(jìn)入,促促進(jìn)宿糞糞排出,如如未排出出,可用用手輕輕輕地少量量而多次次地掏出出,以排排盡宿糞糞。3、手伸入入直腸達(dá)達(dá)骨盆腔腔中部,將將手掌展展平向下下壓腸壁壁,可觸觸摸到一一個(gè)質(zhì)地地堅(jiān)實(shí)較較硬的子子宮頸,用用拇指、中中指和無無名指握握住子宮宮頸。4、沿子宮宮頸向前前觸摸,在在子宮體體的前下下方有一一縱行的的凹溝,即即子宮間間溝。5、再向前前觸摸,可可摸到分分叉的圓圓柱狀即即為一對對子宮角角,沿子子宮角大大彎向外外側(cè)下行行,即可可摸到呈呈扁圓形形,柔軟軟而有彈彈性的卵卵巢。(三)觸摸摸卵巢上上卵泡的的發(fā)育狀狀況1、卵泡出出現(xiàn)期::卵巢稍稍增大,卵卵泡直徑徑0.55-0..75ccm,觸觸摸時(shí)為為軟化點(diǎn)點(diǎn),波動(dòng)動(dòng)不明顯顯,這時(shí)時(shí)牛已開開始發(fā)情情。2、卵泡發(fā)發(fā)育期::卵泡增增大到11—1.55cm波動(dòng)明明顯,此此期后期期發(fā)情已已不大明明顯。3、卵泡成成熟期::卵泡壁壁變薄,緊緊張性增增強(qiáng),有有一觸即即破之感感。4、排卵期期:卵泡泡破裂排排卵,卵卵泡液流流失成一一小凹陷陷,排卵卵后5——8h黃黃體開始始生成。母牛發(fā)情時(shí)時(shí)間持續(xù)續(xù)為100-244h,排排卵前66-244h內(nèi)輸輸精受胎胎率最高高。(四)母牛牛妊娠診診斷主要要觸摸以以下項(xiàng)目目1、子宮角角的位置置、質(zhì)地地、形狀狀、大小小和對稱稱程度。2、卵巢的的大小、形形狀、質(zhì)質(zhì)地和有有無黃體體。3、可否摸摸到子宮宮體、子子宮、胎胎盤以及及胎盤的的大小。4、有無漂漂浮的胎胎兒及胎胎兒活動(dòng)動(dòng)狀況。5、子宮內(nèi)內(nèi)液體的的性狀。6、子宮動(dòng)動(dòng)脈的粗粗細(xì)及有有無妊娠娠脈博。
實(shí)驗(yàn)十一
動(dòng)物物的采精精與輸精精
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)磕康牧私獠删⑤斴斁某坛绦蚝筒俨僮饕I(lǐng)領(lǐng),掌握握動(dòng)物的的采精、輸輸精方法法。二、實(shí)驗(yàn)材材料公畜、臺畜畜、采精精架、假假陰道、乳乳膠手套套、長柄柄鉗子、瓷瓷盤、集集精瓶、貯貯精瓶、電電刺激采采精器;;母畜、陰道道開張器器、輸精精器、卡卡蘇槍、輸輸精膠管管、注射射器、內(nèi)內(nèi)窺鏡、光光源燈、氧氧氣瓶、熱熱水桶、水水浴鍋、干干燥箱、消消毒桶、固固定架;;酒精棉球、凡凡士林、滅滅菌紗布布、溫度度計(jì)。三、采精方方法(一)公牛牛的假陰陰道采精精1、將臺畜畜保定于于交配架架內(nèi),尾尾部用繩繩子向前前系于左左側(cè)。2、用溫水水將母牛牛外陰道道用周圍圍洗滌干干凈,并并用清潔潔紗布抹抹干。3、采精員員右手持持假陰道道,立于于公牛右右側(cè)準(zhǔn)備備采精。4、采精前前,須對對公牛進(jìn)進(jìn)行適當(dāng)當(dāng)?shù)目刂浦疲匾獣r(shí)可作作數(shù)次空空爬,以以增強(qiáng)性性欲和增增加采精精量,直直到公牛牛陰莖充充分勃起起,排出出少量分分泌液時(shí)時(shí)才令其其爬跨。5、當(dāng)公牛牛爬跨時(shí)時(shí),采精精員將假假陰道口口對準(zhǔn)公公牛陰莖莖伸出方方向。假假陰道的的方向與與陰莖自自然方向向一致,約約與水平平線呈335°角,當(dāng)當(dāng)公牛陰陰莖進(jìn)入入假陰道道后,后后軀向前前強(qiáng)烈地地聳跳即即為射精精6、射精完完畢,將將假陰道道的集精精杯端向向下傾斜斜,同時(shí)時(shí)隨公牛牛向下,慢慢慢讓其其陰莖自自然脫出出。7、打開活活塞,放放出空氣氣和部分分溫水,使使精液完完全流入入集精杯杯,回到到室內(nèi)取取下集精精杯。進(jìn)進(jìn)行精液液品質(zhì)檢檢查,并并進(jìn)行稀稀釋保存存。8、假陰道道、集精精杯等用用過后應(yīng)應(yīng)清洗消消毒,以以備下次次使用。(二)公豬豬的手握握法采精精公豬一般使使用采精精臺采精精,要注注意采精精臺的高高低,檢檢查牢固固與否,有有無尖利利物,以以防公豬豬爬跨時(shí)時(shí)跌傷或或刺傷,公公豬采精精對溫度度,壓力力潤滑度度要求不不高,目目前普遍遍采用手手握法采采精。1、采精員員一只手手帶乳膠膠手套,一一只手拿拿集精杯杯(冬天天最好是是保溫杯杯)并在在集精杯杯口扎上上雙層消消毒紗布布,以過過濾精液液,除去去膠質(zhì)。2、待公豬豬爬跨時(shí)時(shí),采精精員蹲于于采精臺臺右側(cè),當(dāng)當(dāng)公豬陰陰莖伸出出時(shí),用用帶手套套的手握握住螺旋旋狀陰莖莖頭不讓讓轉(zhuǎn)動(dòng),同同時(shí)手指指繼續(xù)有有節(jié)奏的的一松一一緊地加加壓,即即可引起起公豬射射精。3、公豬俯俯伏在采采精臺上上不動(dòng),表表示開始始射精,立立即用集集精杯收收集精液液。公豬豬射精時(shí)時(shí)手指停停止加壓壓,射精精稍停時(shí)時(shí),手指指繼續(xù)加加壓,直直至采完完全部精精液。4、棄去膠膠質(zhì)部分分,于室室內(nèi)進(jìn)行行精液品品質(zhì)檢查查,并進(jìn)進(jìn)行稀釋釋保存。
四、輸精方方法(一)輸精精前的準(zhǔn)準(zhǔn)備工作作1、輸精器器械的清清洗消毒毒:金屬屬開張器器先以火火焰消毒毒,再以以75%%酒精棉棉球消毒毒,輸精精器用蒸蒸煮消毒毒或755%酒精精消毒,再再以生理理鹽水沖沖洗2--3次。2、做好母母畜發(fā)情情鑒定,檢檢查有無無生殖器器官疾病病。3、檢查精精液品質(zhì)質(zhì):鮮精精必須活活力在00.6——0.77以上,凍凍精活力力必須在在0.33以上才才能用于于輸精。(二)各種種家畜的的輸精方方法1、母牛的的輸精將母牛保定定在配種種架或牛牛床頸枷枷上,把把尾拉向向一側(cè),用用溫水洗洗滌外陰陰部并擦擦干。母母牛輸精精有陰道道開張器器法和直直腸把握握法二種種,后法法須一定定技術(shù),但但受胎率率高。陰道開張器器法:輸輸精時(shí),陰陰道開張張器保持持25--30°°,涂抹抹少量潤潤滑劑。一一手持開開張器打打開陰道道,找到到子宮頸頸外口,另另一手將將事先吸吸有精液液的輸精精器尖端端插入子子宮頸口口內(nèi)1--2cmm深處,徐徐徐將精精液注入入,輸精精量一般般為1--2mll。輸精精完畢,小小心取出出輸精器器和開張張器,壓壓其背部部以防母母牛拱背背使精液液倒流。直腸把握法法:左手手伸入直直腸排除除直腸中中糞便,握握住子宮宮頸,右右手將吸吸有精液液的輸精精管從陰陰門斜上上方插入入陰道,而而后水平平插入直直抵子宮宮頸外口口,兩手手協(xié)同作作用背將將輸精器器插入子子宮頸內(nèi)內(nèi),或至至子宮再再徐徐注注入精液液。2、母羊的的輸精
基本與母牛牛的開張張器法相相同。首首先保定定母羊,保保定人員員將母羊羊尾向上上拉起,輸輸精員用用開張器器打開陰陰道,找找到子宮宮頸外口口,而后后把吸有有精液的的輸精器器沿開張張器插入入子宮頸頸口0..5—1.00cm,緩緩緩注入入精液,母母羊輸精精量一般般為0..05--0.11ml,不超過過0.22ml,輸輸精完畢畢,小心心取出輸輸精器和和開張器器在羊腰腰背部拍拍一下,以以防精液液倒流。母羊也可采采用腹腔腔鏡法輸輸精。首首先在下下腹正中中線的左左側(cè)用77毫米的的套管和和探針打打一孔,充充氣后放放入窺鏡鏡管;在在下腹正正中線的的右側(cè)插插進(jìn)一個(gè)個(gè)5毫米米的套管管和探針針,用于于尋找子子宮角。找找到子宮宮角后由由5毫米米套管抽抽出探針針,插入入吸管(先先抽3毫毫升的氣氣體,然然后吸取取所需精精液)把把吸管尖尖插進(jìn)一一側(cè)子宮宮角,用用注射器器注進(jìn)精精液。抽抽出吸管管,然后后在另一一側(cè)子宮宮角重復(fù)復(fù)上述過過程,再再輸一次次,這樣樣可大大大提高受受精率。注注意輸完完精取套套管前先先放氣。3、母豬的的輸精發(fā)情母豬輸輸精可在在圈內(nèi)站站立,將將豬用橡橡膠輸精精管輕輕輕從陰門門插入陰陰道,左左右旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)前后轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)動(dòng)直至至子宮頸頸深部,這這時(shí)將裝裝有精液液的注射射器接上上橡膠輸輸精管,將將精液徐徐徐注入入子宮內(nèi)內(nèi),母豬豬輸精量量一般為為25--40mml,輸輸精完畢畢,輕輕輕抽出輸輸精管,在在母豬背背上用力力一壓,以以減少精精液倒流流。五、作業(yè)::1、簡述牛牛的采精精過程2、寫出母母牛、母母豬輸精精的特點(diǎn)點(diǎn),怎樣樣輸精才才能提高高受胎率率?
實(shí)驗(yàn)十二
動(dòng)物物的胚胎胎觀察與與鑒定
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)磕康耐ㄟ^實(shí)習(xí),熟熟悉動(dòng)物物卵子的的形態(tài)結(jié)結(jié)構(gòu),初初步區(qū)分分正常和和非正常常的胚胎胎,練習(xí)習(xí)掌握觀觀察胚胎胎技術(shù),為為掌握胚胚胎移植植技術(shù)打打下基礎(chǔ)礎(chǔ)。二、實(shí)驗(yàn)材材料1、各種動(dòng)動(dòng)物的卵卵子及牛牛、羊、免免卵子標(biāo)標(biāo)本。2、正常胚胚胎和非非正常胚胚胎。3、器械::(1)體視視變倍顯顯微鏡、普普通顯微微鏡(2)表面面皿、吸吸卵滴管管、撥卵卵針、凹凹載玻片片10--20個(gè)個(gè)。(3)集卵卵杯、小小燒杯等等。三、實(shí)驗(yàn)步步驟將盛有卵子子保存液液的表面面皿置110倍鏡鏡下檢查查,找到到卵子后后用吸管管(先將將吸管擠擠出少量量氣體后后,對準(zhǔn)準(zhǔn)卵子吸吸入)吸吸取卵子子,放入入凹載玻玻片的凹凹窩內(nèi),用用鋼筆在在載玻片片背面將將卵子劃劃一圓圈圈,置1100倍倍顯微鏡鏡下,觀觀察卵子子的形態(tài)態(tài),或在在變倍顯顯微鏡下下直接觀觀察。1、觀察正正常卵子子形態(tài)動(dòng)物的卵子子多呈圓圓球形,內(nèi)內(nèi)含有一一個(gè)球形形核,核核內(nèi)有11—2個(gè)核核仁,細(xì)細(xì)胞質(zhì)含含量豐富富,其中中貯存有有卵物質(zhì)質(zhì),和一一般生物物細(xì)胞一一樣也含含有線粒粒體和內(nèi)內(nèi)網(wǎng)器,細(xì)細(xì)胞膜很很薄,通通常稱為為卵黃膜膜。動(dòng)物物的卵子子,卵黃黃含量較較少且分分布均勻勻,故屬屬少黃均均質(zhì)卵黃黃,排出出卵子的的大小,直直徑變動(dòng)動(dòng)在800-2000uum之間間,如馬馬為1220—1800um,牛牛為1220—1600um,綿綿羊?yàn)?140——1855um,豬豬為1220—1700um,實(shí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物物海豚鼠鼠為877—1077um,兔兔為1110—1466um。因動(dòng)物種類類不同,卵卵細(xì)胞質(zhì)質(zhì)內(nèi)所含含卵黃素素顆粒和和脂滴的的量不同同,因此此卵的外外觀也有有差異。如如山羊、綿綿羊、兔兔的卵子子卵黃顆顆粒細(xì),分分布均勻勻,脂滴滴含量少少,因而而細(xì)胞較較明亮,而而馬、牛牛和豬的的卵子所所含脂滴滴量多,其其折光性性強(qiáng),因因而細(xì)胞胞質(zhì)呈黑黑塊狀,但但也有人人認(rèn)為牛牛的脂滴滴含量不不多,卵卵細(xì)胞質(zhì)質(zhì)不如馬馬和豬的的深。動(dòng)物新排出出的卵子子,在卵卵黃膜外外,還具具有透明明帶和放放射冠兩兩種結(jié)構(gòu)構(gòu)。透明帶由卵卵泡上皮皮分泌而而來,包包在卵黃黃膜外,卵卵在進(jìn)行行第一次次成熟分分裂之后后,排出出第一極極體,卵卵細(xì)胞質(zhì)質(zhì)收縮,于于是在卵卵黃膜和和透明帶帶之間出出現(xiàn)了一一個(gè)很小小的裂隙隙,稱卵卵周隙或或圍卵腔腔,如卵卵繼續(xù)進(jìn)進(jìn)行第二二次成熟熟分裂,則則排出第第二極體體,兩者者均存在在于卵周周隙中。細(xì)細(xì)胞質(zhì)進(jìn)進(jìn)一步收收縮,卵卵黃周隙隙就進(jìn)一一步擴(kuò)大大。透明帶是一一種透明明、均質(zhì)質(zhì)的半透透性膜。屬屬粘多糖糖蛋白,含含有透明明質(zhì)酸,它它有彈性性,用針針很難刺刺入。卵卵子受精精后,在在卵裂、桑桑椹胎和和囊胚早早期,透透明帶明明顯,它它可作為為輸送營營養(yǎng)的通通路,并并對卵子子和幼嫩嫩的早期期胚胎有有保護(hù)的的功能。故故胚胎移移植時(shí)要要求透明明帶必須須是完整整無損的的。不同動(dòng)物的的卵子透透明帶的的的厚度度也不同同,牛為為12——15uum,兔兔卵在透透明帶外外。鼠類類及貓、狗狗等動(dòng)物物,可見見有發(fā)達(dá)達(dá)的放射射冠,而而馬、牛牛、羊、豬豬等動(dòng)物物在排卵卵后不久久,放射射冠即消消失,也也有報(bào)導(dǎo)導(dǎo)牛在排排卵后99—14小小時(shí)之內(nèi)內(nèi)放射冠冠即脫落落。豬在在誘發(fā)排排卵時(shí),受受精之后后透明帶帶仍繼續(xù)續(xù)存在。2、受精卵卵的鑒別別不同的動(dòng)物物,從卵卵巢中排排出的卵卵子成熟熟程度不不同,馬馬、驢和和狗,在在第一次次成熟分分裂沒有有完成時(shí)時(shí)排出。牛牛、綿羊羊、山羊羊和豬則則在第二二次成熟熟分裂的的中期排排出。第第一極體體大多消消失早,排排卵后即即已不見見,如果果受精卵卵最后完完成成熟熟,放出出第二極極體。在胚胎移殖殖技術(shù)中中鑒別卵卵子是否否受精是是決定著著移植成成功的第第一關(guān)鍵鍵,有兩兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)可供參參考,一一是第二二極體的的出現(xiàn)(但但有人報(bào)報(bào)道冷刺刺激可使使非受精精卵排出出第二極極體);;二是卵卵周隙的的擴(kuò)大,從從實(shí)踐中中來看,兩兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)不甚明明顯,特特別是第第二極體體不易見見到,并并難于與與第一極極體相區(qū)區(qū)別。另另外,如如果卵未未受精,則則卵子細(xì)細(xì)胞質(zhì)碎碎裂為許許多(22—20)大大小不同同的碎塊塊,每一一塊中含含有核的的碎塊。有有時(shí)這種種碎裂的的卵子與與受精卵卵的正常常卵裂十十分相似似,這時(shí)時(shí)要和同同一批卵卵相比較較,否則則難于正正確判斷斷。3、畸型的的未受精精卵和受受精卵由于卵細(xì)胞胞成熟過過程不正正?;虍惍惓-h(huán)境境因素的的影響,而而發(fā)生畸畸型卵如如小卵、巨巨卵、橢橢圓卵、扁扁形卵、透透明帶破破裂,帶帶有大極極體或細(xì)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)內(nèi)有大空空泡等。這這些卵均均不適宜宜作移植植用。四、作業(yè)將你觀察到到的正常常受精卵卵及未受受精卵、畸畸形卵繪繪圖說明明。
實(shí)驗(yàn)十三
牛、羊羊的胚胎胎移植
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)磕康耐ㄟ^應(yīng)用激激素對牛牛、羊進(jìn)進(jìn)行超數(shù)數(shù)排卵及及同期發(fā)發(fā)情處理理,以及及胚胎移移植全過過程的觀觀察,了了解動(dòng)物物胚胎移移植的程程序,主主要技術(shù)術(shù)環(huán)節(jié)操操作要領(lǐng)領(lǐng)。二、實(shí)驗(yàn)材材料1、選擇健健康、營營養(yǎng)良好好、無繁繁殖疾病病、生殖殖功能正正常的母母牛,或或母羊,做做供體牛牛(羊)受受體牛(羊羊)。2、藥品::PMSSG、FFSH、LLH、PPGF22α、靜松松靈注射射液、普普魯卡因因注射液液、PBBS、抗抗菌素等等。3、器械::子宮擴(kuò)擴(kuò)張棒、二二路沖卵卵器、注注射器、輸輸卵器、卡卡蘇槍、解解剖鏡、腹腹腔鏡、集集卵瓶、檢檢卵杯、吸吸卵管、羊羊手術(shù)臺臺(2個(gè)個(gè))、手手術(shù)刀、剪剪、鑷子子、創(chuàng)布布、縫合合針等兩兩套。三、實(shí)驗(yàn)方方法(一)牛的的非手術(shù)術(shù)法胚胎胎移植與與超數(shù)排排卵處理理受體牛胚胎胎移植前前第6天天注射PPMSGG5000—8000IU,前前3—4天注注射PGGF2αα1-22mg(子子宮灌注注法)。供體牛性周周期的第第11天天,肌注注PMSSG30000--40000IUU,第113天肌肌肉注射射PGFF2α20--30mmg,促促使黃體體退化,第第15天天供體牛牛發(fā)情(此此天為00天)間間隔8--12小小時(shí)輸精精2-33次,第第7天收收集胚胎胎。或用FSHH在供體體手性周周期的第第11--14天天每日上上午8時(shí)時(shí)下午55時(shí)各肌肌肉注射射FSHH50IIU,總總劑量4400IIU,第第13天天注射PPGF22α20--30mmg,
第155天供體體牛發(fā)情情。以后后處理同同第一種種方法,在在第一次次輸精同同時(shí)注射射LH1600IU,共共輸精33次。2、胚胎的的收集(采采卵)①供體牛在在直檢架架內(nèi)保定定,用繩繩纏尾拉拉向一側(cè)側(cè),排出出直腸內(nèi)內(nèi)的宿糞糞,清洗洗陰戶周周圍。②肌肉注射射靜松靈靈3-55ml作作鎮(zhèn)靜。③2%普魯魯卡因注注射液44ml作作尾椎硬硬膜外局局部麻醉醉,以松松馳子宮宮頸環(huán)肌肌。④組裝沖卵卵集卵的的裝置,準(zhǔn)準(zhǔn)備10000mml沖卵卵液加溫溫到388℃?zhèn)溆谩"菔褂米訉m宮擴(kuò)張棒棒擴(kuò)張子子宮頸口口。⑥將帶有通通心鋼絲絲的采卵卵軟管插插入子宮宮角。⑦沖氣200ml,使使沖卵管管固定于于子宮基基部。⑧用1000ml注注射器及及取388℃的沖卵卵液400-600ml,注注入子宮宮角,再再回收沖沖卵液,反反復(fù)沖洗洗,一側(cè)側(cè)子宮角角總計(jì)用用沖卵液液50mml,一一側(cè)子宮宮角沖完完,以同同樣方法法沖洗另另一側(cè)子子宮角,二二側(cè)沖完完,向子子宮的內(nèi)內(nèi)注入抗抗菌藥物物。3、胚胎的的檢查(檢檢卵)①將盛有沖沖卵回收收液的集集卵管靜靜置100-200minn,然后后從集卵卵管下端端放液于于檢卵標(biāo)標(biāo),置于于解剖鏡鏡下觀察察,以110-440倍仔仔細(xì)將胚胚胎檢出出,放入入盛有移移卵液的的凹面培培養(yǎng)皿內(nèi)內(nèi),仔細(xì)細(xì)觀察胚胚胎的形形態(tài)和發(fā)發(fā)育情況況。②收集外形形整齊,大大小一致致,卵裂裂球分裂裂均勻,外外膜完整整的清晰晰明亮的的桑椹胚胚或適宜宜胚期的的胚胎,吸吸入塑料料細(xì)管內(nèi)內(nèi)(用五五段法::移卵液液—空氣—含有移移卵液的的胚胎——空氣—移放液液)再將將細(xì)管放放入輸卵卵器中4、胚胎的的移植(授授卵)。①選擇同期期發(fā)情處處理的與與供體牛牛相一致致的母牛牛做受體體。②按常規(guī)輸輸精法,將將輸卵器器插入宮宮頸,并并深入黃黃體側(cè)子子宮角,將將胚胎移移入。(二)羊的的手術(shù)法法胚胎移移植操作作1、同期發(fā)發(fā)情與超超數(shù)排卵卵處理受體羊于胚胚胎移植植前7天天注射PPGF22α2mgg,移植植前6天天注射FFSH550IIU每天天試情并并記載發(fā)發(fā)情開始始及結(jié)束束時(shí)間。供體羊在發(fā)發(fā)情周期期第166天開始始注射FFSH1000IU,每每天一次次,共三三次,并并在第117天注注射PGGF2αα2mgg,供體體羊發(fā)情情結(jié)束配配種,并并注射LLH1150IIU,配配種2--3次,每每天上午午、下午午試情配配種,配配種開始始后第四四天手術(shù)術(shù)胚胎移移植。2、胚胎收收集由于山羊無無法進(jìn)行行直腸檢檢查,手手術(shù)前應(yīng)應(yīng)用腹腔腔鏡技術(shù)術(shù)檢查供供體和受受體的卵卵巢和子子宮,棄棄除那些些不適宜宜手術(shù)的的羊只,卵卵巢上有有正常黃黃體者,手手術(shù)時(shí)直直接將胚胚胎移植植于該側(cè)側(cè)子宮角角,不需需再檢查查卵巢,這這樣不僅僅可縮短短手術(shù)過過程,減減少手術(shù)術(shù)創(chuàng)口污污染的機(jī)機(jī)會,更更重要的的是可避避免牽拉拉及檢查查卵巢時(shí)時(shí)可能造造成的卵卵巢及黃黃體的
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