定量分析方法概述

第四章

藥典中常見定量分析方法概述

藥物的定量分析是指準(zhǔn)確測定藥品有效成分或指標(biāo)性成分的含量。

它是評價(jià)藥品質(zhì)量、判斷藥物優(yōu)劣的重要手段。

對藥物進(jìn)行定量分析時(shí)，應(yīng)按藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測定。藥物定量分析可選用化學(xué)分析法和儀器分析法。

化學(xué)測定法儀器測定法重量分析法容量分析法：滴定法，準(zhǔn)確，RSD≤0.2%，專屬性差，適用于化學(xué)原料藥光學(xué)分析法：紫外-可見分光光度法最常用，靈敏度高，準(zhǔn)確度高色譜分析法：高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）最多電化學(xué)分析法滴定分析法紫外可見分光光度法色譜分析法分析方法的驗(yàn)證定量分析有關(guān)計(jì)算第一節(jié)

滴定分析法一、基本原理及特點(diǎn)

滴定分析法是將一種已知準(zhǔn)確濃度的溶液（滴定液）滴加到待測物質(zhì)的溶液中，直到化學(xué)反應(yīng)按計(jì)量關(guān)系完全作用為止，然后根據(jù)所用滴定液的濃度和體積計(jì)算出待測物質(zhì)含量的一種分析方法，又稱“容量分析法”。一、基本原理及特點(diǎn)

沉淀、配位滴定非水滴定氧化還原酸堿滴定原料藥純度達(dá)到98.5%以上時(shí)首選容量分析法二、應(yīng)用與實(shí)例

（一）酸堿滴定法1.直接滴定法適用范圍：C·Ka≥10-8的弱酸、C·Kb≥10-8的弱堿終點(diǎn)：指示劑變色2.剩余滴定法適用范圍：藥物難溶于水或有其他原因不宜采用直接滴定法二、應(yīng)用與實(shí)例

（一）酸堿滴定法實(shí)例一布洛芬含量測定—直接滴定法溶劑：中性乙醇（對酚酞顯中性）指示劑：酚酞滴定液：氫氧化鈉（0.1mol/L）滴定度（T）：每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于20.63mg的C13H18O2羧基酸性二、應(yīng)用與實(shí)例

（一）酸堿滴定法實(shí)例二氯貝丁酯含量測定—剩余滴定法溶劑：中性乙醇水解溶液：定過量氫氧化鈉溶液（0.5mol/L）指示劑：酚酞滴定液：鹽酸滴定液（0.5mol/L）滴定度：每1ml氫氧化鉀（鈉）滴定液（0.5mol/L）相當(dāng)于121.4mg的C12H15ClO3先水解再回滴二、應(yīng)用與實(shí)例

（一）酸堿滴定法實(shí)例三丙戊酸鈉含量測定—直接滴定，電位滴定法溶劑：水+乙醚指示終點(diǎn)：電位法滴定液：鹽酸滴定液（0.1mol/L）滴定度：每lml鹽酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于16.62mg的C8H15NaO2二、應(yīng)用與實(shí)例

（二）非水溶液滴定法溶劑：非水介質(zhì)非水堿量法：有機(jī)堿及其氫鹵酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽或有機(jī)酸鹽、以及有機(jī)酸堿金屬鹽類滴定液：高氯酸滴定液（0.1mol/L）溶劑：冰醋酸二、應(yīng)用與實(shí)例

（二）非水溶液滴定法1.有機(jī)弱堿Kb≥10-10：冰醋酸介質(zhì)Kb＜10-10：冰醋酸-醋酐的混合溶液為介質(zhì)，且隨著醋酐用量的增加，滴定范圍顯著增大2.有機(jī)酸堿金屬鹽的滴定：高氯酸滴定液直接滴定二、應(yīng)用與實(shí)例

（二）非水溶液滴定法3.有機(jī)堿的氫鹵酸鹽：3～5ml醋酸汞冰醋酸溶液4.有機(jī)堿的硫酸鹽：只能滴定至HSO4-的程度5.有機(jī)堿的硝酸鹽：電位法指示終點(diǎn)6.有機(jī)堿的有機(jī)酸鹽：冰醋酸或冰醋酸-醋酐的混合溶劑，結(jié)晶紫為指示劑，高氯酸為滴定液二、應(yīng)用與實(shí)例

（二）非水溶液滴定法實(shí)例鹽酸可樂定含量測定溶劑：冰醋酸+醋酸汞滴定液：高氯酸滴定液（0.1mol/L）指示劑：結(jié)晶紫滴定終點(diǎn)：藍(lán)綠色滴定度：每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于26.66mg的C9H9Cl2N3?HCl。有機(jī)堿氫鹵酸鹽二、應(yīng)用與實(shí)例

（三）氧化還原滴定法1.碘量法（1）基本原理滴定液：碘滴定液直接碘量法剩余碘量法置換碘量法指示劑：淀粉定過量碘滴定液滴定液：硫代硫酸鈉用于強(qiáng)氧化劑測定KI+硫代硫酸鈉碘量法二、應(yīng)用與實(shí)例

（三）氧化還原滴定法1.碘量法（2）應(yīng)用

實(shí)例一安乃近片含量測定—直接碘量法溶劑：乙醇與0.01mol/L鹽酸溶液滴定液：碘滴定液（0.05mol/L）終點(diǎn)：淺黃色（或帶紫色）在30秒鐘內(nèi)不褪滴定度：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于17.57mg的C13H16N3NaO4S?H2O二、應(yīng)用與實(shí)例

（三）氧化還原滴定法1.碘量法（2）應(yīng)用

實(shí)例二右旋糖酐20葡萄糖注射液中葡萄糖的含量測定—剩余碘量法溶劑：定過量（0.05mol/L）碘滴定液滴定液：硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）指示劑：淀粉，近終點(diǎn)加入，滴定至藍(lán)色消失滴定度：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于9.909mg的C6H12O6?H2O二、應(yīng)用與實(shí)例

（三）氧化還原滴定法2.亞硝酸鈉滴定法（1）基本原理二、應(yīng)用與實(shí)例

（三）氧化還原滴定法2.亞硝酸鈉滴定法（2）應(yīng)用加入過量的鹽酸在室溫條件（10～30℃）下滴定滴定時(shí)加入溴化鉀作為催化劑二、應(yīng)用與實(shí)例

（三）氧化還原滴定法2.亞硝酸鈉滴定法（2）應(yīng)用滴定的方式：一次性加入大部分指示終點(diǎn)的方法：永停滴定法二、應(yīng)用與實(shí)例

（三）氧化還原滴定法2.亞硝酸鈉滴定法（2）應(yīng)用實(shí)例鹽酸克侖特羅含量測定溶劑：鹽酸溶液（1→2）滴定液：亞硝酸鈉滴定液（0.05mol/L）滴定度：每lml亞硝酸鈉滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于15.68mg的C12H18Cl2N2O·HCI芳香第一胺第二節(jié)

紫外-可見分光光度法分光光度法是通過測定物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法朗伯-比爾定律：單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時(shí)，在一定的濃度范圍內(nèi)被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度成正比一、基本原理

朗伯-比爾定律一、基本原理

百分吸收系數(shù)：在一定波長下，溶液濃度為1%（g/ml），液層厚度為1cm時(shí)的吸光度數(shù)值為100ml溶液中所含被測物質(zhì)的重量（按干燥品或無水物計(jì)算）（g）液層厚度，cm含有共軛體系、芳香環(huán)等發(fā)色基團(tuán)，均可在紫外區(qū)（200～400nm）或可見光區(qū)（400～760nm）產(chǎn)生吸收藥物在可見光區(qū)若無吸收，但在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理顯色后，能對可見光產(chǎn)生吸收。二、應(yīng)用

空白對照：配制供試品溶液的同批溶劑檢測波長：最大吸收波長吸光度數(shù)值：0.3~0.7123二、應(yīng)用

（一）測定方法1.對照品比較法二、應(yīng)用為供試品溶液的濃度為供試品溶液的吸光度為對照品溶液的濃度為對照品溶液的吸光度2.吸收系數(shù)法在規(guī)定的波長處測定其吸光度，以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量3.比色法供試品本身在紫外-可見區(qū)沒有強(qiáng)吸收，或在紫外區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度，可加入適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色后測定二、應(yīng)用4.標(biāo)準(zhǔn)曲線法以吸光度與相應(yīng)的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)供試品的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得其相應(yīng)的濃度，并求出其含量二、應(yīng)用（二）儀器的校正和檢定二、應(yīng)用光源單色器吸收池檢測器（二）儀器的校正和檢定1.波長：常用汞燈中的較強(qiáng)譜線、氘燈的譜線、鈥玻璃尖銳吸收峰、高氯酸鈥溶液2.吸光度的準(zhǔn)確度：重鉻酸鉀的硫酸溶液二、應(yīng)用（二）儀器的校正和檢定3.雜散光的檢查二、應(yīng)用（三）對溶劑的要求含有雜原子的有機(jī)溶劑，使用范圍不能小于截止使用波長二、應(yīng)用三、實(shí)例（一）奧沙西泮片含量測定20片，精密稱定研細(xì)片粉，W200ml量瓶150ml甲醇奧沙西泮溶解定容，搖勻過濾5ml續(xù)濾液100ml量瓶乙醇稀釋，定容UV檢測波長：229nm吸收系數(shù)：1252吸收系數(shù)法三、實(shí)例（二）呋喃唑酮含量測定約20mg，精密稱定研細(xì)250ml量瓶+40ml二甲基甲酰紫溶解定容精密量取10ml100ml量瓶水定容對照品：呋喃唑酮檢測波長：367nm對照品比較第三節(jié)

色譜分析法在《中國藥典》現(xiàn)行版中，使用的色譜法有高效液相色譜法、氣相色譜法、離子色譜、凝膠色譜等

一、高效液相色譜法（一）基本原理一、高效液相色譜法（二）應(yīng)用1.對儀器的一般要求(1)色譜柱反相：十八烷基硅烷鍵合硅膠正相：硅膠離子交換：離子交換填充劑分子排阻：凝膠或高分子多孔微球C18硅膠表面填料直徑15nm以下＜2000＞2000樣品分子量一、高效液相色譜法填料直徑30nm以上溫度要求：≤40℃流動相pH：2~8一、高效液相色譜法（二）應(yīng)用1.對儀器的一般要求(2)檢測器二極管陣列檢測器熒光檢測器蒸發(fā)光散射檢測器123示差折光檢測器電化學(xué)檢測器質(zhì)譜檢測器456一、高效液相色譜法（二）應(yīng)用1.對儀器的一般要求(3)流動相甲醇-水乙腈-水盡可能少用含有緩沖液的流動相一、高效液相色譜法（二）應(yīng)用2.高效液相色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（1）色譜柱的理論板數(shù)（n）

一、高效液相色譜法（二）應(yīng)用2.高效液相色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（2）分離度（R）

除另有規(guī)定外，定量分析時(shí)分離度應(yīng)大于1.5一、高效液相色譜法（二）應(yīng)用2.高效液相色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（3）重復(fù)性（R）

連續(xù)進(jìn)樣，峰面積，RSD≯2.0%一、高效液相色譜法（二）應(yīng)用2.高效液相色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（4）拖尾因子（T）T：0.95～1.05一、高效液相色譜法（二）應(yīng)用3.測定方法（1）內(nèi)標(biāo)法對照品+內(nèi)標(biāo)對照品峰AR

內(nèi)標(biāo)物峰As

6min8min一、高效液相色譜法（二）應(yīng)用3.測定方法（1）內(nèi)標(biāo)法供試品+內(nèi)標(biāo)供試品峰Ax內(nèi)標(biāo)物峰As

6min8min一、高效液相色譜法（二）應(yīng)用3.測定方法（2）外標(biāo)法R：對照品X：供試品一、高效液相色譜法（二）應(yīng)用3.測定方法（3）加校正因子的主成分自身對照法（4）不加校正因子的主成分自身對照法（5）面積歸一化法一、高效液相色譜法（三）實(shí)例一、丙酸氯倍他索乳膏含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：固定相：C18

流動相：甲醇-水（65∶35）檢測波長：240nm理論板數(shù)：不低于2000分離度：丙酸氯倍他索峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰符合要求一、高效液相色譜法（三）實(shí)例一、丙酸氯倍他索乳膏含量測定內(nèi)標(biāo)溶液：0.15mg/ml醋酸氟氫松測定法：供試+內(nèi)標(biāo)，對照+內(nèi)標(biāo)，按峰面積計(jì)算方法：內(nèi)標(biāo)法一、高效液相色譜法（三）實(shí)例二、法莫替丁片含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：固定相：C18

流動相：庚烷磺酸鈉-乙腈-甲醇（78:19:3）檢測波長：254nm理論板數(shù)：不低于1400分離度：法莫替丁與相鄰雜質(zhì)峰符合要求一、高效液相色譜法（三）實(shí)例二、法莫替丁片含量測定供試品：對照品：法莫替丁測定法：按峰面積計(jì)算方法：外標(biāo)法二、氣相色譜法（一）基本原理二、氣相色譜法（二）應(yīng)用1.對儀器的一般要求（1）載氣源：氦氣、氮?dú)狻錃?，純?9.99%以上（2）進(jìn)樣部分：采用溶液直接進(jìn)樣或頂空進(jìn)樣（3）色譜柱：填充柱或毛細(xì)管柱（4）柱溫箱：控溫精度應(yīng)在±1℃，且溫度波動小于每小時(shí)0.1℃二、氣相色譜法（二）應(yīng)用1.對儀器的一般要求（5）檢測器：火焰離子化檢測器（FID）、熱導(dǎo)檢測器（TCD）、氮磷檢測器（NPD）、電子捕獲檢測器（ECD）、質(zhì)譜檢測器（MS）等

（6）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：記錄儀、積分儀以及計(jì)算機(jī)工作站等

二、氣相色譜法（二）應(yīng)用2.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)3.測定法（1）內(nèi)標(biāo)法（2）外標(biāo)法（3）面積歸一化法（4）標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法測定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量

（三）實(shí)例各種制劑中乙醇的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)載體：直徑為0.25～0.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球柱溫：120～150℃理論板數(shù)：按正丙醇峰計(jì)算應(yīng)不低于700分離度：乙醇峰與正丙醇的分離度應(yīng)大于2.0二、氣相色譜法（三）實(shí)例各種制劑中乙醇的含量測定校正因子：無水乙醇+正丙醇（內(nèi)標(biāo)），計(jì)算校正因子，RSD≤2.0%測定法：供試品+正丙醇方法：內(nèi)標(biāo)法二、氣相色譜法三、液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及其應(yīng)用簡介液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS）是20世紀(jì)90年代發(fā)展起來的綜合分析技術(shù)，先分離，再按質(zhì)荷比（m/z）將離子分離、檢測的分析方法，LC的高分離效能與MS的高靈敏度、高選擇性使之成為目前發(fā)展最迅速的分析手段之一。千里光中毒性成分阿多尼弗林堿的檢查色譜、質(zhì)譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)固定相：C18流動相：乙腈-0.5%甲酸溶液（7:93)

檢測器：ESI正離子模式下，質(zhì)荷比（m/z)為366離子進(jìn)行檢測理論板數(shù)：按阿多尼弗林堿峰計(jì)算應(yīng)不低于8000三、液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及其應(yīng)用簡介千里光中毒性成分阿多尼弗林堿的檢查校正因子：0.2μg/ml野百合堿對照品為內(nèi)標(biāo)，0.1μg/ml阿多尼弗林堿對照品為對照，計(jì)算校正因子測定法：供試品+內(nèi)標(biāo)溶液本品按干燥品計(jì)算，含阿多尼弗林堿（C18H23NO7)不得過0.004%。三、液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及其應(yīng)用簡介第四節(jié)

分析方法的驗(yàn)證驗(yàn)證的目的：證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測要求

需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)檢查、有效成分含量測定藥品溶出度、釋放度

指標(biāo):精密度，準(zhǔn)確度，檢測限，定量限，選擇性，線性與范圍，耐用性一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容（一）準(zhǔn)確度用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度表示方法：用回收率（%）表示在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容（一）準(zhǔn)確度1.含量測定方法的準(zhǔn)確度2.雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度3．?dāng)?shù)據(jù)要求

在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容（二）精密度同一樣品多次測量值之間相互接近的程度表示方法：偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）1.重復(fù)性：同一實(shí)驗(yàn)室，同一人多次測定的精密度2.中間精密度：同一實(shí)驗(yàn)室，不同人，不同儀器測定的精密度3.重現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室，不同人測定的精密度一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容（三）專屬性有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性（四）檢測限指試樣中被測物能被檢測出的最低量信噪比法(S:N=3:1)一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容（五）定量限指試樣中被測物能被定量測定的最低量，常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10∶1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限。（六）線性待測物濃度與響應(yīng)值成線性關(guān)系的濃度范圍線性關(guān)系：Y=a+bx（r=0.9999)線性程度：相關(guān)系數(shù)一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容（七）范圍指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。（八）耐用性指在測定條件有小的變動時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容①已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度②如一種方法不夠?qū)伲捎闷渌治龇椒ㄓ枰匝a(bǔ)充③視具體情況予以驗(yàn)證第五節(jié)

定量分析有關(guān)計(jì)算原料藥的含量用百分含量表示：制劑的含量則用標(biāo)示量的百分含量表示：片劑表示量百分含量：注射劑劑表示量百分含量：其他劑型如何表示？（一）滴定分析法（一）滴定分析法呋塞米原料藥含量測定取本品0.4988g（干燥品），加乙醇30ml，微溫使溶解，放冷，加甲酚紅指示液4滴與麝香草酚藍(lán)指示液1滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1003mol/L）滴定至溶液顯紫紅色，消耗氫氧化鈉滴定液（0.1003mol/L）14.86ml；并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，消耗氫氧化鈉滴定液（0.1003mol/L）0.05ml。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于33.07mg的呋塞米。按干燥品計(jì)算，含C12H11ClN2O5S不得少于99.0%。呋塞米原料藥含量測定（一）滴定分析法由于98.48%＜99.0%，故本品含量不合格（一）滴定分析法司可巴比妥鈉原料藥含量測定取本品0.1041g（干燥品），置250ml碘瓶中，加水10m1，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸5m1，立即密塞并振搖1min，在暗處靜置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10m1，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相當(dāng)于13.01mg的C12H17N2NaO3。按干燥品計(jì)算，含C12H17N2NaO3不得少于98.5%。已知樣品消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）17.20ml，空白實(shí)驗(yàn)消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）25.02ml（一）滴定分析法司可巴比妥鈉原料藥含量測定測定結(jié)果大于98.5%，故本品含量合格（一）滴定分析法甲苯磺丁脲片劑（標(biāo)示量0.5g）的含量測定取甲苯磺丁脲10片，精密稱定為5.948g，研細(xì)，精密稱取片粉0.5996g，加中性乙醇25ml，微熱，使其溶解，放冷，加酚酞指示劑3滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1008mol/L）滴定至粉紅色，消耗量18.47ml。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于27.04mg的甲苯磺丁脲?！吨袊幍洹番F(xiàn)行版規(guī)定本品含甲苯磺丁脲應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%～105%。試計(jì)算本品的標(biāo)示量百分含量，并判斷是否符合規(guī)定。（一）滴定分析法甲苯磺丁脲片劑（標(biāo)示量0.5g）的含量測定本品含量合格(二）分光光度法(二）分光光度法對乙酰氨基酚原料藥含量測定精密稱取對乙酰氨基酚0.0411g，置250ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液50ml，加水至刻度，搖勻，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液10ml，加水至刻度，搖勻。依照分光光度法，在257nm波長處測得吸收度為0.582。按C8H9NO2的百分吸收系數(shù)為715計(jì)算對乙酰氨基酚的百分含量(二）分光光度法對乙酰氨基酚原料藥含量測定(二）分光光度法甲氧芐啶注射液（規(guī)格2ml：0.1g）含量測定精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，搖勻。照紫外-可見分光光度法，在271nm波長處測定吸光度為0.420。另取甲氧芐啶對照品適量0.05134g，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，搖勻。在271nm波長處測