人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)酶聯(lián)免疫分析

人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T2ng/L-60ng/L使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)水平。用純化的人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP),再與HRP標記的降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20mlX1瓶7終止液6mlX1瓶2酶標試劑6mlX1瓶8標準品(120ng/L)0.5mlX1瓶3酶標包被板12孔X8條9標準品稀釋液1.5mlX1瓶4樣品稀釋液6mlX1瓶10說明書1份5顯色劑A液6mlX1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6mlX1/瓶12密封袋1個標本要求1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20°C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。60ng/L5號標準品150山的原倍標準品加入150山標準品稀釋液30ng/L4號標準品150山的5號標準品加入150山標準品稀釋液15ng/L3號標準品150山的4號標準品加入150山標準品稀釋液7.5ng/L2號標準品150山的3號標準品加入150山標準品稀釋液3.75ng/L1號標準品150山的2號標準品加入150山標準品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50卩1,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40卩1,然后再加待測樣品10卩1（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育：用封板膜封板后置37°C溫育30分鐘。配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用洗滌：小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。加酶：每孔加入酶標試劑50卩1，空白孔除外。溫育：操作同3。洗滌：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A50yl，再加入顯色劑B50yl，輕輕震蕩混勻，37C避光顯色15分鐘.終止：每孔加終止液50卩1，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié)：計算以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。注意事項1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標準曲線，最好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)伍倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）o封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標