生物：第一章《基因工程》課件(浙教版選修3)

選修三現(xiàn)代生物科技第一章基因工程

1．在培育轉(zhuǎn)基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作為標(biāo)記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。簡(jiǎn)述獲得轉(zhuǎn)基因發(fā)光玫瑰植株的完整技術(shù)流程。侵染熒光基因

含kan質(zhì)粒重組質(zhì)粒土壤農(nóng)桿菌含重組質(zhì)粒土壤農(nóng)桿菌A構(gòu)建導(dǎo)入B培養(yǎng)選擇轉(zhuǎn)基因發(fā)光植株再生植株愈傷組織離體玫瑰葉片組織C誘導(dǎo)選擇分化D檢測(cè)（1）A過程需要的酶有

。（2）B過程及其結(jié)果體現(xiàn)了質(zhì)粒作為運(yùn)載體必須具備的兩個(gè)條件是

。（3）C過程的培養(yǎng)基除含有必要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、瓊脂和激素外，還必須加入

。（4）如果利用DNA分子雜交原理對(duì)再生植株進(jìn)行檢測(cè)，D過程應(yīng)該用

作為探針。限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶具有標(biāo)記基因；能在宿主細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存卡那霉素放射性同位素標(biāo)記的熒光基因基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制酶I的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是－↓GATC－。根據(jù)圖示,判斷下列操作正確的是（）

A．質(zhì)粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割

B．質(zhì)粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割

C．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅰ切割

D．目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅱ切割A(yù)（山東）2.繼哺乳動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器研發(fā)成功后，膀胱生物反應(yīng)器的研究也取得了一定進(jìn)展。最近，科學(xué)家培育出一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長(zhǎng)激素并分泌到尿液中。（1）將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈笫荏w細(xì)胞，常用方法是

。（2）進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時(shí)，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入

中，原因是

。（3）通常采用

技術(shù)檢測(cè)外源基因是否插入了小鼠的基因組。（4）在研制膀胱生物反應(yīng)器時(shí)，應(yīng)使外源基因在小鼠的

細(xì)胞中特異表達(dá)。（5）為使外源基因在后代長(zhǎng)期保持，可將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞的

轉(zhuǎn)入

細(xì)胞中構(gòu)成重組細(xì)胞，使其發(fā)育成與供體具有相同性狀的個(gè)體。該技術(shù)稱為

。顯微注射技術(shù)

受精卵（或早期胚胎）受精卵（或早期胚胎細(xì)胞）具有全能性，可使外源基因在相應(yīng)組織細(xì)胞表達(dá)DNA分子雜交（核酸探針）膀胱上皮去核的卵核移植（或克?。┘?xì)胞核對(duì)某一DNA進(jìn)行酶切，用A限制性內(nèi)切酶酶切時(shí)，得到1個(gè)DNA片段，用B限制性內(nèi)切酶酶切時(shí)，得到3個(gè)DNA片段，若同時(shí)用A、B限制性內(nèi)切酶酶切時(shí)，得到4個(gè)DAN片段，則可判斷該DNA有

個(gè)A限制性內(nèi)切酶切點(diǎn)，有

個(gè)B限制性內(nèi)切酶切點(diǎn)。13

第一步：獲取目的基因（目的基因的序列已知）①化學(xué)方法合成目的基因②PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))擴(kuò)增目的基因2、從基因文庫中獲取目的基因（目的基因的序列未知）1、人工合成目的基因(根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列直接合成)（1）來源：（2）作用：原核生物(主要)識(shí)別和切割DNA分子內(nèi)特定核苷酸序列

即:一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列，并且能在特定的切點(diǎn)上切割DNA分子。（3）特點(diǎn)：專一性(特異性)1、限制性核酸內(nèi)切酶磷酸與脫氧核糖之間的磷酸二酯鍵（4）作用部位:（5）作用結(jié)果:產(chǎn)生黏性末端或平末端第二步：形成重組DNA分子2、“分子縫合針”

——DNA連接酶（1）作用：連接DNA片段間的磷酸二酯鍵，將外源基因和載體連接在一起（2）常用種類：①E.coliDNA連接酶：來源：大腸桿菌作用：只連接黏性末端②T4DNA連接酶：來源：T4噬菌體作用：連接黏性末端、平末端DNA連接酶比較DNA聚合酶3、“分子運(yùn)輸車”——運(yùn)載體⒈載體需要的條件：⑴能在受體細(xì)胞中自主復(fù)制、表達(dá)并穩(wěn)定保存⑵有1~多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接⑶有某些標(biāo)記基因，便于篩選

⑷對(duì)受體細(xì)胞無害⒉常用運(yùn)載體：

⑴質(zhì)粒⑵噬菌體或某些動(dòng)植物病毒（最常用：大腸桿菌的質(zhì)粒）：環(huán)狀雙鏈DNA1.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法2.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞顯微注射技術(shù)（最多、最有效）3.將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞CaCl2處理，以增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性?；ǚ酃芡ǖ婪ǖ谌剑簩⒅亟MDNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞第四步：篩選含有目的基因的受體細(xì)胞檢測(cè):轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因常用方法：利用標(biāo)記基因(抗性基因)進(jìn)行篩選或DNA分子雜交技術(shù)

基因工程是否獲得成功，最重要的是要看目的基因是否在受體細(xì)胞中得到表達(dá)。第五步：目的基因表達(dá)1、檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA？

DNA—RNA分子雜交技術(shù)2、檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)（表達(dá)）？抗原—抗體雜交如何檢測(cè)目的基因是否表達(dá)？檢測(cè)是否產(chǎn)生了目的基因產(chǎn)物。；/貓先生電競(jìng)lqu93hmo個(gè)學(xué)習(xí)的機(jī)會(huì)，咱們小學(xué)堂準(zhǔn)備同時(shí)開辦一期夜校，專門招收十五歲以上，三十歲以下的年青人。上夜校不耽誤白天家里和地里的活計(jì)，也是免費(fèi)學(xué)習(xí)，包括課本！”二狗子和大頭聽了，興奮地帶頭鼓掌并大聲歡呼起來：“好哇，太好啦！”耿正笑著示意大家安靜，繼續(xù)說“還有哇，希望大家伙兒回去后，記著轉(zhuǎn)告那些今天不在場(chǎng)的左鄰右舍們，也歡迎他們來學(xué)堂為自家的娃娃們報(bào)名。當(dāng)然，愿意上夜校，年齡也合適的大人們也一樣歡迎。有勞各位了，有勞各位了！”耿正說到最后，還連連向大家點(diǎn)頭拱手表示感謝。大家伙兒笑得更開心了，七嘴八舌地說：“這有什么啊，順便一句話的事兒！”“不用你說，俺們記著呢！”“嗨，俺先給俺家的娃兒報(bào)上名！這到時(shí)候哇，不等俺和鄰家大人們說，娃兒們自己就把這個(gè)消息傳揚(yáng)開了！”“娃娃們傳揚(yáng)是他們自己的事，反正啊，俺是一定要和大人們說的！”在鄉(xiāng)親們熱情洋溢的議論聲中，剛剛喝完慶功酒的鄉(xiāng)民們紛紛為自家的娃娃報(bào)名。耿英把報(bào)名學(xué)童的名字、性別、年齡，以及家長(zhǎng)的名字，認(rèn)真地填寫在事先擬定畫好的表格里。二狗子和大頭，還有另外的幾個(gè)大齡青年也都當(dāng)場(chǎng)報(bào)了名，熱切希望上夜校班學(xué)習(xí)。在隨后的幾天內(nèi)，又有不少鄉(xiāng)民專程來小學(xué)堂為自家的娃娃報(bào)名。還有不少的大齡青年則高高興興地跑來為自己報(bào)名，希望利用晚上的時(shí)間，使自己成為文化人兒。六畝試種的水稻獲得了很不錯(cuò)的收成，這讓耿老爹一家人喜上加喜。辛苦半年多了，一天天看著這些南方水稻在故鄉(xiāng)的土地上試種成功的耿老爹，更是笑得合不攏嘴！新打的稻谷已經(jīng)曬干了。耿老爹決定在兒女們的婚宴上，加上一道北方人非常稀罕的，香噴噴的白米肉丁炒飯！留了足夠的稻種，自家留了一部分，送給左鄰右舍各幾麻袋，又分送給其他街坊鄰居一些以后，耿老爹就讓耿正和耿直把剩余的稻谷全部送到了舅舅家。從此之后，耿老爹妻弟一家在“三六九鎮(zhèn)”上開的飯鋪里，又增加了一道香噴噴的清蒸白米飯，以及各種口味兒的炒米飯。8第百三四回五道廟前謝佑恩|（供品多多心虔誠(chéng)，五道廟前謝佑恩；各人禱告大不同，返回路上笑不停。）八月十六一大早，郭氏提前準(zhǔn)備好了簡(jiǎn)單的早飯。飯后，來不及洗刷收拾，又開始準(zhǔn)備供品、香火和紙?jiān)獙毜鹊纫粦?yīng)敬