冰凍切片知識概述

石蠟切片與冷凍切片的區(qū)分是什么簡潔的說簡潔的說,石蠟切片是標(biāo)本要這固定后經(jīng)脫水,浸蠟后才能用于切片,冷凍切片是直接把標(biāo)本放在切片機(jī)上使它即刻冰凍,就可以切片了.再簡潔的說一種是要經(jīng)過很多工序才能用于切片,一種是直接用于切片.簡介冰凍切片〔簡介冰凍切片〔frozensection〕是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到肯定硬度，然后進(jìn)行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。冰凍切片這些方法，隨著時(shí)代的變遷，科技的進(jìn)展，很多年前被認(rèn)為是格外重要的技術(shù)，現(xiàn)在也逐步被淘汰了。固然有些技術(shù)，如低溫恒冷箱冰凍切片法，正在受到青睞。冰凍切片的應(yīng)用〔冰凍切片的應(yīng)用〔1〕在手術(shù)進(jìn)展中，突然覺察病人的病變與原診斷，原定手術(shù)方案不相符合，或者懷疑時(shí)，需要病理確定?！?〕了解淋巴結(jié)內(nèi)是否有轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞，或者轉(zhuǎn)移的程度，以利于確定是否需要徹底掃除淋巴結(jié)或者其它的治療措施?！?〕對于已確定為惡性腫瘤的患者，則需要了解其手術(shù)范圍是否足夠，上下切緣是否有殘存的腫瘤組織?！?〕在做剖腹探查時(shí)所覺察的腫塊或者異樣的組織。〔5〔5〕顯示組織中的脂肪和脂類物質(zhì)，這常見于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研組織等?！?〕某些酶的顯示如ATP酶，琥珀酸脫氫酶等?！?神經(jīng)病理學(xué)技術(shù)中的某些染色法如EagerMarchiCajalHortega氏法和Holzer氏法等?！?〕對某些物質(zhì)所進(jìn)展的免疫熒光的爭論。術(shù)中為何做冰凍切片術(shù)中為何做冰凍切片病理檢查首先需要將切下的病變組織器官作一系列技術(shù)處理，包括固定、取材、脫水、浸蠟、包埋、切片和染色等，一般需花費(fèi)24小時(shí)方可完成全部制片過程，然后由病理醫(yī)生石蠟切片病理檢查中最常用的方法。但是，這種方法從外科醫(yī)生將病變組織切下，到做出病理診斷，前后通常需要3天的時(shí)間。病理醫(yī)生切片是目前應(yīng)用的最廣泛的方法?？焖俦鶅銮衅怯糜谑中g(shù)中病理診斷的一種方法，病理醫(yī)生在收到手術(shù)標(biāo)本后約l5分病理診斷的正確與否直接關(guān)系到手術(shù)臺上處理患者的下一個(gè)步驟乳腺腫塊切除后的冰凍報(bào)告是良性的纖維腺瘤，則可宣告手術(shù)完畢；如冰凍報(bào)告是乳腺癌，就需要進(jìn)一步擴(kuò)大手術(shù)范圍有重大幫助和指導(dǎo)意義，診斷要力求正確、快速和牢靠。然而，快速冰凍切片要在如此之短的時(shí)間內(nèi)做出診斷，難度相當(dāng)高，取材有局限性，制作切片的質(zhì)量也不如常規(guī)石蠟切片常規(guī)石蠟切片比照和存檔?？焖俦鶅銮衅饕糜谝韵聨追N狀況：〔如甲狀旁腺、輸卵管或輸精管等〔如甲狀旁腺、輸卵管或輸精管等；[1]冰凍切片的制作方法冰凍切片的制作方法低溫恒冷箱冷凍切片制作法以ShandonAs620E冷凍鍵和除霜鍵，啟動即時(shí)冷凍鍵，機(jī)器馬上進(jìn)展工作狀態(tài)，并可持續(xù)10mins。啟動即時(shí)除霜鍵，可將工作間頂部后面的制冷柵上的霜除掉，并可持續(xù)15mins。有照明鍵一個(gè)，啟，鎖住工作間。除此之外，箱面的左邊有四個(gè)按鍵，兩個(gè)為快速自動進(jìn)退鍵，兩個(gè)為微小進(jìn)退鍵，還有一個(gè)手動旋鈕，調(diào)整修組織塊時(shí)的進(jìn)退。冷凍箱內(nèi)左邊的冷凍臺，溫度可達(dá)-60℃左右，冷凍箱的中間為一臺切片機(jī)，工作間的溫度在0-30℃間可任意調(diào)整，并在箱面上的熒屏顯示出來。操作方法及步驟為24×24×2mm?？缮詾楹袂?，一般在5～10um間。即可。定，不能一概而論。如：切未經(jīng)固定的腦組織，肝組織和淋巴結(jié)時(shí)，冷凍箱中的溫度不能調(diào)太低，在-10--15℃左右，切甲狀腺、脾、腎、肌肉等組織時(shí)，可調(diào)在-15～20℃左右，切帶脂肪的組織時(shí)，應(yīng)調(diào)至-25℃左右，切含大量的脂肪時(shí)，應(yīng)調(diào)至-30℃。冰凍切片時(shí)的留意事項(xiàng)方，假設(shè)有剩余的包埋劑粘于刀或板上，將會破壞甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。然后依據(jù)不同的編號，依序切片，這樣做既不費(fèi)時(shí)也不會亂?！翱巢窨床駝荨保衅彩侨绱?，假設(shè)胡亂放置，就不能收到很好的效果。組織中，形成了冰晶。刻，再行切片，或者用口中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊，以此來軟化組織，再行切片。另者，調(diào)高冰凍點(diǎn)。從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差生了一種吸附力，使切片與載玻片結(jié)實(shí)地附貼在一起。假設(shè)使用冷藏的載玻片來附貼切片，由于溫度一樣，沒有發(fā)生上述的現(xiàn)象。冰凍切片的快速染色法冰凍切片附貼于載玻片后，馬上放入恒冷箱中的固定液固定1分鐘后即可染色。以往，起來，核染色質(zhì)清楚，核仁明顯，其他物質(zhì)都完好保存。方法：30秒－1分鐘。3－5分鐘。⑤于堿水中返藍(lán)⑤于堿水中返藍(lán)20秒。⑦脫水，透亮，中性樹膠封固。冰凍組織1－2分鐘，切片1分鐘，固定1分鐘，染色共五分鐘?？偣苍?0分鐘內(nèi)完成快速制片過程，結(jié)果與石蠟切片不相上下。冰凍切片的方法還有很多種，如甲醇循環(huán)的半導(dǎo)體冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，闡述。優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)1．簡便，可以不需要對組織固定、脫水、透亮、包埋等手續(xù)即可進(jìn)展切片，削減了一些中間環(huán)節(jié)。2．快速，用時(shí)短。3．組織變化不大。4．能很好保存脂肪，類脂等成分。5．能夠比較完好地保存各種抗原活性及酶類，特別是對于那些對有機(jī)溶劑或熱的溫度耐受力量較差的細(xì)胞膜外表抗原和水解酶保存較好。缺點(diǎn)1．不簡潔做連續(xù)切片。2．切取的組織不能過大，組織過大不簡潔凍結(jié)或者組織凍結(jié)不均，影響切片及染色效果。3．不簡潔制作較薄的切片。4．組織塊在凍結(jié)過程中簡潔產(chǎn)生水的結(jié)晶而影響細(xì)胞的形態(tài)構(gòu)造及抗原物質(zhì)的定位，并且組織構(gòu)造也不如石蠟切片清楚。操作中的留意事項(xiàng)操作中的留意事項(xiàng)穎的組織制備CO2〔－78℃〕〔－80℃〕〔－190℃〕④烷〔19。液氮適用于組織化學(xué)，較安全。缺點(diǎn)：組織塊易發(fā)生龜裂。固定組織的制備為防止水解酶和其他物質(zhì)的移位、彌散，常用4℃、24小時(shí)的甲醛固定能很好地保存酶類。但對很多脫氫酶和轉(zhuǎn)移酶能滅活。故不宜使用，低溫，冷甲醛短時(shí)間固定〔10分鐘左右〕固定，可顯示琥珀酸脫氫酶。電鏡消滅后，需要保存細(xì)胞的超微構(gòu)造，以4%緩沖戊二醛〔25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸pH84m8〕氧化復(fù)原酶和轉(zhuǎn)移酶。恒冷箱溫度一般在冷凍后10分鐘，到接近冷室溫度時(shí)再切，一般組織在－15～－20℃切片最易成Pearse及Bancroft的閱歷如下：組織刀溫度組織溫度恒冷箱溫度肝-18-10-5腎-15-8-5皮膚-35-10-5腦-18-5-5固定組織一般高3-5度切片機(jī)的使用抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離，使切片平滑通過?？咕戆迓愿哂诘睹娴淖罡唿c(diǎn)?？蓱{閱歷調(diào)整刀對組織的角度，一般刀為20゜。操作程序：先接通電源，調(diào)定恒冷箱溫推動器上。即可切片。恒冷箱視使用狀況每周或每月清潔一次冰霜。刀切片滿足，舊刀用自動磨刀機(jī)磨刀較好。假設(shè)切片刀與抗卷板的位置，角度符合要求，又有一把銳利的刀，就能獲得抱負(fù)的切片。其他其他冰凍枯燥冰凍枯燥原理為冰凍組織保持高度真空，直到去除組織中的水分。過程小塊組織驟冷→馬上在真空枯燥脫水〔－30～－40℃〕冰升華，水氣去除，不會發(fā)生酶的彌散→材料干后，升到室溫浸于石蠟或碳蠟包埋。特點(diǎn)能精彩地保存組織的酶活性，