尿液分析儀檢驗(yàn)的原理與方法

尿液分析儀檢驗(yàn)的原理與方法尿液潛血檢查是尿液檢驗(yàn)中一個(gè)必不可少的項(xiàng)目，常用的檢驗(yàn)方法有尿液分析儀潛血反應(yīng)和尿液顯微鏡檢查紅細(xì)胞（鏡檢RBC）兩種。由于顯微鏡檢查對(duì)鑒別腎小球性與非腎小球血尿有重要的臨床價(jià)值，故有學(xué)者提出顯微鏡檢查是尿液紅細(xì)胞檢驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，是尿液分析儀無法替代的。但是，近年來隨著尿液分析儀的迅速普及，測(cè)量參數(shù)向著快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的方向發(fā)展，為臨床提供了更好的診斷依據(jù)；顯微鏡檢查耗時(shí)費(fèi)力，許多人不愿意做尿液沉渣檢查。因而在一些醫(yī)院尿液顯微鏡檢查有逐漸被尿液分析儀替代的趨勢(shì)。為此，筆者對(duì)400例門診患者的隨機(jī)尿樣，用尿液分析儀潛血反應(yīng)和尿液顯微鏡檢查紅細(xì)胞兩種方法進(jìn)行檢驗(yàn)，并對(duì)兩種方法的符合程度進(jìn)行比較。原理與方法1、原理。尿液分析儀使用的是干化學(xué)試紙法，是根據(jù)多聯(lián)試帶上各模塊與尿液成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)后顏色變化的深淺來檢測(cè)尿液中的某化學(xué)物質(zhì)，如直接檢測(cè)紅細(xì)胞、白細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)涵物，間接推斷細(xì)胞的有無。尿液分析儀潛血反應(yīng)原理是：血紅蛋白(Hb)中亞鐵血紅素的過氧化物酶樣活性可使過氧化物分解釋放出新生態(tài)［O］，后者氧化底物鄰甲苯胺變成鄰聯(lián)甲苯胺發(fā)生由黃色f草綠色f深藍(lán)色的顏色變化。尿液顯微鏡檢查則是通過顯微鏡的放大作用直接將細(xì)胞等有形成分直觀真實(shí)地呈現(xiàn)在鏡下，是對(duì)底物的真實(shí)反映。2、方法尿液分析儀檢測(cè)尿潛血于混勻的10ml新鮮尿液中浸入尿試紙條1s后取出，上儀器進(jìn)行測(cè)定，自動(dòng)打印結(jié)果。鏡檢取尿液10ml于試管中，以1500r/min離心5min，棄去上清液，留沉淀0.2ml。充分混勻后，取出約20Pl于載玻片上，加蓋玻片(2.0cmX2.0cm)，然后用較弱的光線以低倍鏡觀察全貌，以免漏掉量少而有意義的物體，再用高倍鏡辨認(rèn)細(xì)胞。結(jié)果報(bào)告為：X個(gè)/高倍視野（HP）。結(jié)果分析由于兩種檢驗(yàn)方法的原理不同，影響它們的因素也不同，因而兩種檢驗(yàn)方法的結(jié)果存在一定的差異。1、假陽性。即尿液分析儀潛血反應(yīng)陽性，鏡檢陰性，其常見原因有：（1）血紅蛋白（Hb）尿液分析儀潛血反應(yīng)既能與完整的RBC發(fā)生陽性反應(yīng)，也可與RBC溶解釋放的Hb發(fā)生陽性反應(yīng)，而顯微鏡只能檢出尿中未溶解的RBC。健康人尿中Hb含量極微，定性為陰性。疾病時(shí)，尿中Hb有兩個(gè)來源：一是發(fā)生血管內(nèi)溶血，血漿Hb超過了結(jié)合珠蛋白的結(jié)合能力，游離Hb從尿中排出。另一個(gè)是尿路（尤其是上尿路）出血，RBC在高滲或（和）低滲時(shí)破壞Hb逸出。此時(shí)，尿液分析儀潛血反應(yīng)陽性，但尿沉渣鏡檢不見RBC或僅見RBC碎片。（2） 肌紅蛋白（Mb）分子中也含有血紅素基團(tuán)，具有過氧化物酶活性°Mb主要存在于心肌和骨骼肌組織中，正常人尿中含量甚微，不能檢出。當(dāng)心肌或骨骼肌發(fā)生嚴(yán)重?fù)p傷時(shí)，血漿Mb增高，經(jīng)腎臟排泄，使尿液Mb含量增高，故潛血反應(yīng)呈陽性，鏡檢RBC為陰性。（3） 某些患者尿液中含有對(duì)熱不穩(wěn)定酶，也可使試劑塊發(fā)生顏色改變，出現(xiàn)潛血反應(yīng)陽性，鏡檢為陰性。（4） 某些氧化性污染物，例如次氯酸鹽會(huì)導(dǎo)致潛血反應(yīng)假陽性。（5）菌尿尿液是細(xì)菌良好的培養(yǎng)基，菌尿時(shí)有些細(xì)菌會(huì)產(chǎn)生氧化性物質(zhì)，使得試劑塊發(fā)生顏色變化，導(dǎo)致潛血反應(yīng)陽性，鏡檢RBC為陰性。此外，微生物過氧化酶的侵入也可引起假陽性。（6）長(zhǎng)時(shí)間存放及高溫實(shí)驗(yàn)證明，標(biāo)本不新鮮，存放時(shí)間長(zhǎng)或高溫存放，使?jié)撗磻?yīng)的陽性率相對(duì)增高，而RBC鏡檢相應(yīng)減少，測(cè)試結(jié)果極有可能出現(xiàn)假陽性。因此，建議尿液標(biāo)本存放時(shí)間不得超過4h。（7）尿試紙條的超期使用或被污染以及不妥善保存和操作方法的不正確，均可造成測(cè)試結(jié)果假陽性。（8）尿液分析儀靈敏度過高（0.2mg/dl出現(xiàn)++），“級(jí)差”范圍太大（0.8?50mg/dl級(jí)為+++），常會(huì)遇到儀器測(cè)試為++，而鏡檢測(cè)試紅細(xì)胞為陰性，臨床上又找不到任何導(dǎo)致血紅蛋白尿原因的情況。2、假陰性。即鏡檢陽性，尿液分析儀潛血反應(yīng)陰性，其常見原因有:（1）食物或藥物的影響：由于飲食或藥物使尿液呈堿性時(shí)，RBC溶解破裂，形成褐色顆粒，潛血反應(yīng)呈陽性，而鏡檢呈陰性。（2）VitC尿液中大量存在時(shí)，能競(jìng)爭(zhēng)性?shī)Z取反應(yīng)產(chǎn)生的氧，引起假陰性反應(yīng)。（3）高比重、高蛋白尿樣降低了試劑塊潛血反應(yīng)的靈敏度，使?jié)撗磻?yīng)出現(xiàn)假陰性。（4）尿液中黏液成分增多，使RBC被包裹起來，試劑接觸不到Hb，而使?jié)撗磻?yīng)呈現(xiàn)假陰性。3、離心對(duì)結(jié)果的影響。離心時(shí)如速度過快，可使有形成分破壞；但速度過慢，當(dāng)每毫升尿液中的RBC在5000以下時(shí)，沉渣中可能找不到RBC，以至把隱匿型腎小球腎炎漏掉，因而在對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果有懷疑時(shí)，可用潛血反應(yīng)證實(shí)。分析結(jié)論尿液分析儀法檢測(cè)尿中紅細(xì)胞異常敏感，有時(shí)可與鏡檢結(jié)果存在差異，要充分考慮影響測(cè)定結(jié)果因素，并結(jié)合臨床進(jìn)行全面分析，原則上尿液分析儀潛血反應(yīng)陽性結(jié)果都應(yīng)以顯微鏡法復(fù)檢，這是做好尿液檢驗(yàn)質(zhì)量保證的重要環(huán)