GB/T 28062-2011柑桔黃龍病菌實(shí)時熒光PCR檢測方法

ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T28062—2011

柑桔黃龍病菌實(shí)時熒光PCR檢測方法

DetectionofCandidatusLiberibacterasiaticususingthe

real-timefluorescentPCR

2011-12-30發(fā)布2012-06-01實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T28062—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位重慶大學(xué)農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心中華人民共和國北京出入境檢驗(yàn)檢

:、、

疫局

。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人殷幼平王中康王玉璽高文娜夏玉先曹月青彭國雄李正國

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T28062—2011

柑桔黃龍病菌實(shí)時熒光PCR檢測方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了柑桔黃龍病亞洲韌皮桿菌Candidatus實(shí)時熒光檢測的

(Liberibacterasiaticus)PCR

樣品制備檢測操作方法及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

、。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于對蕓香科和非蕓香科植物罹病植株和傳播媒介柑桔木虱中黃龍病亞洲韌皮桿菌的檢

測和病害鑒定

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

柑桔苗木產(chǎn)地檢疫規(guī)程

GB5040

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求

GB/T19495.2

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

31

.

柑桔黃龍病CitrusHuanglongbing

一種由韌皮桿菌引起的植物檢疫性病害主要侵染柑桔屬金柑屬和枳屬等柑桔類植株重由帶

。、。

菌種苗遠(yuǎn)距離傳播田間主要由柑桔木虱取食傳播典型受害植株葉片斑駁不均勻黃化枝梢黃化果

,。,,

實(shí)畸形種子敗育嚴(yán)重時可引起植株死亡

,,。

32

.

實(shí)時熒光PCRreal-timefluorescentPCR

實(shí)時熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)一種在體外擴(kuò)增微量的特殊片段的方法在擴(kuò)增過程中由于熒光

,DNA,

物質(zhì)的釋放或熒光物質(zhì)與擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合并被實(shí)時檢測而能夠快速靈敏地檢出模板的存在

、DNA。

33

.

擴(kuò)增引物primer

人工合成的寡核苷酸序列其序列與待擴(kuò)增的目標(biāo)序列中的一段相同用于引導(dǎo)體外

,DNA,DNA

擴(kuò)增

。

34

.

擴(kuò)增模板templet

體外擴(kuò)增中所用的待擴(kuò)增的靶標(biāo)序列

DNA。

35

.

Ct值cyclethresholdvalue

實(shí)時熒光反應(yīng)中每個反應(yīng)管內(nèi)熒光信號達(dá)到設(shè)定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

PCR。

36

.

亞洲韌皮桿菌重組質(zhì)粒DNArecombinantplasmidDNA

利用特異性引物擴(kuò)增柑桔黃龍病亞洲韌皮桿菌基因組模板獲得的亞洲韌皮桿菌特異性