凝膠成像介紹

startTheitemofmustbeselectedFunctionType:DNAorprotein其他項(xiàng)目選不選都行。但FunctionType一定要選。Autochemi:暗箱燈光控件調(diào)整相機(jī)輔助光圈、變焦和焦距控制各種濾光片的選擇?？刂聘鞣N照明光源。燈光類型選擇:反射照明光:白光及二種波段紫外光透射照明光:白光及三種波段紫外光。但紫外光波段需在紫外燈箱上手動(dòng)選擇。安全選項(xiàng):開(kāi)門時(shí)關(guān)閉紫外光源。箱門上有安全窗口可以即時(shí)觀察熒光效果。AutoChemi的必選項(xiàng):Aperture:光圈?？烧{(diào)整亮度。Zoom:變焦。可調(diào)整畫(huà)面的放大倍數(shù)。Focus:輔助對(duì)焦。Filter:選擇濾光片。Lighting:選擇透射光源。CoolSNAP-pro:相機(jī)控件設(shè)置相機(jī)選擇圖片保存方式選擇圖像預(yù)覽參數(shù)選擇拍攝曝光參數(shù)積分方式拍攝極弱熒光自動(dòng)拍攝程序設(shè)定OpentheCoolSNAP-pro

對(duì)正凝膠塊位置按前述方法，在自然光下對(duì)正，避免頻繁開(kāi)關(guān)紫外光源。然后再打開(kāi)紫外光源。一般用透射光源，用反射光源亦可。再次強(qiáng)調(diào)應(yīng)調(diào)整相機(jī)變焦，使凝膠塊圖象盡量充滿整個(gè)畫(huà)面。這樣有利于圖象拍攝的清晰EnlargetheZoom,lettheimageofthegelaslargeaspossible.ThesettingofCoolSNAP-pro

setup：currentdriver-8-bitgrayscale…這是拍攝照片的格式。作為平時(shí)使用的普通單色黑白照片都是八位灰度。但在本程序里用的是12位灰度。對(duì)光密度的測(cè)量更準(zhǔn)確。所以在拍攝時(shí)不要使用8位圖片格式。12位灰度的圖片很多常用的程序都不能識(shí)別所以需要轉(zhuǎn)換。只選這一項(xiàng)保存圖片方式:Newimage:每次拍攝都保存成一個(gè)新文件Sequence:連續(xù)多幅拍攝并保存系列圖片，用于拍攝動(dòng)態(tài)畫(huà)面，需設(shè)定拍攝間隔時(shí)間，拍攝畫(huà)面數(shù)量等參數(shù)，但不能象攝相機(jī)那樣拍攝錄相。選中這兩項(xiàng)，可使拍攝畫(huà)面與預(yù)覽畫(huà)面一致不選擇任何自動(dòng)曝光的功能Acquire:點(diǎn)擊Auto-Exposureoptions，才能看到自動(dòng)曝光的設(shè)置窗口，確認(rèn)未選擇任何自動(dòng)曝光功能。否則照下的畫(huà)面與預(yù)覽畫(huà)面不會(huì)一致的。另外不要調(diào)整Area，一般都需要拍攝滿畫(huà)幅的圖片。Intergration:NointergrationIntergration的特殊用處這是專業(yè)拍攝亮度特別弱的熒光時(shí)采用的一種特殊拍照方法。對(duì)于平時(shí)肉眼可見(jiàn)的熒光樣品是不必使用的。實(shí)際上使用積分拍攝是很麻煩的。重要的是要作一個(gè)正確的空白樣品，這非常困難。Macros:宏操作就是編程序執(zhí)行一系列重復(fù)的操作。太高級(jí)了，還是別玩它吧。記住設(shè)置完成后要點(diǎn)擊minimaldialog回到小窗口，不要點(diǎn)擊close。否則前面全都白干了。SetpreviewandacquireexposetimePreviewtime

=acquireexposetime必須把兩個(gè)時(shí)間設(shè)為同樣的值，才能使拍攝的效果與預(yù)覽的效果一樣。在正確設(shè)置時(shí)，兩者會(huì)聯(lián)動(dòng)的。曝光時(shí)間與光圈結(jié)合使用來(lái)調(diào)整曝光使畫(huà)面亮度合適。紫外照明光源是50Hz頻閃光源，因此曝光時(shí)間不能太短，至少要大于0.1秒。Acquireimageandsave點(diǎn)此處拍照拍攝后要點(diǎn)此處調(diào)出預(yù)覽畫(huà)面拍攝照片點(diǎn)擊acquire即可拍攝當(dāng)前畫(huà)面。拍攝一張照片后屏幕上的窗口就是拍攝的圖片了，要想重新回到預(yù)覽窗口，得點(diǎn)擊一下preview。保存照片時(shí)存為TIFF格式較好。然后再另存一張jpeg格式的用于其他用途。分析電泳條帶先關(guān)閉相機(jī)控件窗口和燈箱控制窗口SelectainterestedareaandsaveasanewfileRotatetheimage加樣孔必須在圖片上方Sortthelanes整理泳道Add:加上未選中的泳道Delete:刪除錯(cuò)選中的泳道Lanewidth:調(diào)整泳道寬度Uniformlanewidth:勾上此選項(xiàng)，可保證各泳道寬度一致。記得點(diǎn)OK后再進(jìn)行下一步操作。泳道跑歪了怎么辦?去掉Forcestraightlane前面的對(duì)勾，就可以調(diào)整泳道選擇的方向了。不過(guò)這種難看的樣品還是重作為好。Findthebands一條一條地整理帶程序自動(dòng)識(shí)別的帶數(shù)量很多，一般都要?jiǎng)h除掉錯(cuò)誤識(shí)別的帶，只留下需要的帶。也可以先刪掉全部帶，然后手動(dòng)添加所需的帶。點(diǎn)擊deleteband，在錯(cuò)誤識(shí)別的band上點(diǎn)一下就刪掉它了，也可以在光密度曲線窗口上點(diǎn)，效果一樣。Addband的操作也一樣。對(duì)每個(gè)band的寬度要逐個(gè)調(diào)整。特別是相同分子量的條帶，要盡量讓它們的選擇寬度一致。較正背景正規(guī)的背景較正需要拍攝一張空白樣品作為背景，然后扣減其光密度。這種方法麻煩且實(shí)用價(jià)值不大，難以操作。直接從光密度曲線上扣除基線背景較易實(shí)現(xiàn)，但要根據(jù)實(shí)例選擇是否需要扣除基線背景。在background窗口中選擇joiningvalleys即可實(shí)現(xiàn)扣除基線背景?？鄢€背景對(duì)光密度測(cè)量值的改變會(huì)非常大，是否應(yīng)該扣除還需要根據(jù)樣品情況來(lái)選擇。IndicatetheMarklaneanditsvalue這里有常用的Mark數(shù)據(jù)系列當(dāng)Mark條不在左邊時(shí)，一定要重新手動(dòng)指定Mark條的位置指定了Mark位置后，還要選取Mark類型，并檢查各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的分子量值是否正確?？梢允謩?dòng)修改各點(diǎn)分子量的值。注意各標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的順序:前面是大分子量，后面是小分子量。Slant是什么東東?如果各泳道的速度不一致，此功能可以進(jìn)行有限的校正。前提是要在兩邊各作一個(gè)Mark。然后在相同的Mark帶之間拉出一根校正線。這樣在分析測(cè)量時(shí)能夠?qū)Ψ肿恿窟M(jìn)行較正。Now,theanalysisrdsultcanbeobtained.分析結(jié)果該選哪一項(xiàng)?Rel/bandsAmountRelab%IOD:選這個(gè)最保險(xiǎn)MaxOD光密度與樣品量之間的關(guān)系正相關(guān)，但不是正比。也就是說(shuō)，光密度相差一倍并不意味著樣品的量也相差一倍。IOD是累積光密度，此項(xiàng)是直接反映了樣品量之間的對(duì)比。但要注意的是，IOD與樣品量之間不是正比關(guān)系，因此用IOD的比例來(lái)表達(dá)兩個(gè)條帶之間的量的對(duì)比屬于半定量的分析。其他的定量方法誤差更大。IOD的數(shù)值一般都很大，因此讀數(shù)時(shí)很容易搞錯(cuò)位數(shù)。Thedatacanbecopiedtoexcel測(cè)量數(shù)據(jù)中有各條帶的分子量和含量直接把數(shù)據(jù)copy到Excel中，可方便地進(jìn)行各種統(tǒng)計(jì)操作WecandrowasurfaceplotSurfaceplot將圖片轉(zhuǎn)換成jpeg格式保存此程序拍攝的圖片是常用軟件打不開(kāi)的。要先