GB/T 21674-2008豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應試驗方法

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜２１６７４—２００８

豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應試驗方法

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２００８０４０９發(fā)布２００８０６０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜２１６７４—２００８

前言

本標準附錄Ａ為規(guī)范性附錄。

本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本標準由全國動物防疫標準化技術委員會歸口。

本標準起草單位：農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)診斷中心。

本標準主要起草人：田克恭、王宏偉、孫明、王傳彬、陳西釗。

Ⅰ

書

犌犅／犜２１６７４—２００８

引言

豬圓環(huán)病毒依據(jù)其致病性和基因組差異分為無致病性的豬圓環(huán)病毒Ⅰ型（ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅｌ，

ＰＣＶ１）和有致病性的豬圓環(huán)病毒Ⅱ型（ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２，ＰＣＶ２）。ＰＣＶ２是引發(fā)仔豬斷奶后多

系統(tǒng)衰弱綜合征（ｐｏｓｔｗｅａｎｉｎｇｍｕｌｔｉｓｙｓｔｅｍｗａｓｔｉｎｇｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＭＷＳ）的主要病原。該病主要以患畜

生長遲緩、進行性消瘦和多系統(tǒng)病理損傷為特征，給世界各國主要養(yǎng)豬地區(qū)的規(guī)模化養(yǎng)豬業(yè)造成了一定

的經(jīng)濟損失。

Ⅱ

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豬圓環(huán)病毒聚合酶鏈反應試驗方法

１范圍

本標準規(guī)定了豬圓環(huán)病毒（ＰＣＶ）聚合酶鏈反應（ＰＣＲ）檢測方法的技術要求。

本標準適用于豬血清和組織中的豬圓環(huán)病毒檢測，以及其Ⅰ型（ＰＣＶ１）和Ⅱ型（ＰＣＶ２）的鑒別。

２實驗室生物安全要求

試驗操作應在生物安全Ⅱ級（ＢＳＬ２級）以上的實驗室進行。

３實驗材料、儀器設備和試劑

３．１實驗材料

眼科剪、眼科鑷、稱量紙、１０ｍＬ一次性注射器、１．５ｍＬ滅菌離心管、０．２ｍＬ薄壁ＰＣＲ管、瓊脂糖、

５００ｍＬ量筒、５００ｍＬ錐形瓶、吸頭（１０μＬ、２００μＬ、１０００μＬ）、滅菌雙蒸水。

３．２儀器設備

分析天平、高速離心機、真空干燥器、ＰＣＲ擴增儀、電泳儀、電泳槽、紫外凝膠成像儀（或紫外分析

儀）、液氮罐或－７０℃冰箱、微波爐、組織研磨器、－２０℃冰箱、水浴鍋、可調(diào)移液器（最大量程為２μＬ、

２０μＬ、２００μＬ、１０００μＬ）。

３．３試劑

本標準所用試劑，除特殊標注外，均為分析純。

３．３．１消化液（見第Ａ．１章）。

３．３．２２％蛋白酶Ｋ溶液（見第Ａ．２章）。

３．３．３酚三氯甲烷異戊醇混合液（見第Ａ．３章）。

３．３．４２．５ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ（見第Ａ．４章）。

３．３．５１０ｐｍｏｌ／μＬＰＣＶ引物（見第Ａ．５章）。

３．３．６０．５Ｕ／μＬＴａｑＤＮＡ聚合酶（見第Ａ．６章）。

３．３．７１０倍ＰＣＲ緩沖液（見第Ａ．７章）。

３．３．８溴化乙錠（ＥＢ）溶液（見第Ａ．８章）。

３．３．９電泳緩沖液（５０倍）（見第Ａ．９章）。

３．３．１０１％瓊脂糖凝膠（見第Ａ．１０章）。

３．３．１１上樣緩沖液（見第Ａ．１１章）。

３．３．１２異丙醇。

３．３．１３７５％乙醇（見第Ａ．１２章）。

３．３．１４１５ｍｍｏＬ／Ｌ氯化鎂（見第Ａ．１３章）。

３．３．１５滅菌雙蒸水（見第Ａ．１４章）。