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文檔簡介

影響核酸電泳的因素:1.核酸的性質(zhì)2.凝膠孔徑的大小3.電場強(qiáng)度和電場方向4.電泳環(huán)境緩沖液的組成和離子強(qiáng)度直接影響遷移率。核酸電泳的指示劑:核酸電泳常用的指示劑有兩種:⑴溴酚藍(lán)⑵二甲苯青,

DNA的瓊脂糖凝膠電泳

引言:瓊脂糖主要從海洋植物瓊脂中提取來的,為一種聚合線性分子,一般含有多糖、蛋白質(zhì)和鹽等雜質(zhì),雜質(zhì)的含量每個(gè)廠商和批號(hào)的產(chǎn)品不盡相同。對(duì)DNA電泳遷移率的影響也不一樣,經(jīng)化學(xué)修飾后熔點(diǎn)降低的瓊脂糖叫低熔點(diǎn)瓊脂糖,其機(jī)械強(qiáng)度無明顯變化,主要用于DNA的限制酶原位消化、DNA片段回收以及小DNA片段(10~500bP)的分離。瓊脂糖凝膠的孔徑取決于瓊脂糖的濃度。

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

掌握DNA瓊脂糖凝膠電泳的原理和操作方法。

【實(shí)驗(yàn)原理】

DNA分子帶負(fù)電荷,在電場中受到電荷效應(yīng)、分子篩效應(yīng)向正極移動(dòng)過程中,因DNA分子的大小及構(gòu)象差別而呈現(xiàn)遷移位置上的差異,對(duì)于線形DNA分子,其電場中的遷移率與其相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)值成反比,電泳時(shí)加溴化乙錠,其與DNA結(jié)合形成一種熒光絡(luò)合物,在254~365nm紫外光照射下可產(chǎn)生桔紅色的熒光,可用于檢測DNA(此法可觀察到凝膠中2ng的DNA)。如有必要可從凝膠回收DNA片段,用于分子克隆或探針標(biāo)記等操作。瓊脂糖可制成不同孔徑的凝膠,分離DNA的范圍廣,約200bp~50kb?!緦?shí)驗(yàn)材料】1.電泳儀。2.電泳槽。3.紫外透射儀。4.試劑【實(shí)驗(yàn)方法】1.瓊脂糖凝膠板的制備將1~2%瓊脂糖凝膠加熱溶化均勻,冷卻到60~70℃加EB至濃度0.5μg/ml,倒入封好的凝膠槽,厚度約3~5mm,在距底板0.5~1mm的位置放置樣品梳,檢查梳子齒間有無氣泡,可用吸管小心吸出氣泡,待冷卻成形后取出梳子及隔板,放入水平電泳槽中,緩沖液淹沒過膠1~2mm為止。2.加樣樣品中加1/5體積的上樣緩沖液,混勻,取10~15μl加入凝膠點(diǎn)樣孔中,同時(shí)要設(shè)立合適的DNA相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物。3.電泳電壓<10V/cm,電泳至溴酚藍(lán)移出樣品槽到凝膠板的2/3距離時(shí),關(guān)閉電源。4.取出凝膠塊,置紫外透射反射分析儀上觀察,即可見桔紅色DNA區(qū)帶?!緦?shí)驗(yàn)思考】1.影響DNA片段瓊脂糖

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