第七章病理制片

病理技術(shù)在醫(yī)學科研中的應用病理學科是一門基礎(chǔ)與臨床之間起著橋梁作用的重要學科，病理研究方法在技術(shù)工作上又是多方面的，有尸體解剖、大體標本的制作、制片（石臘切片、冰凍切片、半薄切片、超薄切片等）、組織化學方法，免疫酶標技術(shù)、熒光技術(shù)、攝影技術(shù)等。

作為實驗技術(shù)人員大量的工作是病理制片技術(shù)，即常規(guī)病理切片、特殊染色，以供教學、科研、臨床活檢診斷之用。

第一章

病理技術(shù)的應用范圍

幫助臨床查明死因（原因不明的死亡）手術(shù)后病變標本，以明確診斷（臨床活檢）提供教學、科研的資料第一節(jié)組織制片的概述組織制片技術(shù)的應用，從1665年由HOOk發(fā)現(xiàn)細胞開始，已有300多年的歷史。最早應用冰凍切片；隨后又進一步利用石蠟的硬度，以石蠟包埋組織，制成石臘切片；后來又利用明膠、火棉膠、碳蠟和塑料等物質(zhì)的韌性，以其包埋組織而制作切片。組織制片技術(shù)隨著生物學和醫(yī)學的發(fā)展而發(fā)展。切片染色方法可以顯示不同細胞和組織形態(tài)，以及細胞和組織中某些化學成分含量的變化。因此，組織制片技術(shù)是教學、醫(yī)學和科研中不可缺少的一個組成部分。第二節(jié)制片的種類1、組織切片法

任何組織切片必須依靠切片機將組織切成薄片（厚度以μm計），再進行染色而得到結(jié)果。在切成薄片以前必須設(shè)法使組織內(nèi)部滲入足夠的支持物質(zhì)，使組織保持一定的硬度，然后使用切片機進行切片。滲透到組織中的支持劑（物質(zhì)）有多種，如石臘、明膠、火棉膠和塑料等。冰凍組織切片法是直接利用快速冷凍法進行切片。2、組織非切片法

不用切片機，不經(jīng)過切片手續(xù)而制成組織切片的方法，包括整體封藏法、浮片法、壓碎法和組織直接印片法。這些方法操作簡單而快，可根據(jù)制片的需要進行選擇使用。第三節(jié)制片方法的程序組織切片法制作過程中的各種操作1、取材與固定

取材是根據(jù)實驗的目的和要求及病變程度而合理取得組織材料。固定是用化學藥品把組織原來的結(jié)構(gòu)保存下來，以便觀察研究之用，固定劑同時具有硬化細胞組織的作用，使制片便于進行。2、洗滌與脫水

洗滌是把滲入組織中的固定劑洗去，防止染色中的結(jié)晶產(chǎn)生。脫水是驅(qū)除組織中的水分，以利于透明和浸蠟。3、透明與浸蠟（透蠟）脫水后的組織中水分已被透明可代替，而有利于浸蠟。浸蠟的目的是使組織有一定的硬度而有利于切片和細胞組織保持一定的生活時狀態(tài)。4、包埋與切片

用石蠟和其他包埋劑將組織包繞一定的形狀以便于切片。將包埋好的組織塊用切片機切成一定的厚度（以μm計）。5、貼片（展片、撈片）和染色將已切妥的切片在溫水中展平整后用載玻片貼上，稍晾趕后再烤片。染色可使細胞和組織被染上不同的顏色而產(chǎn)生一定的折射率，便于顯微鏡觀察。6、封片

切片染色后用膠類物質(zhì)將其封固，以利于長期保存。二、組織切片的主要程序

1.標本切開或取厚塊→組織固定→固定后處理→（石臘切片法）脫水→透明→浸蠟→包埋→切片→粘片→脫蠟→各級乙醇→水洗→常規(guī)染色或特殊染色→脫水→透明→樹膠封片2．標本切開或取厚塊→組織固定（冰凍切片法）→冰凍切片→粘片→乙醇固定及水洗→常規(guī)染色→脫水→透明→樹膠封片。第二章

固定、固定液和取材第一節(jié)組織固定方法在制作組織切片的過程中，首先將組織充分固定后才能進行制片，尤其對石蠟切片，這是不可少的重要步驟。1、固定的意義

就是使要觀察的組織構(gòu)造盡量接近于它生前的正常狀態(tài)。2、組織固定的目的

1）迅速防止組織，細胞的死后變化，防止自溶與腐敗，以保持組織和細胞與正常生活時的形態(tài)相似。2）使細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等各種成分轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，以保持它原有的結(jié)構(gòu)與生活時相仿。3）使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來，而產(chǎn)生不同的折射率，造成光學上的差異，以便染色后易于鑒別和觀察。4）固定劑兼有硬化作用，使組織硬化增加組織硬義，便于制片。

5）防止細胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態(tài)結(jié)構(gòu)。6）經(jīng)過固定的組織，能對染料產(chǎn)生不同的親和力而著色清晰，便于辯認。由于固定的目的是在于盡量使組織和細胞保持與生活時相仿的成分和形態(tài)。因此，固定的組織愈新鮮愈好，固定組織時，應使用足量的固定液，其固定液的量一般不少于組織塊總體積的4倍以上。3、固定劑的性質(zhì)

為了能夠達到固定的目的，必須具備以下的性質(zhì)：1）迅速滲入組織而固定原生質(zhì)，使短期解剖的組織形態(tài)不至于有較大變化。

2）固定液有相當?shù)臐B透力，對組織各部分的滲透力相等，可使組織內(nèi)外完全固定。

3）使組織細胞中不至于因固定引起人為的改變。

4）在凝固原生質(zhì)以后，增加細胞對于各種穿透的抵抗力，不至于因以后的處理而使固定后的原生質(zhì)變形。5）盡可能避免使組織膨脹或收縮。

6）能使細胞內(nèi)的成分（蛋白質(zhì)）凝固或沉淀下來。

7）增加細胞內(nèi)含物的折光程度，易于鑒別。增加媒染作用和染色能力。

8）使組織變硬，適于制片，但又不使材料太堅硬而松脆。

9）使組織充分固定，便于保存。第二節(jié)介紹幾種常見固定液

固定劑有簡單固定劑（液）和混合固定劑兩類。作為較好的固定液，首先有強滲透力，能迅速地滲入組織內(nèi)部；其次不會使組織過渡收縮或膨脹，并能使組織內(nèi)易觀察的成分得以凝固為不溶性物質(zhì)；最后能使組織達到一定硬度，獲得較佳的折光率和對某些染料具有較強的親和力。一、簡單（單純）固定液

1、甲醛（Ｆormeldehyde）

甲醛（福爾馬林）為一種無色氣體，溶于水成為甲醛水溶液，甲醛是一種還原劑，極易揮發(fā)旦有強烈刺激性氣味。在平時常用的甲醛濃度為10%，這是指以10ml甲醛加入90ml的水配成的，此液實際上只有4%的甲醛。

甲醛水溶液滲透力強，固定均勻，對組織收縮較少。但經(jīng)乙醇脫水時收縮很大，它能使組織硬化并增加組織的彈性。固定厚度適當?shù)慕M織，較為適宜。因早醛為非沉淀性固定劑，它不能使白蛋的及抗蛋白沉淀；但可與蛋白質(zhì)化合，對脂肪，神經(jīng)，及髓鞘的固定很好，也可固定高爾基體、線粒體，又是復糖的保存劑，使肝糖元變?yōu)槲⒓毜念w粒團。

使用甲醛固定的陳舊組織，以多血的贓器如脾、肝等，較易發(fā)生黑色或棕黑色的沉淀，稱甲醛色素。2、乙醇（Ｅthylalcohol）

乙醇為無色液體，可以水在任何比例下混合。它是一種還原劑，很易被氧化為乙醛，在變?yōu)榇姿?，所以不能與鉻酸、重鉻酸鉀、鋨酸等氧化劑混合。

用于固定時以80%—95%的濃度為好，它具有固定硬化脫水等多種作用。高濃度乙醇固定的組織硬化顯著，組織在高濃度乙醇中留置過久，易變脆，也使組織收縮明顯，均可縮小原組織體積的20%。因70%乙醇可較久的保存組織。另外，乙醇其滲透力較弱，能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白。因此，乙醇除固定作用外，還具有硬化和脫水作用，所以它在制片過程中用途很大。3、醋酸（Ａceticacid）

醋酸又名乙酸，是帶有刺激味的無色液體，因在室溫15℃時常結(jié)成冰狀——冰醋酸。特性：

（1）在15℃時成冰狀結(jié)晶，有刺激性味，可溶水、乙醇一般配成5％作為混合固定液。（2）醋酸只能沉淀核蛋白，對染色質(zhì)，固定較好，對白蛋白、球蛋白，固定不佳。對脂肪、糖元不能固定。

（3）醋酸能使組織膨脹，因此，可抵償因乙醇、升汞、甲醛等固定液引起的組織收縮和硬化，故常配成混合固定液。

（4）醋酸穿透速度最快，米粒大的組織在單純醋酸固定液中1—2h即可。5％醋酸的pＨ值在2≈8，此時可停止細菌和酶的活動，可防止組織自溶變性。4、氯化汞（Ｍercurybichloride）

氯化汞俗稱升汞。為白色粉末或針狀結(jié)晶，有劇毒，必須嚴格保管及注意使用。通常用其飽和水溶液，在室溫的水中飽和度為5%—7%。特性：

（1）能沉淀蛋白質(zhì)，它不能固定脂肪、類脂和糖類。

（2）穿透力較弱，單獨使用可使組織收縮。因此，多與醋酸和鉻鹽（重鉻酸鉀）配成混合固定液，組織宜薄而小2—3毫米，固定6—18h。

（3）升汞混合液固定的組織對于細胞的結(jié)構(gòu)，特別是核的細微結(jié)構(gòu)，顯示由為清晰。

（4）經(jīng)升汞固定的組織易產(chǎn)生汞鹽的沉著（為棕黑色結(jié)晶）易損害切片刀，因此染色前必須脫汞。5、苦味酸（Ｐicricacid）

苦味酸是一種黃色結(jié)晶，是一種相當強的酸。它在水中的溶解度隨室溫而變化，約在0.9—1.2%，在空氣中能自燃，在密閉器中能劇裂爆炸。為使用安全起見，常制成飽和水溶液貯藏保存。特性:

1）能沉淀蛋白質(zhì)，但對脂肪和類脂無固定作用。

2）穿透力很慢，細胞收縮顯著，但不會使組織硬化。

3）有軟化皮膚的作用，配制的Bouin氏液對頭皮及全身皮膚制片效果甚好。

4）苦味酸固定的組織、固定時間太久會影響HE染色（苦味酸對堿性染料不易著色）。

5）苦味酸酒精飽和液為糖元較好的沉淀劑。6、丙酮

丙酮又名醋酮或本酮，極易揮發(fā)、易燃的無色液體，能與水、醇、氯仿、醚及多種溶液混合。特性：

1）它可以作固定劑，又可作脫水劑，穿透速度快，可使蛋白質(zhì)沉淀凝固，2毫米以下的組織固定半小時至1小時即可。

2）可引起組織較強的收縮使之變硬，對核固定不佳。

3）對某些酶的固定很好，如堿性磷酸酶、酸性磷酸酶等。

4）丙酮一般多與氯化汞、甲醛混合液使用，先用低濃度丙酮再經(jīng)高濃度丙酮固定以減少組織收縮和過度硬化。7、重鉻酸鉀

1）為橙紅色結(jié)晶，有毒，是強氧化劑，不能與酒精等還原劑混合，常配成0.5%水溶液固定組織。

2）重鉻酸鉀單獨固定組織不能沉淀蛋白質(zhì)，但加入冰醋酸轉(zhuǎn)變?yōu)殂t酸，（即酸化重鉻酸鉀），可使蛋白質(zhì)凝固沉淀。3）重絡(luò)酸鉀與甲醛混合（臨用時配過久失效）為未酸化的重鉻酸鉀固定劑，是固定線粒體、高爾基復合體和嗜鉻細胞等優(yōu)良固定劑，若配成Eenker氏液，能很好的固定細胞質(zhì)、胞核及染色體。

4）重鉻酸鉀穿透速度快，固定組織收縮很小，但經(jīng)酒精脫水時都有明顯收縮。經(jīng)重絡(luò)酸鉀固定的組織必須流水充分洗滌（6—12h），否則影響染色。

5）經(jīng)重鉻酸鉀固定的組織，對酸性染料，如伊紅染色良好，但對堿性料染，如蘇木素較差，若加入升汞及醋酸等，則對細胞核染色極佳。

以上敘述了幾種單純固定液的性質(zhì)和用途，它們各有其優(yōu)缺點，但單獨使用的不多，而混合固定液的應用更為廣泛。單獨固定液如重鉻酸鉀等單獨應用效果不好，若與其他固定劑混合就可以成為優(yōu)良的固定液。二、介紹幾種常用的混合固定液1、乙醇——甲醛液（AF液）

配制：95%或無水乙醇90ml加入40%并裝甲醛10ml為常用固定液，取材后立即入此固定液。

此液兼有脫水作用，用于固定肥大細胞和糖元較好，米粒大小固定4—6h，大塊組織12—24h，固定后不經(jīng)水洗，直接放入95%酒精開始脫水。2、AAF液

配制:純酒精85ml+醋酸5ml+甲醛10ml3、Ｚenker氏液

配制:重鉻酸鉀2.5g+升汞5g+蒸餾水100ml加溫溶解，冷卻過濾，貯于棕色瓶內(nèi)，成為貯存液。

用時取此液臨95ml再加入冰醋酸5ml即成。

Ｚenker氏液為組織學、細胞學、病理學常用的固定液，多用于固定一般組織，能使細胞核和細胞漿染色較為清晰，固定時間12—24h，然后沖洗24h，切片脫臘后需脫汞（浸入5%碘酒精10’），脫碘（5%硫代硫酸鈉）→流水洗。4、Bouin氏液

配制

苦味酸飽和液75ml+甲醛25ml+冰醋酸5ml

此液滲透快，組織收縮小，固定均勻，此液為常用固定液。它對肝、皮膚、胰臟特染效果好，但此液固定過久對堿性染料的著色有影響。5、Garnay氏液

配制

純酒精60ml+氯仿30ml+醋酸10ml為細胞極好的固定液，對淋巴組織及腺體固定很好，米粒大的組織固定1—2h，也適宜RNA、DNA及糧元的固定。6、甲醛——生理鹽水

配制

甲醛10ml+生理鹽水90mlPH值為7此固定液是應用最廣的一種，它可以保護脂類和細胞核。在作酸性染色時，入Ｖ-Ｇ，或三重染色之前，還可以再使用第2次固定。第六章洗滌、脫水、

透明、浸蠟和包埋、切片第一節(jié)組織洗滌一、洗滌的目的

組織在固定后一定要把滲透到里面的固定液洗去，然后再進行下一步過程。為防止組織中留有較多的固定液而影響脫水劑，甚至可在組織中發(fā)生沉淀物或結(jié)晶而影響觀察，特別是對陳舊性標本更應注意流水沖洗，盡可能減少組織中的酸性程度和甲醛色素。對混合性固定液，更應及時洗滌，有利于脫水直至切片和染色。二、洗滌的方法1．固定劑以水配制者用流水沖洗，可使組織中的固定液隨時溢出和隨時洗去。常用的固定劑是甲醛液（10％甲醛水液），尸檢組織、大動物組織沖洗時間為24ｈ左右，小動物組織沖洗時間為2--10ｈ左右。

2．固定劑含乙醇者乙醇或乙醇混合液固定液者，一般不要求沖洗，如需沖洗必需采用與固定劑中的乙醇濃度相近的乙醇沖洗，不可用水沖洗，也不應用濃度相差很大的乙醇沖洗。三、特殊固定液洗滌法1．重鉻酸鉀用重鉻酸鉀固定的組織可用流水沖洗12--24ｈ，或用亞硫酸，或用1％含水氯溶液進行洗滌。

2．苦味酸含苦味酸固定的組織，可用50％或70％乙醇浸洗。

3．氯化汞用氯化汞固定的組織內(nèi)常有一種沉淀物生成，呈棱形或不規(guī)則或略圓的塊狀物，棱形物被認為氯化亞汞，不規(guī)則物可能是金屬汞，此種結(jié)晶必需洗去，否則會使組織發(fā)脆，或染色不良。第二節(jié)組織脫水一、脫水的目的和原則

組織經(jīng)固定和水洗后，會有大量水分，而水與苯根本不相融合，所以組織在透明前必須經(jīng)過脫水這一環(huán)節(jié)。就是說用某些溶劑逐步將組織塊吸收的水分置換出來，以利于透明劑和石蠟或火綿膠的滲入，這一過程叫脫水。1．尸檢及活檢有條件時，將組織分別進行脫水，如腦、胰腺、肌肉、胸腺或淋巴結(jié)、肝、脾等組織。因為脫水時間差異性較大，最好是單獨處理。

2．動物組織應區(qū)分動物大、小，如狗組織接近新生兒組織，大白鼠和小白鼠也有差異，前者需時稍長，后者則較短。3．脫水時間與脫水劑的關(guān)系脫水劑的新舊（純度）影響脫水時間，必須靈活掌握。

4．穿刺組織如腎穿刺、徑胃鏡取得組織等，因組織塊很小，常規(guī)用擦鏡紙包裹，防止丟失。二、脫水劑的種類和效果

1．非石蠟溶劑的脫水劑如乙醇和丙酮等，其組織在脫水后必須再經(jīng)二甲苯透明才能浸蠟。

2．脫水兼石蠟溶劑的脫水劑如正丁醇等組織在脫水后即可直接浸蠟，不比經(jīng)過中間溶劑如二甲苯之類的試劑。

脫水種類可根據(jù)須要選擇，目前在病理診斷和實驗性動物研究中，較多地采用乙醇脫水、二甲苯透明和石蠟浸透組織。

脫水方法甚多，最重要的是不應驟然進行，不能操之過急，否則可引起組織強烈收縮，或使組織發(fā)生變形，而得不到滿意切片。三、常用脫水劑的使用方法1、乙醇（Ａlcohol酒精）

沸點78.4℃，為最常用的脫水劑。脫水能力強，并能使組織硬化，能較好地與二甲苯透明劑相溶合。

其缺點是易使組織收縮、變脆。導致這些缺點是因為組織在高濃度乙醇（無水乙醇）中停留時間較長，或者加溫脫水的溫度過高。在日常中一般脫水從70%乙醇（人體組織從75%）開始，由低向高的梯度脫水。

一般的脫水順序是：70%、80%、90%、95%①、95%②、無水乙醇①、無水乙醇②。只有脫水充分才能在透明劑中透明。2、丙酮（Ａcetone）

沸點為56℃。脫水作用比乙醇強，但是對組織的收縮較大，而價格較高，故一般少用于組織的脫水，主要用于快速脫水或固定兼脫水。脫水時間1—3h。3、正丁醇（Ｎ-Ｂutyl-alcohol）

為無色液體，沸點100—118℃，微溶于水，在100ml水中能溶8.3g，故脫水能力較弱，但能與水、乙醇及石臘混合，故這種脫水的組織塊，可直接浸蠟包埋。

這種脫水劑兼透明劑的最大優(yōu)點是很少引起組織塊的收縮及變脆。第三節(jié)組織透明一、透明的目的

在制片過程中有兩次透明，第一次是脫水以后組織塊的透明，第二次透明是染色以后切片的透明。

組織塊透明的目的是便于透蠟包埋，切片透明的目的就是有利光線的透過，便于顯微鏡下的觀察。組織塊在浸蠟前，必須通過透明以便使石蠟浸入組織內(nèi)，起充分支持硬化組織塊的作用，以便完整切片。

通常根據(jù)透明時間與肉眼觀察相結(jié)合判斷透明程度。二、常用透明劑的種類和使用方法

最常用透明劑的種類較多，但使用最多的是二甲苯。1、二甲苯

易揮發(fā)，無色透明液體，長期接觸對呼吸粘膜有刺激作用。透明能力強，易使組織收縮、變脆，故組織塊在二甲苯中不宜久留，特別對小動物組織材料必須嚴格控制好。2、甲苯

性質(zhì)雖同二甲苯，但透明較慢，時間比二甲苯長一倍多，也易變脆。有時用以代替二甲苯。3、苯

苯的用途與二甲苯相似，對組織有較小收縮，是較好的透明劑。但也易揮發(fā)，易燃。吸入苯能引起中毒，可以較小使用。4、氯仿

即三氯甲烷。其透明能力比二甲苯及苯差，透明時間長達24h。不易使組織變脆，能溶于醇、醚、苯等，微溶于水、極易揮發(fā)。多用于大塊組織的透明。5、香柏油

對組織收縮及硬化程度比任何透明劑小，但透明時間長，小塊組織至少12h以上，缺點它不能溶解石臘，透明以后還需二甲苯補充透明。6、松節(jié)油、汽油

可作脫水，又可透明，但需用優(yōu)質(zhì)（無雜質(zhì)）的工業(yè)汽油也不行，在條件困難時可試用。第四節(jié)、組織浸蠟（透蠟）浸蠟的目的和方法

組織經(jīng)過脫水、透明后要用石蠟、火棉膠、碳蠟等支持劑透入內(nèi)部,使其變硬并將組織包埋進去以利于切片和觀察，這個過程稱為“透入（浸蠟）”或“包埋”。

以石蠟切片的透入即（浸蠟）為例，其目的就是除去組織中“透明劑（如二甲苯等）而代之以石臘，并滲入組織內(nèi)部，把軟組織變?yōu)檫m當硬度的蠟塊，以便切成薄片。

浸蠟的方法是將組織經(jīng)過二甲苯透明以后，并立即投入到液體石蠟中去。在浸蠟時組織必須經(jīng)過數(shù)次純石蠟（石蠟Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），這樣可以使石蠟中剩余的透明劑完全除盡，以免影響切片質(zhì)量。浸蠟劑的種類

1、石蠟石蠟有高熔點和低熔點之分，一般普遍應用熔點為56℃以上的石蠟。低熔點在54℃以下，用于酶的顯示和保存抗原活性。

石蠟分軟蠟（52℃—54℃），硬蠟（56℃—58℃），蜂蠟60℃。

一般氣溫用硬蠟，氣溫低時用軟蠟。

2、火棉膠目前使用火棉膠透入組織較少，用于染色前的覆蓋液較多。

3、碳蠟

4、明膠第五節(jié)組織包埋

石蠟是動物植物、人體組織制片技術(shù)中極重要且應用最廣的包埋劑。包埋蠟須在溫箱內(nèi)經(jīng)多次熔化沉淀后的干凈蠟，包埋較為理想，其包埋蠟熔點為56℃—58℃。

石蠟包埋的注意點：

（1）動作要迅速：特別是冬天，在有多塊組織要包埋時，蠟很快會凝固，就包埋不成。

（2）切面向下埋：組織包埋要平整或按要求包埋。

（3）包埋的鑷子必須加溫，鑷子溫度又不能太高，否則會燒壞組織。

（4）包埋后待蠟塊冷卻后再放入冷水中，不能太快，否則變形有氣泡。

（5）包埋時組織不能重疊擠壓，否則切片不全會影響診斷。

（6）包埋用的蠟一般為工業(yè)蠟，氣候炎熱可用熔點高石蠟（60℃）

第六節(jié)

組織脫水透明和浸蠟時間

各種組織的脫水透明和浸蠟時間

表6-1尸體解剖組織脫水，透明和浸蠟時間表程序項目時間分配1234567891011121375%乙醇85%乙醇95%乙醇95%乙醇無水乙醇無水乙醇無水乙醇二甲苯二甲苯二甲苯石蠟56℃—58℃石蠟56℃—58℃石蠟56℃—58℃時間長短均可

5—10ｈ5—10ｈ5—10ｈ2—5ｈ

2—5ｈ2—5ｈ30min30min--1ｈ30min--1ｈ1--2ｈ1--2ｈ2--4ｈ表6-2動物（鼠）組織脫水，透明和浸蠟時間表

程序項目時間分配1234567891011121375%乙醇85%乙醇95%乙醇95%乙醇無水乙醇無水乙醇無水乙醇二甲苯二甲苯二甲苯石蠟56℃—58℃石蠟56℃—58℃石蠟56℃—58℃時間長短均可

2—5ｈ2—5ｈ2—5ｈ

20min30min30min15min10min10min1ｈ1--2ｈ1--2ｈ表6-3外檢組織脫水，透明和浸蠟時間表程序項目時間分配1234567891011121370%乙醇80%乙醇90%乙醇95%乙醇95%乙醇無水乙醇無水乙醇二甲苯二甲苯二甲苯石蠟56℃—58℃石蠟56℃—58℃石蠟56℃—58℃3h

1—2ｈ1—2ｈ1—2ｈ1—2ｈ1—2ｈ1—2ｈ1ｈ1—2ｈ1--2ｈ1--2ｈ1—2ｈ2—4ｈ第七節(jié)

組織切片

一、石蠟切片法

1、切片前的準備工作

石蠟切片是以石蠟作為組織的支持媒介作用。應先將包埋的每塊組織周圍過多的石蠟切去，組織四周留2mm的石蠟邊。

在常規(guī)實驗室中須備以下用品

⑴經(jīng)過清潔液浸泡過的載玻片。

⑵展片盆、染色架、蛋白甘油。

⑶大、中號毛筆、眼科鑷（彎）

2、切片制作過程

⑴將預先冷卻的組織裝在切片機固定器上。

⑵切片組織經(jīng)過粗切，待組織充分切完整，右手旋動切片機把，切片帶出來之后，用毛筆輕輕托起，再用眼科鑷輕攝蠟片，以正面放入展片盆中，待攤平整后撈片。

⑶撈片在載玻片上的二分之一以處。

⑷切片附貼后，放在空氣中稍涼干，即可進行烤片。

3、切片的注意事項

⑴凡是陳舊、腐敗或干枯的組織不易制好切片。

⑵固定失時或固定不當?shù)慕M織，染色時常出現(xiàn)核質(zhì)著色較淺、輪廓不清，出現(xiàn)不等的片狀發(fā)白區(qū)。

⑶組織脫水，透明和浸蠟過渡，會造成過硬、變脆，特別是動物組織應嚴格控制。

⑷切片出現(xiàn)橫皺紋常多見于組織固定不牢，或切片刀固定不緊。

⑸切片刀不鋒利，切片時會自行卷起或皺起，更不能順利地將切片聯(lián)結(jié)成蠟帶。切片刀如有缺口存在，更易造成切片斷裂、破碎