分析化學(xué)課件-儀器實驗

實驗十七高效液相色譜外標(biāo)法測定碳酸飲料中苯甲酸

實驗?zāi)康牧私釧gilent高效液相色譜儀外標(biāo)法定量測定飲料中苯甲酸的操作方法。

實驗原理苯甲酸是廣泛使用的食品防腐劑之一，我國的食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB2760-1996中規(guī)定，在碳酸飲料中苯甲酸的最大使用量為0.2g/kg。反相高效液相色譜可用于各種食品中的苯甲酸分離檢測，當(dāng)流動相為甲醇：0.02mol/L乙酸銨（5%：95%）、檢測波長230nm時，用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時間定性，可很快檢測出測試溶液中的苯甲酸，以色譜峰面積的外標(biāo)法能準(zhǔn)確測定此種物質(zhì)的含量。在用高效液相色譜法測定碳酸飲料中苯甲酸時，必須先進(jìn)行脫氣，以避免將二氧化碳?xì)怏w引入色譜柱干擾測定。主要儀器和試劑Agilent高效液相色譜儀，HypersilODS-C18柱（5μm，4.6×100mm），MWD檢測器，50μl微量注射器。超聲波清洗器。

甲醇（分析純）。0.02mol／L乙酸銨溶液。100μg/mL苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。樣品測試溶液：市售碳酸飲料。

所用溶液均在使用前經(jīng)濾膜（0.45μm）過濾。

色譜條件：柱溫25℃；流動相：甲醇∶0.02mol／L乙酸銨溶液=5∶95；檢測波長：230nm；流速：1.0ml／min；進(jìn)樣量：20μL。

實驗步驟（1）取市售碳酸飲料約10mL于50mL燒杯中，超聲波脫氣30min后，準(zhǔn)確吸取1.00ml，經(jīng)濾膜（0.45μm）過濾濾入10mL比色管，以經(jīng)濾膜（0.45μm）過濾的高純水定容于5mL。（2）用100μg/mL苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液分別配制10.0、25.0、50.0μg/mL苯甲酸工作溶液（水溶液）。（3）開機(jī)，打開色譜工作站。（4）打開脫氣閥，以5mL/min流速對流動相進(jìn)行脫氣。（5）脫氣完畢后，調(diào)節(jié)流動相流量為1.0mL/min，切換脫氣閥，打開柱溫控制開關(guān)，打開UV檢測器開關(guān)。按色譜條件設(shè)置相應(yīng)參數(shù)。（6）待基線平衡后，分別用苯甲酸工作溶液進(jìn)樣20μl，制備外標(biāo)法校正曲線。

（7）進(jìn)樣20μl樣品測試溶液，得到的色譜圖由校正曲線確定樣品中苯甲酸的含量。（8）實驗結(jié)束后，在傍路條件下，先后分別以水和甲醇沖洗進(jìn)樣口數(shù)次。（9）在流動相流量為1.0mL/min的條件下，先以水清洗色譜柱20min，再以甲醇清洗色譜柱10min。（10）關(guān)閉