高中生物2.1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)第二課時(shí)

微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的接種

將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過程叫做接種。

微生物常用接種方法有：平板劃線法、稀釋涂布平板法。(斜面接種、穿刺接種等）接種工具和方法接種和分離工具1．接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.5.玻璃涂棒6.接種圈7.接種鋤8.小解剖刀單個(gè)細(xì)胞單個(gè)菌落從混雜的微生物群體中獲得只含某一種微生物的群體的過程。※微生物的分離純化1、純化原理：常用接種方法平板劃線法操作核心防止雜菌污染，保持培養(yǎng)物純度2、微生物接種和純化的方法稀釋涂布平板法微生物群分散㈡.純化大腸桿菌1.平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。

在數(shù)次劃線后培養(yǎng),可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落。

原因：一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個(gè)條狀的菌落。答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個(gè)菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。問題討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。C下列操作與無菌技術(shù)無關(guān)的是（）A.接種前用火焰灼燒接種環(huán)B.接種前用酒精擦拭雙手C.將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)D.接種在酒精燈的火焰旁完成將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。2.稀釋涂布平板法2.稀釋涂布平板法的操作方法（1）系列稀釋操作（2）涂布平板操作注意1.將涂布器末端浸在盛有體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精的燒杯中。取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。2.操作中一定要注意防火！不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。

討論：涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。第2步應(yīng)該如何進(jìn)行無菌操作？涂布平板操作第2步要用無菌移液管，操作時(shí)左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將移液管中的菌液迅速滴加到培養(yǎng)基表面，并蓋上皿蓋。答：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。三、微生物的恒溫培養(yǎng)將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37℃恒溫箱中，培養(yǎng)12h和24h后，分別觀察記錄結(jié)果。實(shí)驗(yàn)組對照組菌落⑴.定義：單個(gè)或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，會形成一個(gè)肉眼可見的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。（P14,P18)⑵.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。⑶.功能：每種微生物在一定條件下所形成的菌落，可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)。幾種菌落及其形態(tài)幾種菌落及其形態(tài)四、結(jié)果分析與評價(jià)

1、未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如果有菌落生長，說明了什么？

（對照組）沒有。若有菌落，說明培養(yǎng)基被污染。2、在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，你是否觀察到了獨(dú)立的菌落？這些菌落的顏色、形狀和大小相似嗎？

是。相似。如在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。3、培養(yǎng)12h和24h后，觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同嗎？如果不同，請分析產(chǎn)生差異的原因。

菌落的大小不同，菌落分布位置相同。原因是時(shí)間越長，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大。4、如果你在培養(yǎng)基上觀察到了不同形態(tài)的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的嗎？

說明有雜菌污染。可能原因：滅菌不徹底、接種過程或培養(yǎng)過程中有雜菌污染。四、結(jié)果分析與評價(jià)

㈠.培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。㈡.接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。㈢.是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同