自動(dòng)洗板機(jī)與ELISA洗滌問題的解決

自動(dòng)洗板機(jī)與ELISA洗滌問題的解決上海精睿生物科技發(fā)展有限公司上海市鑫都路2699弄80號(hào)102室聯(lián)系電話真司網(wǎng)址：www.精睿.中國免費(fèi)咨詢電話：

400-820-3840酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay簡稱ELISA)是在免疫酶技術(shù)(immunoenzymatictechniques)上發(fā)展起來的一種新型免疫測定技術(shù)。ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。ELISA基本流程（上）1.包被：用包被液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為0.5～20μg／ml，按100ul/孔加入酶標(biāo)板，4℃包被過夜。2.洗板：次日棄去孔內(nèi)液體，除去殘留液體，加入洗滌液（約280-300ul/孔），漂洗2-3次，每次3-5min。3.封閉：按200-250ul/孔加入封閉液，室溫2-3小時(shí)或37℃1-2小時(shí)，也可4℃封閉過夜，然后棄去孔內(nèi)封閉液。4.樣品處理：用洗滌液或樣品稀釋液將待檢樣品(含未知抗原)稀釋至所需濃度5.標(biāo)準(zhǔn)液：用洗滌液或樣品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至所需濃度（定性分析可省略本步驟）；ELISA基本流程（下）6.加樣：按排列順序依次加入50-100ul/孔稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)液、處理過的待檢樣品、陰性對照及陽性對照，室溫或37℃

孵育30-60min；7.洗板：同步驟2；8.加酶標(biāo)抗體：酶標(biāo)抗體的稀釋按產(chǎn)品說明書，按50-100ul/孔加入新鮮配制的酶標(biāo)抗體，室溫或37℃孵育1小時(shí)；9.洗板：同步驟210.加底物液顯色：按100-150ul/孔加入新配制的TMB底物溶液，室溫避光反應(yīng)15～30分鐘。11.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入50ul的終止液。12.結(jié)果判定：在酶標(biāo)儀上于405nm(若以ABTS顯色，則410nm)處測OD值。檢測時(shí)以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若樣品孔中的OD值大于陰性對照孔的2.1倍，即為陽性。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）的洗滌在酶聯(lián)免疫試驗(yàn)中，洗板是非常重要的過程。酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(ELISA)洗滌過程雖不是一個(gè)反應(yīng)過程，但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELISA就是通過洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的，通過洗滌以清除殘留在微孔板中未能與固相抗原或抗體相結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中的非特異性吸附于固相載體上的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附是普遍的，在ELISA測定的反應(yīng)過程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附，洗滌時(shí)又應(yīng)將這些非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌掉。洗滌如不徹底，特別是最后一次，如有酶結(jié)合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如血清標(biāo)本內(nèi)的非特異性IgG吸附在固體上而未被洗滌，也將與酶標(biāo)抗體作用而產(chǎn)生干擾。在ELISA操作中，洗滌是非常關(guān)鍵的，應(yīng)引起操作者的高度重視。每進(jìn)行一次ELISA，至少有3至4步實(shí)驗(yàn)涉及洗板、每步3至4次，總共十幾次，有一定的工作量和勞動(dòng)強(qiáng)度。手工洗板與機(jī)器洗板通常微孔板條的洗滌主要有兩種方式，一種是手工洗滌，一種是使用洗板機(jī)洗滌。前者對工作量不大的臨床實(shí)驗(yàn)室，可能較為經(jīng)濟(jì)方便，但如操作不規(guī)范，有可能會(huì)造成板孔之間的相互交叉“污染”。因此，使用洗板機(jī)洗滌，不但可減輕實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度，而且有利于保證ELISA測定的特異性。洗板機(jī)經(jīng)過數(shù)十年的發(fā)展，由最初簡單的多頭吸和加液系統(tǒng)，發(fā)展到了今天的融合多種洗滌功能于一身的全自動(dòng)洗板機(jī)，如震蕩、渦流、底部沖洗、兩點(diǎn)吸液、連續(xù)式?jīng)_洗等多種功能方式，并且沖洗壓力、沖洗距離、沖洗時(shí)間可根據(jù)需要來進(jìn)行調(diào)節(jié)，此外有的還具有不同類型微孔形狀的選擇功能。洗板環(huán)境：洗板環(huán)境實(shí)際上是一組有利于改進(jìn)洗滌效果的參數(shù)及洗滌動(dòng)作。對于具體應(yīng)用來說，有的很實(shí)用，效果也不錯(cuò)，如底部沖洗、兩點(diǎn)吸液、震動(dòng)、交叉吸液(漂洗)等；而有的可能實(shí)際洗滌效果并不佳。對洗板參數(shù)和洗滌動(dòng)作的精心全面的設(shè)計(jì)，應(yīng)可以取得很好的洗滌效果。洗板機(jī)洗滌板孔的一般機(jī)制洗板機(jī)洗滌板孔的一般機(jī)制主要涉及到兩個(gè)物理作用過程，一是通過加液和吸液對原板孔中液體的一個(gè)直接稀釋過程，其優(yōu)劣的評價(jià)指標(biāo)是每次吸液后，板孔中液體的殘留量；二是與加液和吸液之間所間隔的時(shí)間有關(guān)的對板孔內(nèi)殘留液體的間接稀釋過程，這個(gè)過程與液體的擴(kuò)散有關(guān)，間隔時(shí)間越長則擴(kuò)散越充分。因此，在洗板機(jī)的研制中，要達(dá)到最佳的洗板效果，就需要圍繞這兩個(gè)方面來做文章。首先要盡可能的降低每次吸液后板孔內(nèi)液體的殘留量。這是評價(jià)洗板機(jī)洗板效果的最為關(guān)鍵的參數(shù)。通常為降低洗板機(jī)每次吸液后的液體殘留量，可采用兩點(diǎn)吸液的方式吸液。其二是加快擴(kuò)散的速率來縮短加液和吸液之間的間隔時(shí)間，同時(shí)保證有充分的擴(kuò)散。通常的措施有震蕩、渦流、底部沖洗和連續(xù)式?jīng)_洗等，適當(dāng)增加震蕩的振幅和頻率可增加擴(kuò)散的充分性。洗板機(jī)的發(fā)展(一)簡易型洗板機(jī)：簡易型也可稱為手動(dòng)式洗板機(jī)，一般由負(fù)壓泵與清洗頭組成，可完成最基本的吸液動(dòng)作和加液動(dòng)作的裝置。這類裝置，成本低，使用方便，工作量不大時(shí)可以使用。(二)自動(dòng)式洗板機(jī)：其基本結(jié)構(gòu)與簡易型洗板機(jī)一樣，一般也是由負(fù)壓泵與清洗頭組成，但有自動(dòng)程序控制功能，儀器可根據(jù)用戶的設(shè)置完成預(yù)定次數(shù)與條數(shù)的洗板，有的具有簡單的儲(chǔ)存功能。主要目的是利用自動(dòng)化技術(shù)，替代手工操作。其中有條式與板式之分。如LABSYSTEM的W4，BIO—RAD早期的1250，拓普公司的DEM—2等。(三)集成環(huán)境式洗板機(jī)：此類洗板機(jī)是隨著ELISA的普遍應(yīng)用，由儀器生產(chǎn)廠商根據(jù)ELISA應(yīng)用專家的建議，結(jié)合各自對洗板技術(shù)的研究而發(fā)展起來的，其特點(diǎn)在于能提供良好的洗板環(huán)境，強(qiáng)調(diào)洗滌效果而非自動(dòng)化，具有一定的智能特性，如LABSYSTEM的ACSENTWASH，拓普的DEM-3等。洗板機(jī)的作用

替代實(shí)驗(yàn)人員工作，減輕實(shí)驗(yàn)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度。ELISA是一項(xiàng)比較成熟經(jīng)典技術(shù)，它是一種非均相免疫分析，即在反應(yīng)中的每一步都有洗滌過程，從而去除未反應(yīng)物質(zhì)和干擾物質(zhì)，ELISA的洗板工作是一項(xiàng)簡單、重復(fù)的機(jī)械工作，完全可以由洗板機(jī)來完成，實(shí)驗(yàn)人員有更多的時(shí)間做更重要的工作。保證ELISA結(jié)果的可重復(fù)性：洗板機(jī)大多是由微電腦控制的，能夠準(zhǔn)確地按照設(shè)定的參數(shù)運(yùn)行，在正確使用和正確運(yùn)行的前提下，結(jié)果的可重復(fù)性是容易得到保證的。有效防止生物實(shí)驗(yàn)危險(xiǎn)因子對環(huán)境的污染：進(jìn)行ELISA檢測時(shí)，經(jīng)常要使用血清、體液、組織等生物材料，任何生物材料都應(yīng)視為傳染性的。洗板機(jī)洗板時(shí)，將所有的廢液吸進(jìn)廢液瓶中，容易進(jìn)行無害化處理。洗板機(jī)的選購時(shí)應(yīng)考慮的因素洗滌功能的充分性：能否提供可選擇的洗板環(huán)境，如洗板次數(shù)、條數(shù)、浸泡時(shí)間等是洗板機(jī)的基本參數(shù)，一般均可滿足。板孔的兼容性與擴(kuò)展性：兼容性主要是對于國內(nèi)不同規(guī)格、尺寸略有差異的微孔板的兼容，儀器應(yīng)具有對微孔板的位置調(diào)節(jié)功能，適應(yīng)國內(nèi)ELISA試劑盒中微孔板條的實(shí)際情況。儀器自身及洗滌效果的可靠性：一是儀器自身的可靠性，保證儀器在使用壽命期內(nèi)可以正常顯示、精確運(yùn)動(dòng)等，這可通過考查儀器生產(chǎn)廠商的技術(shù)與生產(chǎn)實(shí)力來論證；二是洗滌效果的可靠性，即真正達(dá)到代替手工洗滌、甚至優(yōu)于手工洗滌的目的。配件是否充分：廠方是否可以提供常用的、易損的配件，如清洗頭，應(yīng)該8道、12道各備用1個(gè)，并且定期淘汰，像洗液瓶、硅膠管等應(yīng)可方便買到。售后服務(wù)是否及時(shí)、價(jià)格是否合理：洗板機(jī)是使用率相對較高的儀器，單從運(yùn)動(dòng)角度對比，其頻率是酶標(biāo)儀的幾十倍，有的醫(yī)院使用2年就報(bào)廢，原因在于沒有售后服務(wù)或售后服務(wù)價(jià)格太高，有的僅因?yàn)槿鄙僖粋€(gè)配件而使整機(jī)報(bào)廢，十分可惜。故及時(shí)的售后服務(wù)與相對合理的服務(wù)價(jià)格，是購買洗板機(jī)應(yīng)考慮的因素。人機(jī)界面是否友好，最好是中文顯示。JR2008A型96/384多功能自動(dòng)洗板機(jī)JR2008-A型自動(dòng)96/384孔微孔板清洗機(jī)是由上海精睿生物科技發(fā)展有限公司于2008年隆重推出的新一代多功能的微孔反應(yīng)板清洗機(jī)器，由微電腦控制，能夠自動(dòng)完成多種規(guī)格的96孔和384孔酶標(biāo)微孔反應(yīng)的清洗工作，是進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）必不可少的設(shè)備，可廣泛用于從事生命科學(xué)研究工作的科研院所，高等院校以及醫(yī)院、血站、疾病控制中心等單位。

操作步驟開機(jī)：打開電源開關(guān)，儀器進(jìn)行初始化，自動(dòng)提示，然后處于待機(jī)狀態(tài)清洗頭清洗：按下清洗鍵，清洗頭將在清洗槽處進(jìn)行清洗。編程：按下編程鍵，根據(jù)機(jī)器的提示對洗板參數(shù)進(jìn)行設(shè)置，最后保存程序時(shí)將這些參數(shù)保存到設(shè)定的程序中。運(yùn)行：按下增加鍵，減少鍵和確定鍵選擇合適的程序，然后按下運(yùn)行鍵開始洗板。編程既洗滌參數(shù)設(shè)置按下編程鍵，出現(xiàn)選擇板型，96孔或384孔，通過增加或減少鍵進(jìn)行選擇，按確認(rèn)鍵進(jìn)入下一項(xiàng)選擇清洗方式：板洗、條洗、單、雙、逐排清洗通道數(shù)：8、12、16、24清洗條數(shù)：1~12（96孔）；1~24（384）清洗容量：50~400μl；清洗次數(shù)：1~20次暫停時(shí)間：0~60秒浸泡時(shí)間：0~250秒振蕩設(shè)定：1或0吸液時(shí)間：100~10000毫秒吸液方式：直接吸液或旋轉(zhuǎn)吸液浸泡完后是否吸干：是或否最后保存程序。使用JR2008A型自動(dòng)洗板機(jī)時(shí)應(yīng)注意洗液瓶和廢液瓶一定要旋緊，以免漏氣；廢液瓶中的廢液不能超過瓶頸處，一定要及時(shí)清空；酶標(biāo)板一定要放卡在托盤內(nèi)；嚴(yán)守生產(chǎn)質(zhì)量，保證售后服務(wù)精睿公司每一臺(tái)儀器從設(shè)計(jì)加工到出廠，在每一個(gè)零件上、每一個(gè)環(huán)節(jié)中，都體現(xiàn)著精睿人一絲不茍的工作態(tài)度。我們每一臺(tái)出廠的儀器都由高級(jí)工程師親自把關(guān)調(diào)試。售出的每一臺(tái)儀器都由工程師安裝調(diào)試，對操作人員進(jìn)行培訓(xùn)，保證儀器能夠得到正確使用和正常運(yùn)行。我們對洗板機(jī)提供三年的質(zhì)保，難能可貴。（市場中同類產(chǎn)品的質(zhì)保多為一年。）精睿公司免費(fèi)服務(wù)咨詢電話：400-820-3840精睿公司提供ELISA一條龍服務(wù)試劑（反應(yīng)的主體）主要試劑：抗原、抗體、酶輔助試劑：包被液、洗滌液、封閉液、稀釋液、底物液、終止液酶標(biāo)板：96孔和384孔，反應(yīng)的載體洗板機(jī)：可靠實(shí)驗(yàn)的保證酶標(biāo)儀：量化的結(jié)果判定可拆分使用的384孔酶標(biāo)板專利產(chǎn)品高通量（384孔）微型化（80微升）易拆分（使用方便）品種齊全價(jià)格便宜品質(zhì)保證96孔酶標(biāo)板透明板用于ELISA低吸附能力（100~200ng/cm2）中吸附能力（200~300ng/cm2）高吸附能力（300~400ng/cm2）黑色板用于免疫熒光實(shí)驗(yàn)白色板用于自發(fā)光實(shí)驗(yàn)8*12可任意拆分JR-09系列96/384酶標(biāo)儀JR-09系列96/384酶標(biāo)儀采用當(dāng)今先進(jìn)的內(nèi)嵌式計(jì)算機(jī)系統(tǒng)，處理能力大幅提高，使之具備了精準(zhǔn)可靠、快捷穩(wěn)定的卓越性能，能夠閱讀處理96孔和384孔酶標(biāo)反應(yīng)板。其強(qiáng)大的功能支持和新穎的人機(jī)互動(dòng)操作平臺(tái)，給了用戶極其靈活、獨(dú)具個(gè)性的使用感受，

可廣泛應(yīng)用于醫(yī)院臨床診斷、免疫病理檢測、微生物抗原及抗體檢測、寄生蟲病診斷、血液病診斷、內(nèi)分泌障礙測定、植物病蟲害研究學(xué)等領(lǐng)域，是具有國際先進(jìn)水平，在國內(nèi)處于領(lǐng)先地位的新一代高級(jí)自動(dòng)酶標(biāo)儀。多通道加液器精睿更為您提供了完善的高通量實(shí)驗(yàn)的加樣方案：自動(dòng)加樣系統(tǒng)、16/24道排槍。每個(gè)通道獨(dú)立控制，特別設(shè)計(jì)用于384孔微孔板的加樣，也很方便的向96孔板加樣量程有：10~100微升/每通道5~50微升/每通道0