時間分辨熒光法與LC-MS-MS法在毛發(fā)毒品分析中的比較

時間分辨熒光法與LC-MS/MS法在毛發(fā)毒品分析中的比較

摘要：通過對實際工作中收集的涉毒人員頭發(fā)進行分析，從靈敏度、準確度、假陽性及抗體干擾等方面比較時間分辨熒光法和LC-MS/MS法在實際工作中的應用及結果討論。綜合結果表明，液相色譜串聯(lián)質譜法具有更高的靈敏度，可以滿足公安部規(guī)定的閾值要求，快檢設備靈敏度高但準確性不好，抗體干擾，結構類似物質會導致假陽性存在。Keys：毛發(fā)檢測；靈敏度；準確度；假陽性；抗體干擾：Q503，D919.2：AComparisonofTime-ResolvedFluorescenceMethodandLC-MS/MSMethodinHairDrugAnalysisYUANJun-ning(ShanghaikelingInspectionTechnologyCo.,LtdJudicialIdentificationInstitution,Shanghai200123,China)Abstract:Byanalyzingthehairofdrug-relatedpersonnelcollectedinactualwork,theapplicationoftime-resolvedfluorescencemethodandLC-MS/MSmethodinactualworkandthediscussionofresultsarecomparedintermsofsensitivity,accuracy,falsepositiveandantibodyinterference.ThecomprehensiveresultsshowthatliquidchromatographytandemmassspectrometryhashighersensitivityandcanmeetthethresholdrequirementssetbytheMinistryofPublicSecurity.Therapiddetectionequipmenthashighsensitivitybutpooraccuracy,antibodyinterference,andstructurallysimilarsubstanceswillcausefalsepositives.Keywords:Hairdetection;Sensitivity;Accuracy;Falsepositive;Antibodyinterference毒品是我國管制的能夠使人形成癮癖的精神以及麻醉藥品，對個人身心健康、家庭以及社會具有嚴重的危害。根據(jù)《中華人民共和國刑法》第357條規(guī)定，毒品是指鴉片、海洛因、甲基苯丙胺(冰毒)、嗎啡、大麻、可卡因以及國家規(guī)定管制的其他能夠使人形成癮癖的麻醉藥品和精神藥品。一旦濫用，不但給個人生理和心里造成影響，吸毒會上癮，會損害身體健康。還會對家庭和社會造成嚴重影響，吸毒需要資金，需要渠道。都會使自己走上一天不歸路。所以涉毒管控工作迫在眉睫。通過更加先進科學的檢測手段判定是否吸毒已經(jīng)成為警察辦案的必不可少的工具。毒品一經(jīng)吸食將在尿液、血液、唾液、毛發(fā)等留下痕跡，但不同生物檢材吸毒追溯期不同。其中血液，尿液，在人體內的代謝時間短，只能追溯近幾天的涉毒情況。與血、尿等其他生物樣品比，毛發(fā)具有易獲取、易保存、目標物穩(wěn)定、檢出時限長、能反映較長時間（幾個月或幾年）的藥物使用情況等優(yōu)點被廣泛應用。近幾年來，由于毛發(fā)分析在禁毒過程中有更長的追溯期，在進入人體后，會隨著血液循環(huán)進入毛囊，毒品原體及其代謝物會被毛發(fā)中的角質蛋白固定，并穩(wěn)定的保留在毛發(fā)中。記錄吸毒信息的頭發(fā)長出頭皮后，毒品及其代謝物會隨著頭發(fā)的生長從發(fā)根一端往發(fā)梢一端遷移，由此，通過分段檢驗，可以挖掘更長時間內的吸毒信息，被檢測人員的吸毒史[1]。在不斷的實踐過程中，逐步形成了完善的“尿液+唾液+血液+毛發(fā)”四位一體的檢測體系，同時也在評價戒毒效果方面發(fā)揮重大作用[2]。目前傳統(tǒng)的檢測方法還是以專業(yè)實驗室設備檢測（液相色譜串聯(lián)質譜法或高分辨色譜）為主，在實際處理中，高分辨率質譜獲得的數(shù)據(jù)能夠對近似質量數(shù)產(chǎn)生的干擾近似能夠降低，從而降低假陽性，在實際應用中具有定量準確，分析快速以及抗干擾能力強的特點，能夠對毒品分析領域的確證要求較好地滿足[3]。但是實驗室檢測時間周期比較長，專業(yè)性要求高，所以人體毒品樣本的現(xiàn)場快檢設備應運而生，其中時間分辨免疫熒光技術是近兩年來來一項新型免疫檢測技術，既保留了傳統(tǒng)膠體金試紙條的現(xiàn)場快速檢測優(yōu)點，又加入了熒光檢測技術的高靈敏度特點，提高免疫層析方法檢測性能[4]。這種快檢設備時間短，普通人員經(jīng)過簡單培訓也能操作。本文從靈敏度、準確度、假陽性及抗體干擾等方面比較兩種方法在實際工作中的運用。1方法1.1司法鑒定技術規(guī)范SF/ZJD0107025-2018《毛發(fā)中15種毒品及其代謝物的液相色譜-串聯(lián)質譜檢驗方法》[5]。1.2時間分辨免疫熒光法2原理2.1毛發(fā)樣品經(jīng)清洗、冷凍研磨后，以甲醇超聲法提取，用液相色譜-串聯(lián)質譜的多反應監(jiān)測（MRM）模式檢測。經(jīng)與平行操作的空白樣品和添加樣品對照，以保留時間、質譜特征碎片離子峰和離子對相對豐度比進行定性分析。2.2時間分辨免疫熒光技術是以鑭系元素標記抗原或抗體，并與時間分辨測定技術結合而建立起來的一種新型非放射性微量免疫分析技術。其技術原理為利用具有雙功能基團結構的螯合劑，將鑭系元素標記到抗體(或抗原)上，經(jīng)免疫反應形成復合物，由于鑭系元素能發(fā)出熒光，故分離除去未結合的成分后，利用時間分辨熒光儀即可測定熒光強度，從而推測待測物含量[6-7]。3儀器3.1液相色譜-串聯(lián)質譜聯(lián)用儀（SHIMADZULCMS-8045）、色譜柱（SHIMADZUShim-packVP-ODS150mm×2.0mm,4.6μm）、冷凍研磨機（上海凈信JXFSTPRP-CL）、超聲波清洗機（小美超聲）。3.2SuperTest1000全生物樣本毒品分析儀4樣品處理4.1取毛發(fā)樣品依次用適量的水和丙酮振蕩分別洗滌兩次，晾干后剪成約1mm段，置冷凍研磨儀中粉碎，呈粉末狀備用。稱取毛發(fā)粉末20mg，加入1.0mL內標甲氧那明標準工作液（甲氧那明1ng/mL），冰浴超聲30min，離心，移取上清液，于60℃水浴空氣流下吹干。殘留物用100L甲醇復溶，供快檢設備分析。4.2取毛發(fā)樣品10mg（5cm毛發(fā)20根左右）,剪碎后置于萃取液中，混勻靜置萃取5min，然后取萃取液滴加到測試板上，每個孔位滴加5滴，然后靜置8min后開始采用液相色譜串聯(lián)質譜法用LC-MS/MS檢測。通過儀器自帶校正曲線，可以直接讀出定量結果。5結果數(shù)據(jù)5.1靈敏度見表1表1兩種方法檢測結果的靈敏度比較TargetSuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）Threshold（ng/mg）MAMP0.0010.0010.2morphine0.0010.0010.2Ketamine0.0010.0010.25.2假陽性見表2表2兩種方法假陽性的檢測結果比較TargetSuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）SuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）SuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）MAMP0.18**1.840.501.880.45AMP****0.10*0.09MDMA0.03**0.33**0.42**MDA*********MDEA*3.05******注：*，SuperTest1000未顯示具體數(shù)值；**，LC-MS/MS結果在有校數(shù)字內未顯示具體數(shù)值。5.3準確性見表3表3兩種方法的檢測準確性結果比較TargetSuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）SuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）SuperTest1000（ng/mg）LC-MS/MS（ng/mg）MAMP0.010.480.18**1.780.13AMP*0.10****0.02MDMA0.03**0.03**0.2810.26MDEA****3.05***MDA*******0.49Ketamine***1.649.530.323.93注：*，SuperTest1000未顯示具體數(shù)值；**，LC-MS/MS結果在有校數(shù)字內未顯示具體數(shù)值。6結果分析6.1由表1可知，對于三種常見毒物來說，時間分辨免疫熒光快速檢測和液相色譜串聯(lián)質譜兩種設備的靈敏度都可以達到1pg，完全能夠滿足2018年10月31日發(fā)布的公禁毒〔2018〕938號《關于印發(fā)<涉毒人員毛發(fā)樣本檢測規(guī)范>的通知》的閾值要求。6.2由表2可知，對于苯丙胺類興奮劑來說，它們之間有的是支鏈取代，有的是環(huán)取代衍生物[9]?？鞕z設備對含有3、4-亞甲雙氧甲基苯丙胺（MDMA）和3、4-亞甲雙氧乙基苯丙胺（MDEA）的毛發(fā)樣本會造成假陽性。因為抗體的相互干擾，大多數(shù)免疫法的特異性在于甲基苯丙胺衍生物的一個基團，而不是特定結構的物質，所以對于結構相似的物質及其衍生物，快檢設備易造成假陽性[8]。6.3由表3可知，對于不同的毛發(fā)樣本，通過兩種檢測設備最終得到的結果準確性還是有一定差別的，這主要是由于抗體之間有干擾影響，同類物質及其衍生物會干擾檢測結果，所以會導致定量不準確。給禁毒工作人員造成干擾影響。7結果討論時間分辨熒光快檢法檢測速度快，攜帶方便，可應用于多人次，多批次的現(xiàn)場初篩檢測，而且靈敏度也已經(jīng)滿足了公安部規(guī)定的閾值要求，但是在結構相似或者衍生物的毒品成分分析時會出現(xiàn)假陽性情況，導致定量不準確。所以時間分辨熒光快檢法暫時還不能作為吸毒人員認定的主要方法。LC-MS/MS法不管從靈敏度、準確度，還是毛發(fā)毒品代謝物的檢測，都能滿足檢測鑒定的要求，所以此方法是目前毛發(fā)毒品檢測鑒定的國際通用方法。保證檢測結果更加科學，更加準確，可以作為社區(qū)戒毒、社區(qū)康復的長期監(jiān)測手段，成為戒毒脫毒成功的認定依據(jù)[9]。Reference(References)：取毛發(fā)一小時內能測吸毒時間[N].東方衛(wèi)報,2018-11-16.王春.浙江首創(chuàng)毛發(fā)檢測吸毒新技術[N].法制日報,2018-01-24.沈敏,向平.濫用物質分析與應用北京:科學出版社2016.萬紅楠.免疫分析法在毒品檢驗鑒定中的應用及發(fā)展[J].遼寧警察學院學報,2018,2(108):65-69.SF/ZJD0107025-2018《毛發(fā)中15種毒品及其代謝物的液相色譜-串聯(lián)質譜檢驗方法