無菌室的要求

無菌室的要求*無菌室建設(shè)要求使用與管理辦法1工作室應(yīng)矮小、平整，面積只需4米2左右，高2?2—2?3米，內(nèi)部裝修應(yīng)平整、光滑，無凹凸不平或棱角等，四壁及屋頂應(yīng)用不透水之材質(zhì)，便于擦洗及殺菌2．室內(nèi)采光面積大，從室外應(yīng)能看到室內(nèi)情況。3．為保證無菌室的潔凈，無菌室周圍需設(shè)緩沖走廊，走廊旁再設(shè)緩沖間，其面積可小于無菌室。4．無菌室、緩沖走廊及緩沖間均設(shè)有日光燈及供消毒空氣用紫外燈，殺菌紫外燈離工作臺以1米為宜，其電源開關(guān)均應(yīng)設(shè)在室外。5．無菌室與緩沖間進(jìn)出口應(yīng)設(shè)拉門，門與窗平齊，門縫要封緊，兩門應(yīng)錯開以免空氣對流造成污染。6．無菌室的使用與管理（1）無菌室應(yīng)保持清潔整齊，室內(nèi)僅存放必須的檢驗(yàn)用具如酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環(huán)、玻璃鉛筆等。&不要放與檢測無關(guān)的物品2）室內(nèi)檢驗(yàn)用具及凳桌等保持固定位置，不隨便移動。（3）每2—3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作臺、門、窗、桌、椅及地面，然后用3%石炭酸水溶液噴霧消毒空氣，最后紫外燈殺菌半小時(shí)（4）定期檢查室內(nèi)空氣無菌狀況，細(xì)菌數(shù)應(yīng)控制在10個以下，發(fā)現(xiàn)不符合要求時(shí)，應(yīng)立即徹底消毒滅菌。/無菌室無菌程度的測定方法：取普通肉湯瓊脂平板、改良馬丁培養(yǎng)基平板各3個（平板直徑均9厘米），置無菌室各工作位置上，開蓋曝露半小時(shí)，然后倒置進(jìn)行培養(yǎng)，測細(xì)菌總數(shù)應(yīng)置37°C溫箱培養(yǎng)48小時(shí)；測霉菌數(shù)則應(yīng)置27C溫箱培養(yǎng)5天。細(xì)菌'霉菌總數(shù)均不得超過10個為。（5）無菌室殺菌前，應(yīng)將所有物品置于操作之部位（待檢物例外），然后打開紫外燈殺菌30分鐘，時(shí)間一到，關(guān)閉紫外燈待用6）進(jìn)入無菌室前，必須于緩沖間更換消毒過的工作服、工作帽及工作鞋。（7）操作應(yīng)嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)定進(jìn)行，操作中少說話，不喧嘩，以保持環(huán)境的無菌狀態(tài)。器材及場所的滅菌消毒*無菌室建設(shè)要求使用與管理辦法微生物檢驗(yàn)用器材及場所必須進(jìn)行滅菌或消毒處理，不同的對象采用不同的處理方法1高壓蒸汽滅菌:工作服、口罩、稀釋液等，置高壓殺菌鍋內(nèi)，一般采用121C滅菌半小時(shí),當(dāng)然不同的培養(yǎng)基有不同的要求,應(yīng)分別處理2．火焰滅菌：接種針、接種環(huán)等可直接火焰滅菌3?高溫干燥滅菌：各種玻璃器皿、注射器、吸管等，置于燥箱中160C滅菌2小時(shí)4．一般消毒:無菌室內(nèi)的凳、工作臺、試管架、天平、待檢物容器或包裝均無法進(jìn)行滅菌，必須用其他方法進(jìn)行消毒處理，采用2%石炭酸或來蘇兒水溶液擦拭消毒，工作人員的手也用此法進(jìn)行消毒空氣的消毒：開啟紫外燈照射30—60分鐘即可。操作要領(lǐng)準(zhǔn)備工作*無菌室建設(shè)要求使用與管理辦法先進(jìn)行無菌室空間的消毒，開啟紫外燈30—60分鐘檢驗(yàn)用的有關(guān)器材，搬入無菌室前必須分別進(jìn)會滅菌消毒操作人員必須將手清洗消毒，穿戴好無菌工作衣、帽和鞋，才能進(jìn)入無菌室進(jìn)入無菌室后再一次消毒手部，然后才進(jìn)行檢驗(yàn)操作操作過程注意事項(xiàng)*無菌室建設(shè)要求使用與管理辦法動作要輕，不能太快，以免攪動空氣增加污染；玻璃器皿也應(yīng)輕取輕放，以免破損污染環(huán)境操作應(yīng)在近火焰區(qū)進(jìn)行。接種環(huán)、接種針等金屬器材使用前后均需灼燒，灼燒時(shí)先通過內(nèi)焰，使殘物烘干后再灼燒滅菌使用吸管時(shí)，切勿用嘴直接吸、吹吸管，而必須用洗耳球操作。觀察平板時(shí)不好開蓋，如欲沾取菌落檢查時(shí)，必需靠近火焰區(qū)操作，平皿蓋也不能大開，而是上下蓋適當(dāng)開縫。進(jìn)行可疑致病菌涂片染色時(shí)，應(yīng)使用夾子夾持玻片，切勿用手直接拿玻片，以免造成污染，用過的玻片也應(yīng)置于消毒液中浸泡消毒，然后再洗滌。工作結(jié)束，收拾好工作臺上的樣品及器材，最后用消毒液擦拭工作臺。無菌室管理規(guī)定無菌室地面、臺面、其它表面每日晨擦拭1次。超凈臺每日晨75%酒精擦拭超凈臺消毒，每次使用前準(zhǔn)備好物品，將超凈臺紫外滅菌30分鐘后方可使用。從室外帶入無菌室內(nèi)的所有物品表面要用75%酒精或紫外照射預(yù)先消毒。無菌操作前75%酒精消毒手掌、手背。整個操作嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作。每人次使用后，臺內(nèi)物品全部取出并用消毒液噴灑消毒用后的物品歸位，垃圾帶出無菌室。連續(xù)使用時(shí)間超過1小時(shí)，請預(yù)約登記。無菌室內(nèi)電腦生物反應(yīng)器專用，閑人免用。使用后將防塵罩罩上，防止紫外直接照射。無菌室內(nèi)定期消毒滅菌：噴灑3-5%石炭酸溶液并用2-3%來蘇水擦洗桌面、凳子，無菌室內(nèi)噴霧消毒后，紫外滅菌30分。每周一次。無菌室內(nèi)無菌狀況定期檢測：滅菌后的接種室內(nèi)桌上和桌下各放一套培養(yǎng)基平皿，暴露15分鐘，蓋上，37°C培養(yǎng)24小時(shí)，每個平皿的菌落M4,則認(rèn)為效果良好，否則需延長照射時(shí)間或加強(qiáng)其它措施。每周一次。滅菌后物品放在指定位置,注明滅菌日期,高壓滅菌物品可存放7-14天,過期不能再用,需重新包裝滅菌。所有準(zhǔn)備進(jìn)入無菌室工作的人員必需首先了解細(xì)胞培養(yǎng)的基本要求和操作規(guī)范,并進(jìn)行必要的培訓(xùn)。進(jìn)入無菌室前需提交相關(guān)實(shí)驗(yàn)計(jì)劃：包括使用細(xì)胞種類、數(shù)量；所需試劑種類,試劑是否有毒；培養(yǎng)液種類；實(shí)驗(yàn)時(shí)間等。不歡迎沒有計(jì)劃和計(jì)劃不可行的人員進(jìn)行漫無目的的測試。每一個研究人員的培養(yǎng)細(xì)胞；細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)的位置；培養(yǎng)液；消化液；消毒物品；消毒物品擺放位置等都固定化,并作好標(biāo)記。禁止交叉亂用,亂放,造成可能的污染擴(kuò)大,所有研究人員未經(jīng)本人許可不得使用他人的物品和位置。通用性的液體（如培養(yǎng)液、消化液、生理鹽水、鈣溶液）由管理人員統(tǒng)一配制,專人管理,便于進(jìn)行質(zhì)量控制和研究人員的計(jì)費(fèi)。研究人員根據(jù)需要申領(lǐng),并作好標(biāo)記,做到專人專物專用,嚴(yán)禁未經(jīng)他人許可亂用他人物品。培養(yǎng)液只有在用完后可再申領(lǐng)新瓶,防止浪費(fèi)。12.研究生實(shí)驗(yàn)