CF系列免疫熒光染料選擇方案

常用抗體標(biāo)記熒光染料的選擇CFTM系列(BIOTIUM,USA);AlexaFluor?系列(Lifetechnology,USA);DyLight系列;Cy系列;IRDye系列等AlexaFluor?CFTM系列。CFTMAlexaFluor?系列具有以下幾點優(yōu)勢：型羅丹明核心羅丹明染料以優(yōu)異的耐光性和良好的熒光量子產(chǎn)量著稱。因此很多AlexaFluor?染料具有Biotium科學(xué)家覺察CF染料的產(chǎn)CF如：(以以下圖)已經(jīng)淬滅。特異性高的近紅外染料聚合體多、熒光量子產(chǎn)量差等問題。為了解決這些問題，很多商用的近紅外染料比方AlexaFluor?DyLight?dyes和IRDyes?近紅外染料，在制備時吸附了大量的帶負(fù)電荷的磺化更加嚴(yán)峻的問題，經(jīng)這種染料標(biāo)記的生物耦聯(lián)物的非特異性結(jié)合。例如：與大量負(fù)電荷結(jié)合后可以顯著的轉(zhuǎn)變抗體的等電點，進而影響抗原抗體的特異性結(jié)合反響。綜合以上內(nèi)容，Biotium的科學(xué)家用革命性的方法設(shè)計出近紅外染料CF，在避開引入大量負(fù)電荷的狀況下，極大的保證了染料優(yōu)異的理化特性。Biotium近紅外的CF染料以花青或羅丹明染料為核心更好的水溶性。因此，近紅外CF染料比其他近紅外染料熒光強度更高，光穩(wěn)定性好。最重要CF染料標(biāo)記蛋白質(zhì)樣品相對于其他商業(yè)用近紅外染料制備的抗體偶聯(lián)物，最大限度的提高了信噪比。(見以以下圖)CF系列染料(右圖)是經(jīng)過型改造過的染料，不會存在上述狀況，而且染料的水溶性極好。.染料制備過程中含有大量帶負(fù)電的磺化基團，簡潔非特異性結(jié)合正電CF790的條帶特異性比照。優(yōu)異的標(biāo)記效率生物偶聯(lián)后的活性染料一般很簡潔水解，會在運輸，操作及儲存中帶來諸多不便，最終致染AlexaFluor?dyes,DyLight?dyesandIRDyes?等嚴(yán)峻的磺化作用有較強的吸濕性，惡化水解作用等問題。例如：AlexaFluor?488在應(yīng)用時琥珀酰亞胺脂酯SE活性局部遠(yuǎn)低于〔8CFSEAlexaFluorSE更耐水解?？傮w來說，CFSE產(chǎn)品一貫的給出更高的標(biāo)記效率，供給應(yīng)用戶更好的使用價值。選擇方案：藍(lán)色〔350-450nm〕CF350、AlexaFluor350、AMCA等CF350CF350AlexaFluor350AMCA的藍(lán)色熒光染料，CF350的AlexaFluor350、AMCA,50%,水溶性更好,耐光性格外優(yōu)秀亮,更簡潔與現(xiàn)有的綠色熒光基團區(qū)分。CF405S/CF405M、AlexaFluor405近乎完善的匹配藍(lán)色二極管激光器CF405S/CF405MAlexaFluor405405nm;譜線的藍(lán)色二極管激光器完善的匹配。在流式細(xì)胞儀上的分析結(jié)果顯示CF405S/CF405MAlexaFluor4051.7倍。綠色〔488nm〕CF488A 、AlexaFluor488、FITC、FAM、DyLight488、Cy2等----488nmCF488A以上染料其標(biāo)記的抗體蛋白適用于全部配備488nmFL1通道檢測；或者可用于熒光顯微鏡技術(shù)；CF488A最低限度的帶電量降低了與抗體耦聯(lián)物的非特異性結(jié)合；在紅色通道溢出AlexaFluor488；耐光性好；水溶性好和pH料的標(biāo)記率。ar8在較寬的H值范圍內(nèi)保持穩(wěn)定〔；FITC488nm525nmPH值影響，PH值降低時其熒光強度減弱。橙紅色〔543-555nm〕CF543AlexaFluor546ATTO550,Cy3,DyLight549,Rhodamine(TRITC)543nm的橙色熒光染料；CF?543熒光條帶光明，耐光，水溶性好，確保了CF543染料與抗體的耦聯(lián)物保持優(yōu)異的水溶性，為該波段最亮的橙色熒光染料。例如：同等的標(biāo)記程度下，CF543標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體的亮度高于用AlexaFluor546標(biāo)記的2~10倍。CF555、AlexaFluor555、Tetramethylrhodamine(TAMRA)等匹配Cy3濾光片的橙色熒光染料；紅色〔568-594nm〕CF568、AlexaFluor?568,ATTO565,RhodamineRed568nm處紅色熒光染料；CF568染料耐光性最好；高效水溶性；比AlexaFluor568標(biāo)記的抗體亮度更亮；CF594、AlexaFluor?594,ATTO?594,DyLight?594,TexasRed 等最亮紅色熒光染料；CF594由于其高量子產(chǎn)量和優(yōu)異的水溶性而比AlexaFluor594光明2~4倍。同時CF594對光極其穩(wěn)定，使它能被抱負(fù)地應(yīng)用于諸如共聚焦顯微鏡和單分子顯像條件苛刻的應(yīng)用中去。遠(yuǎn)紅外〔620-660nm〕CF620R、LightCyclerRed640620nm處；CF?620R是以紅色熒光染料羅假設(shè)丹〔rhodamine〕為根底的遠(yuǎn)紅外的熒光染料，該染料有高熒光亮度和極度的耐光性。它的吸取和放射光譜為617和639nm，該染的水溶性有利于生物耦合在水介質(zhì)中，更好的保持耦聯(lián)物的生物特異性結(jié)合。CF633、AlexaFluor633,AlexaFluor 647,Cy5,DyLight633,DyLight649等633/635nm激光線的最正確染料熒光染料；CF633染料的優(yōu)點：當(dāng)被633nm氦氖激光或635nm紅色二極管激光激發(fā)時，產(chǎn)生最亮的抗體耦聯(lián)物；光穩(wěn)定性遠(yuǎn)高于AlexaFluor647；高效的水溶性CF640、AlexaFluor647,ATTO647N,Cy5,DyLight649等遠(yuǎn)紅外熒光染料；CF640R〔rhodamine〕Cy5、AlexaFluor647；但以羅丹明〔rhodamine〕為根底的紅色染料CF640R它最大的優(yōu)點就是對光穩(wěn)定性，Cy5和AlexaFluor647以花青素為根底，因此有著和花青素一樣的特點即耐光性較差。極好的亮度和耐光性使CF640R被抱負(fù)的用于共聚焦顯微鏡和單分子成像等條件苛刻的檢測中。CF647、AlexaFluor647,ATTO647N,DyLight649等遠(yuǎn)紅外熒光染料；CF647Cy5、AlexaFluor647光明。CF660、AlexaFluor?660,Allophycocyanin(APC)等介于遠(yuǎn)紅外近紅外之間的熒光染料；近紅外〔680-790nm處激發(fā)〕CF680R/680、AlexaFluor680,Cy5.5,IRDye680等近紅外熒光染料；CF680是高水溶性的以花青素為根底的染料，分子量大約為3000。該染料標(biāo)記抗體極佳，發(fā)出最亮的熒光和在免疫染色光譜相像的染料中產(chǎn)生最高的信噪比。CF680R分子量約為900，更適合標(biāo)記核酸或者相對小的生物分子。CF680R是型的以羅丹明〔rhodamine〕為根底的高熒光亮度,極度耐光性染料，這使它可被抱負(fù)地用于共聚焦顯微鏡，單分子成像等條件要求苛刻的應(yīng)用中。CF750、CF?770andCF?790等近紅外熒光染料；CF750、CF770、CF790是領(lǐng)域內(nèi)真正