抑膠素對(duì)大鼠腦膠質(zhì)瘤增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)的影響

DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減抑膠素對(duì)大鼠腦膠質(zhì)瘤增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)的影響（作者: 單: 郵: ）作者：姜慧軼林衛(wèi)紅馬滌輝劉仕成崔俐方法采用鼠腦立體定向的方法建立大鼠腦膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型并進(jìn)行分組：抑膠素不同濃度實(shí)驗(yàn)組(Ⅰ：8μ;Ⅱ：6μ;Ⅲ：2μμg/kg14d(PCNA)的表達(dá)，觀察瘤細(xì)胞增殖變化情C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞有顯著抑制作用，(P0.05，P0.01);抑膠PCNAPCNA照組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05，P0.01)。結(jié)論抑膠素能夠抑制大鼠腦膠質(zhì)瘤體內(nèi)生長(zhǎng)。其機(jī)制之一可能與膠質(zhì)瘤內(nèi)PCNA表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞增殖水平下降有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】抑膠素;腦膠質(zhì)瘤;增殖細(xì)胞核抗原神經(jīng)膠質(zhì)瘤是發(fā)生于神經(jīng)外胚層的腫瘤，是顱內(nèi)腫瘤中最常見的一(antigliomatin)作為一種特異性氯離子通道阻滯劑，是一材料與方法C6生理教研室提供。動(dòng)物選用雄性、健康Wistar506～8w200～250g，由高新技術(shù)開發(fā)區(qū)動(dòng)物中心提供。2C625cm2C610%滅活小牛血清的IMDM置于含5%CO23720.25%胰酶溶Ca2+、Mg2+的磷酸鹽緩沖液中消化細(xì)胞，在顯微鏡下觀察105minC6(SABC)GFAPC6細(xì)胞，細(xì)胞濃度為0μ，經(jīng)MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率達(dá)以上。以2.0×106/只鼠的量接種，所有的大鼠均采用立體定向方法進(jìn)Barker1.2mm，10μl的微量注射器針頭銳性刺破硬膜在立體6.0mm，1.0mm5.0mm10μl1μl/min510U5d7dWistar51014d，具體如下：(1)空白)(8μ6μ2μ4μ。4%多聚甲醛固定腫瘤標(biāo)本，沿腦表接種穿刺點(diǎn)做冠狀切口，測(cè)量腫=a2×b×π/6(a為腫瘤的短徑，為腫瘤的長(zhǎng)徑)。抑瘤率=(對(duì)照組腫瘤的平均體積-實(shí)驗(yàn)組腫瘤的平均體積)/對(duì)照組腫瘤的平均體積抑制率≥30%為腫瘤對(duì)藥物敏感。免疫組化染色檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)蛋白采用SABC1010min。60min。傾去血清，加0稀釋的，置濕盒內(nèi)S沖洗5min×360min。PBS振洗5mi3C0miS振洗5min×4DAB3min。自來(lái)水沖洗，酒精水核或(和)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，高倍視野下(400PCNA標(biāo)記指數(shù)(LI)。SPSSst檢驗(yàn)。2結(jié)果實(shí)驗(yàn)大鼠的腫瘤體積和抑瘤率的變化活體灌注4%多聚甲醛固定腫瘤標(biāo)本，沿腦表接種穿刺點(diǎn)做冠狀切口，測(cè)量腫瘤大小，算出各實(shí)驗(yàn)組的抑制率并與對(duì)照組做比較用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)兩總體均數(shù)比較的t檢驗(yàn)對(duì)所測(cè)得的腫瘤體積大小進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理、分析。由表1可以看出：實(shí)驗(yàn)組Ⅰ腫瘤體積與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.86，P0.05);實(shí)驗(yàn)組Ⅱ～Ⅳ與對(duì)照組相比有顯著差異 (P0.05，P0.01)，并且隨抑膠素濃度增大，瘤體積縮小越明顯，抑瘤率也隨抑膠素濃度增高而增加實(shí)驗(yàn)組Ⅰ組與Ⅱ組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差其余各組兩兩比較有顯著性差(P0.05)。見表1。PCNA免疫組化結(jié)果分析PCNA棕黃色，鏡下計(jì)數(shù)腫瘤內(nèi)5個(gè)視野的陽(yáng)性細(xì)胞。對(duì)照組腫瘤細(xì)胞中PCNA蛋白陽(yáng)性表達(dá)率平均為72.18%，表現(xiàn)為陽(yáng)性細(xì)胞密度高，胞核呈強(qiáng)陽(yáng)性，數(shù)量多。經(jīng)抑膠素治療后即可見腫瘤內(nèi)PCNA陽(yáng)性細(xì)胞密度下降，核PCNA陽(yáng)性強(qiáng)度減弱，隨濃度增加陽(yáng)性率呈下降趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)組Ⅱ～ⅣPCNA(P0.05，P0.01PCNA(P0.0511PCNA指數(shù)變化與對(duì)照組比較：1)P0.05，2)P0.013討論(chlorotoxin)，有研究表明Cl3;19984〕報(bào)125I131IGCC在人體神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中選擇性產(chǎn)生，且產(chǎn)生量與腫瘤的惡化程度呈正相關(guān)。Sontheimer〔〕將放射性的碘和一種植物毒素連接在氯毒素上，借C6Ⅱ～Ⅳ組與對(duì)照組相比有顯著差異，并且隨抑膠素濃度增大，瘤體積縮小越明顯，抑瘤率也隨抑膠素濃度增高而增加，提示抑膠素具有抑制腫瘤生長(zhǎng)作用。PCNA36kD的多肽，僅在增殖細(xì)胞中合成與表達(dá)，在細(xì)胞周期S期合成最高，是存在于細(xì)胞核內(nèi)的酸性蛋白，S期細(xì)胞的標(biāo)志物。PCNAPCNA,意味著處于S6PCNA,它對(duì)腫瘤的治療及預(yù)后的判斷有重要意義。PCNA陽(yáng)性細(xì)胞密度下降，核PCNA陽(yáng)性強(qiáng)度減弱，隨濃度增加陽(yáng)性率呈下降趨Ⅱ～ⅣPCNA組PCNA蛋白表達(dá)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。推測(cè)抑膠素抑制腫瘤增殖的PCNA合成與表達(dá)，從而也就抑制了DNA此阻止腫瘤細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的復(fù)制，抑制細(xì)胞有絲分裂。本研究明確了抑膠素對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的抑制、殺傷作用，并且其作用機(jī)制之一可能與抑制PCNA發(fā)應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1崔俐，林衛(wèi)紅，姜慧軼，等.抑膠素對(duì)大鼠膠質(zhì)瘤的抑瘤效應(yīng)及對(duì)神經(jīng)細(xì)胞黏附分子的影響〔J〕.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2005;22(2)：12830.2.C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞P16J.2.3UllrichN,SontheimerH.Biophysicalandpharmacologycalcharacterizationofchloridecurrentsinhumanastrocytomacells〔J〕.AmJPhysiol，1996;270:C151121.SoroceanuL,GillespieGY，KhazaeliMB,etal.Useofchlorotoxinfortargetingofprimarybrain〔J〕.CancerRes，1998;58：48719.UllrichN,SontheimerH.Expressionofvoltageactivatedchloridecurrentsinacuteslicesofhumangliomas〔J〕.Neuroscience，1998;83(4):13613.KorkolopoulouP,ChristodoulouP,Lekk