IVD試劑性能評(píng)估

IVD試劑性能評(píng)估-靈敏度靈敏度評(píng)估資料是評(píng)價(jià)擬上市產(chǎn)品有效性的重要依據(jù)，也是產(chǎn)品注冊(cè)所需的重要申報(bào)材料之一。靈敏度的定義可以理解為體外診斷試劑對(duì)待測(cè)樣本所能檢測(cè)到的最小量，有兩個(gè)含義：①最小濃度或含量的變化可以引起檢測(cè)信號(hào)的顯著變化；②具有適當(dāng)?shù)南薅葯z測(cè)出區(qū)別于零的待測(cè)物的最小濃度或含量。分析靈敏度與功能靈敏度分析靈敏度體外診斷試劑的分析靈敏度也稱為檢測(cè)限，指檢測(cè)方法可檢測(cè)到的最低檢測(cè)濃度，即在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上能與零劑量區(qū)別的量。一般用95%可信限計(jì)算：重復(fù)測(cè)定空白樣本20次，計(jì)算20次反應(yīng)測(cè)得的均值(X)和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，以x+2SD(夾心法)或兀-2SD(競(jìng)爭(zhēng)法)計(jì)算出相應(yīng)的濃度，即為體外診斷試劑的分析靈敏度，也是注冊(cè)資料所需提供的內(nèi)容。分析靈敏度評(píng)估的具體方法，如下：1?分析靈敏度評(píng)估需要的材料和基本要求空白樣本的制備：空白樣本應(yīng)不含被測(cè)物，但其基質(zhì)應(yīng)與帶測(cè)定常規(guī)樣本相同。如空白樣本難以獲得，可采用5%牛血清或人血清白蛋白溶液，或根據(jù)具體項(xiàng)目選擇相應(yīng)基質(zhì)的樣本，但是需要注意的是，要將基質(zhì)效應(yīng)減到最小。實(shí)驗(yàn)方法在一次運(yùn)行中重復(fù)測(cè)定空白樣本20次。數(shù)據(jù)處理(1)數(shù)據(jù)記錄：將結(jié)果記錄于表格。如果檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)于低于零的報(bào)告為零，應(yīng)記錄初始響應(yīng)值。(2)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：計(jì)算20次平均值兀和標(biāo)準(zhǔn)差SD4?結(jié)果報(bào)告分析靈敏度=x+2SD（夾心法）或X-2SD（競(jìng)爭(zhēng)法）功能靈敏度體外診斷試劑的功能靈敏度與精密度相關(guān)，是以天間變異系數(shù)（CV）為20%時(shí)所對(duì)應(yīng)的檢測(cè)限樣本具有的平均濃度。計(jì)算方法為：將低值樣本倍比稀釋后重復(fù)測(cè)定10次以上，計(jì)算每個(gè)低值樣本檢測(cè)信號(hào)的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)（CV），選擇CV大于20%時(shí)所對(duì)應(yīng)的低值樣本平均濃度，這就是體外診斷試劑的功能靈敏度。天間精密度估計(jì)值的計(jì)算公式，如下：-茹?_j'-i求出均值：計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算變異系數(shù)n為累計(jì)實(shí)驗(yàn)的天數(shù)分析靈敏度（analyticalsensitiVi功能靈敏度（functionalsensiti均可作為測(cè)定方法檢測(cè)某物質(zhì)的靈敏度，但兩者所適用的范圍與表達(dá)的臨床意義有差異:分析靈敏度又稱檢測(cè)限量（limitofdetectio是基于零濃度基礎(chǔ)上，用于區(qū)分從無(wú)到有的分析能力?功能靈敏度又稱臨床靈敏度（clinicalsensitivi是基于低濃度的基礎(chǔ)上，用于區(qū)分從有到無(wú)的分析能力.該值的確定是通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品（如S1）作梯度稀釋，采用同一臺(tái)儀器，同一批號(hào)試劑,同一標(biāo)準(zhǔn)曲線，每天1次，每次3遍進(jìn)行測(cè)定，共測(cè)3周以上時(shí)間的數(shù)據(jù)，根據(jù)批間變異系數(shù)（CV）＜20%時(shí)的最大稀釋管濃度作為功能靈敏度?最通俗的比喻為飛機(jī)從遙遠(yuǎn)的地方向你飛來(lái),從看不見(jiàn)到看見(jiàn)這一點(diǎn),是區(qū)分從無(wú)到有的分界點(diǎn)為〃分析靈敏度〃;而你站在飛機(jī)場(chǎng),看著飛機(jī)由近到遠(yuǎn)飛去，從看得見(jiàn)到看不見(jiàn)，即從有到無(wú)的分界點(diǎn)為〃功能靈敏度〃?一般分析靈敏度比功能靈敏度高10倍左右。如何提高體外診斷試劑的靈敏度？影響靈敏度的因素（1）抗原和抗體的親和性：兩者的親和性越高，靈敏度越高。（2） 抗體的標(biāo)記方法：標(biāo)記信號(hào)物的放大效應(yīng)可以提高靈敏度，如化學(xué)發(fā)光、膠體金、膠乳標(biāo)記等。（3） 抗原抗體反應(yīng)時(shí)間：反應(yīng)時(shí)間的適當(dāng)延長(zhǎng)，可以使抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)達(dá)到反應(yīng)平衡，進(jìn)而靈敏度也提高了。如在化學(xué)發(fā)光免疫診斷試劑中，抗原與抗體在液相中充分混合至少反應(yīng)10分鐘以上，有時(shí)還需要震蕩反應(yīng)以提高反應(yīng)速率，這樣比較容易獲得較高靈敏度。（4） 包被抗體與標(biāo)記物的量：在達(dá)到反應(yīng)平衡的條件下，可以適當(dāng)增加包被抗體和標(biāo)記物的濃度，來(lái)提高靈敏度。如NC膜上的包被抗體、膠體金標(biāo)記抗體，微球標(biāo)記的抗體等。但NC膜的抗體吸附量有限，可以通過(guò)優(yōu)化標(biāo)記來(lái)提高靈敏度。微球是以公家偶聯(lián)的方式與抗體結(jié)合，其靈敏度較高于膠體金。提高靈敏度的方法（1）選擇靈敏度更高的表標(biāo)記材料膠體金是常用的標(biāo)記物，但由于其具有較低的發(fā)光強(qiáng)度及較少的抗體吸附量，限制了膠體金免疫層析方法的靈敏度。而與抗體共價(jià)結(jié)合的材料，如鑭系元素，量子點(diǎn)，吖啶酯，膠乳微球等，有利于提高體外診斷試劑靈敏度。（2）發(fā)展信號(hào)放大系統(tǒng)免疫層析技術(shù)靈敏度不高的原因主要是T、C線位置標(biāo)記物信號(hào)不強(qiáng)，可以根據(jù)這一不足，優(yōu)化放大系統(tǒng)的反應(yīng)條件。有研究表明，通過(guò)添加銀增敏劑到膠體金免疫層析試劑條NC膜的方法可以提高檢測(cè)靈敏度10-100倍。另外，改變膠體金顆粒的大小，也可以提高靈敏度。（3）濃縮樣品通過(guò)濃縮的方法增加樣品的濃度，，可以提高體外診斷試劑的靈敏度10倍左右。（4） 選擇優(yōu)質(zhì)的試紙條如在膠體金免疫層析檢測(cè)方法中，不同的NC膜具有不同的孔徑、疏水性、親水性及其他性能的不同，會(huì)導(dǎo)致靈敏度的差異。（5） 緩沖液體系合適的緩沖液體系可以穩(wěn)定抗原抗體的結(jié)合能力及抗干擾能力，因此，合適的緩沖液體系也可以體外診斷試劑的靈敏度。參考文獻(xiàn)黃杰，高尚先，張艷麗，等?體外診斷試劑注冊(cè)檢測(cè)的不同靈敏度概念之詳解[J].首都食品與醫(yī)藥，2009,16（14）:6-6.張麗.關(guān)于體外診斷試劑質(zhì)量研究的建議[J].中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2006,19（5）:548-549.張志清?體外診斷試劑性能測(cè)試的分析[J].中國(guó)醫(yī)療器械信息，2010，16（6）:47-49.徐偉文?體外診斷試劑研制常用技術(shù)指標(biāo)之分析性能評(píng)估[J].分子診斷與治療雜志，2010,2（2）:140-144.王景云.提高免疫層析試紙條靈敏度方法的研究[D].南昌大學(xué)，2016.LOB(Limitofblank),就是我們通常講的空白檢測(cè)限。LOB指的是用空白樣本去測(cè)試，在一定的概率下能測(cè)得的最高測(cè)量結(jié)果，請(qǐng)注意一定的概率。LOD(Limitofdetection),就是我們通常講的檢測(cè)限，就不是用空白樣本去檢測(cè)了，是對(duì)低濃度的分析物