關(guān)節(jié)損傷再灌注改后

關(guān)節(jié)損傷再灌注改后第一頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

骨關(guān)節(jié)、滑膜、軟骨等缺血再灌注損傷的機制與防治，是研究的重點。為此設(shè)多個專題進行研究：一、骨關(guān)節(jié)、滑膜缺血再灌注損傷二、軟骨缺血再灌注損傷三、骨關(guān)節(jié)其它軟組織缺血再灌注損傷四、防治方法的研究第二頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日一、關(guān)節(jié)滑膜缺血再灌注損傷第三頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日模型的建立

在股動脈處切開皮膚，游離股動靜脈、股神經(jīng)；于股骨中段逐層結(jié)扎并切斷除股骨、股動靜脈、神經(jīng)以外的皮膚及各層肌肉；環(huán)形游離長約0.5cm的骨膜并用牙科磨鉆開窗，用明膠海綿填塞阻斷髓腔血流，然后用血管夾夾閉股動靜脈造成遠端肢體缺血。8小時后，放松血管夾恢復(fù)肢體血運。第四頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日a圖:連續(xù)夾閉4小時，動靜脈未見明顯異常。abc第五頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日b圖:連續(xù)夾閉6小時，動脈內(nèi)見血栓形成，血管內(nèi)皮細胞（EC）有脫落。

abc第六頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

c圖:連續(xù)夾閉6小時，血管變形，動脈內(nèi)見血栓形成。abc第七頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日滑膜缺血與損傷的時效關(guān)系第八頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日指標(biāo)檢測

分別于阻斷血流后0h、4h、6h、8h、10h活殺動物，立即取材。第九頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

光鏡觀察第十頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日正?；そM織

正?；そM織，由1-3層滑膜細胞和其下的組織構(gòu)成。第十一頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日a圖:缺血4小時，滑膜組織輕度水腫。

abcd第十二頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日b圖:缺血6小時，滑膜組織水腫，間質(zhì)血管有大量的紅細胞。

abcd第十三頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

c圖:缺血8小時，滑膜組織水腫，毛細血管內(nèi)皮細胞（EC）腫脹。

abcd第十四頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日d圖:缺血8小時，滑膜下層組織出現(xiàn)核碎裂、和溶解等壞死變化。abcd第十五頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)滑膜

HE染色×400

單純I/RI1天,可見滑膜細胞間質(zhì)水腫，其間散在數(shù)量不等的多形核粒細胞，伴有毛細血管充血，且管壁不完整，內(nèi)有含鐵血黃素。第十六頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)滑膜

HE染色×400

關(guān)節(jié)單純I/RI2周，滑膜間質(zhì)水腫加重，見表層滑膜細胞有壞死脫落，間質(zhì)內(nèi)多形核白細胞（PMN）明顯浸潤。第十七頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)滑膜

HE染色×100

關(guān)節(jié)單純I/RI4周，可見滑膜細胞及滑膜下層血管減少，滑膜間質(zhì)疏松，伴有巨噬細胞浸潤。第十八頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

關(guān)節(jié)滑膜

HE染色×100

單純I/RI12周，滑膜組織乳頭狀增生，呈細小絨毛狀向腔內(nèi)突出，表面被覆滑膜細胞，間質(zhì)內(nèi)伴有大量巨噬細胞浸潤。第十九頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日電鏡觀察

缺血6小時，血管內(nèi)皮細胞、滑膜細胞出現(xiàn)線粒體腫脹，嵴突變短；缺血8小時，還可觀察到胞核染色質(zhì)凝塊的出現(xiàn)；缺血10小時，滑膜細胞染色質(zhì)邊集、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒和胞漿分泌顆粒減少，以致核碎裂等細胞壞死的表現(xiàn);小血管內(nèi)皮細胞胞膜出現(xiàn)髓鞘樣變，胞漿突起、空泡形成，細胞緊密連接變松弛，胞膜破壞、崩解。第二十頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)滑膜

透射電鏡×3000

單純I/RI2周內(nèi),可見滑膜細胞腫脹，細胞核染色質(zhì)邊集，核周隙明顯增寬，細胞核周圍出現(xiàn)空泡；胞漿內(nèi)線粒體可出現(xiàn)髓樣變、空泡樣變。

第二十一頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)滑膜

透射電鏡×2000

單純I/RI2周，可見血管內(nèi)皮細胞腫脹明顯，胞核變小，胞漿出現(xiàn)空泡樣變，線粒體等細胞器明顯減少。

第二十二頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)滑膜

透射電鏡×1400

單純I/RI12周，滑膜細胞仍有腫脹，細胞核不規(guī)則，核仁明顯，核周隙明顯增寬，胞漿內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴大。第二十三頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)滑膜缺血再灌注損傷機制第二十四頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

1．組織IR過程中由于激活了次黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)，產(chǎn)生大量的活性氧自由基（ROS）；血管內(nèi)皮細胞（EC）由于缺血缺氧及活性氧自由基（ROS）作用，可能促使多形核白細胞（PMN）粘附并侵入到組織間隙；多形核白細胞（PMN）在此過程中因呼吸爆發(fā)產(chǎn)生更多的活性氧自由基，當(dāng)這些活性氧自由基的量超過組織的清除能力時，則導(dǎo)致組織細胞損傷，器官功能形態(tài)遭到破壞。第二十五頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

2．我們動態(tài)觀察了脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）、多形核白細胞（PMN）及超氧化物歧化酶（SOD）在滑膜IR損傷和修復(fù)中的變化，以及它們與滑膜組織結(jié)構(gòu)和關(guān)節(jié)活動改變的關(guān)系。第二十六頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日實驗方法第二十七頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日動物分組

實驗動物55只，根據(jù)缺血后再灌注的時間不同，隨機分成11組，每組5只；再灌注時間分別為1h、3h、6h、12h、24h、72h和1w、2w、4w、8w、12w，一側(cè)后肢為實驗側(cè)，另一側(cè)后肢為自身對照側(cè)(不施行手術(shù))。第二十八頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

滑膜組織丙二醛含量和多形核白細胞記數(shù)

缺血組4、6、8、10小時滑膜組織中丙二醛（MDA）的變化與正常組無顯著性差異（P>0.05）。第二十九頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日0501001502002501h3h6h12h24h72hIR后時間MDA含量(nmol/g)MDA實驗側(cè)MDA對照側(cè)

*******

再灌注組2周內(nèi)，實驗側(cè)丙二醛（MDA）含量呈雙峰變化，IR1小時達第一個峰值，隨后逐漸降低，IR6小時再次升高，72小時達第二個峰值，然后又逐漸降低。第三十頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日0501001502002501w2w4w8w12wIR后時間MDA含量(noml/g)實驗側(cè)對照側(cè)*

***IR實驗側(cè)滑膜組織丙二醛（MDA）在IR2周時仍顯著高于自身對照側(cè)（P<0.05）；IR2-8周丙二醛持續(xù)在低水平，12周又有所回升。第三十一頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日0510152025301h3h6h12h24h72h術(shù)后時間PMN(個/高倍視野)PMN實驗側(cè)PMN對照側(cè)***

滑膜組織中多形核白細胞（PMN）浸潤自IR后6小時開始升高，72小時達峰值，隨后逐漸降低。第三十二頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日0510152025301w2w4w8w12w術(shù)后時間PMN(個/高倍視野)實驗側(cè)對照側(cè)***

早期以中性粒細胞為主，兩周后為巨噬細胞所代替。IR6小時-72小時滑膜組織丙二醛含量（MDA）與多形核白細胞（PMN）記數(shù)顯著相關(guān)（r=0.66，P<0.05）。第三十三頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日IR及修復(fù)過程中超氧化物歧化酶SOD的變化

滑膜組織中超氧化物歧化酶（SOD）自缺血6小時開始降低，再灌注12小時達最低點，然后回升，再灌注8周，基本恢復(fù)正常。第三十四頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)活動度的變化

缺血再灌注最初2周，實驗側(cè)肢體活動明顯減少；4周時活動較2周時有所增加，但仍以對照側(cè)肢體為主；8~12周，雙側(cè)肢體均參與活動及持重，但可見到明顯的跛行。術(shù)側(cè)膝關(guān)節(jié)損傷后被動活動度逐漸降低。第三十五頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日滑膜組織病理學(xué)變化

第三十六頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日a圖:IR3小時滑膜組織正常。

a1圖:IR實驗側(cè)滑膜組織水腫，血管內(nèi)血栓形成，血管內(nèi)皮細胞腫脹、脫落。

abca1b1c1第三十七頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日b圖:IR12小時對照側(cè)滑膜組織間質(zhì)水腫，血管充血。b1圖:實驗測滑膜間質(zhì)出血，表層結(jié)構(gòu)破壞脫落至關(guān)節(jié)腔。

abca1b1c1第三十八頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

c圖:IR72小時對照側(cè)間質(zhì)明顯水腫。c1圖:實驗側(cè)見細小血管破裂成為灶性出血。abca1b1c1第三十九頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日a圖:IR1周滑膜組織灶性壞死，關(guān)節(jié)腔面有滲出物。a1圖:對照側(cè)無明顯異常。aba1b1第四十頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日b圖:IR2周實驗側(cè)，滑膜下層開始修復(fù)，間質(zhì)內(nèi)有大量的成纖維細胞及炎細胞；新生毛細血管出現(xiàn)結(jié)構(gòu)類似肉芽組織。b1圖：對照側(cè)結(jié)構(gòu)正常。aba1b1第四十一頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

二、肢體缺血再灌注后關(guān)節(jié)軟骨病理變化的研究第四十二頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)軟骨病理變化

大體病理觀察：IR側(cè)早期關(guān)節(jié)軟骨與對照側(cè)相比無差別，4周后軟骨失去原有光澤，色澤暗淡，暗紅或淡黃色。

第四十三頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

光學(xué)顯微鏡觀察

IR側(cè)肢體1天和3天組，關(guān)節(jié)軟骨表面平坦，柱狀層細胞排列整齊，細胞核大多有偏移、縮小現(xiàn)象；1周、2周組軟骨細胞排列紊亂，層次不清，胞核縮小甚至消失，軟骨細胞碎裂、壞死，軟骨陷窩內(nèi)細胞數(shù)目較對照側(cè)減少；4周、8周組關(guān)節(jié)軟骨表面粗糙，表層細胞有脫落現(xiàn)象，柱狀層細胞稀少、排列紊亂，12周組軟骨表面甚至出現(xiàn)裂紋。第四十四頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)變化HE染色×200A圖：正常對照側(cè)，表面光滑，軟骨細胞排列整齊，核大小均勻，潮線清晰可見。第四十五頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)變化HE染色×200B圖：IR后3天,表面平坦，柱狀層細胞排列整齊，核偏移。第四十六頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)變化HE染色×200C圖：IR后2周,關(guān)節(jié)面粗糙，細胞數(shù)目減少，排列紊亂，胞核縮小、偏移。第四十七頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨組織學(xué)變化HE染色×200D圖：IR后3個月,細胞數(shù)目減少，排列紊亂，軟骨增厚，潮線增多、前移、模糊。第四十八頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日透射電鏡

IR側(cè)1天組，線粒體輕度腫脹，嵴消失，內(nèi)織網(wǎng)擴張，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量的脂滴；3天組，細胞高度腫脹，染色質(zhì)邊集，部分細胞出現(xiàn)溶解壞死，胞膜溶解，胞核碎裂。第四十九頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

1周、2周組壞死細胞數(shù)量增加，胞核固縮、碎裂；4周、8周組仍可見到高度腫脹和溶解壞死的細胞，胞內(nèi)殘存有細胞器，12周組，可見較多的成軟骨細胞，呈梭形，胞漿內(nèi)大量粗面內(nèi)織網(wǎng)和線粒體，新生軟骨細胞數(shù)目增多，有分裂現(xiàn)象。第五十頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨細胞超微結(jié)構(gòu)觀察（×14K）

A圖：對照側(cè)關(guān)節(jié)軟骨細胞，胞膜完整，核形態(tài)基本正常，未見細胞器腫脹。

第五十一頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨細胞超微結(jié)構(gòu)觀察（×7K）B、C圖：IR后1天，變性軟骨細胞，線粒體腫脹，內(nèi)織網(wǎng)擴張，胞核變形、偏移，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量脂滴。

第五十二頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨細胞超微結(jié)構(gòu)觀察（×7K）

D圖：IR后1天，腫脹、壞死軟骨細胞，胞膜表面微絨毛消失，細胞器及胞核溶解。第五十三頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨細胞超微結(jié)構(gòu)觀察E圖：IR后3天，軟骨細胞高度腫脹，胞核固縮，細胞器溶解，胞膜基本完整。（×7.0K）F圖：IR后1周，大量軟骨細胞溶解。（×2.9K）

第五十四頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨細胞超微結(jié)構(gòu)觀察G圖：IR后2周，可見溶解壞死軟骨細胞，胞膜破裂，細胞器溶解，胞核碎裂。（×7.0K）H圖：IR后1月，仍見壞死的軟骨細胞（×1.85K）第五十五頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨細胞超微結(jié)構(gòu)觀察I圖：IR后1月，出現(xiàn)梭形成軟骨細胞。（×7.0K）J圖：IR后2月，成軟骨細胞數(shù)目增多，可見分裂的軟骨細胞。（×2.1K）

第五十六頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨細胞超微結(jié)構(gòu)觀察K圖：IR后3月，見分裂的軟骨細胞。（×10.0K）L圖：IR后3月，新生軟骨細胞數(shù)目增多。（×2.1K）

第五十七頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

掃描電鏡

IR側(cè)1周－2周內(nèi)軟骨表面出現(xiàn)小的凹陷，“壟溝”尚在，但變淺，表面可見散在的炎性細胞；4周、8周組，“壟溝”排列基本消失，軟骨表面凹凸不平；12周組軟骨表面出現(xiàn)細小淺表的裂縫，膠原暴露，基質(zhì)丟失。第五十八頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨表面掃描電鏡觀察A圖：IR后1天，表面有均勻分布的“壟溝”，呈平行排列，相鄰距離相等，壟表面光滑，高度和深度基本一致。（×1000）

第五十九頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨表面掃描電鏡觀察

B圖：IR后1周，“壟溝”尚在，深淺不均，連續(xù)性差。（×1000）第六十頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨表面掃描電鏡觀察

C圖：IR后1月，“壟溝”排列消失，軟骨表面凹凸不平。（×500）

第六十一頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日肢體IR后關(guān)節(jié)軟骨表面掃描電鏡觀察

D圖：IR后3月，軟骨表面出現(xiàn)的裂隙，膠原纖維暴露，表面不平坦。（×1000）

第六十二頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MMP3的表達與分布

肢體IR后1天組，關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)陽性顆粒較少，主要分布在胞漿內(nèi)；3天組明顯增多，陽性顆粒在胞漿和基質(zhì)中均有分布；至1周和2周組漸升高達峰值，之后表達逐漸回落，但8周-12周組仍高于對照側(cè)。第六十三頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

組化SP法檢測IR后關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MMP3的表達A圖：對照側(cè)關(guān)節(jié)軟骨胞外基質(zhì)很少著色，陽性細胞少，染色淡。（DAB染色×200）

第六十四頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

組化SP法檢測IR后關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MMP3的表達B圖：IR后1天，關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)出現(xiàn)較少陽性細胞，陽性染色主要在細胞內(nèi)。（DAB染色×400）

第六十五頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

組化SP法檢測IR后關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MMP3的表達

C圖：IR后3天，陽性細胞增多，主要集中在表層，胞外基質(zhì)有著色。（DAB染色×400）

第六十六頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

組化SP法檢測IR后關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MMP3的表達

D圖：IR后1周，大量染色陽性細胞，胞外基質(zhì)同時著色。（DAB染色×400）第六十七頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

組化SP法檢測IR后關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MMP3表達

E圖：IR后2周，陽性細胞多，著色深。（DAB染色×400）第六十八頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日組化SP法檢測IR后關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MMP3表達F圖：IR后4周，在大量陽性細胞周圍，可見基質(zhì)的陽性染色。（DAB染色×400）第六十九頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

組化SP法檢測IR后關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MMP3表達G圖：IR后8周，表層細胞有脫落，柱狀層染色陽性細胞多。（DAB染色×400）第七十頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

組化SP法檢測IR后關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)MMP3表達H圖：IR后12周，表層細胞脫落嚴重，細胞數(shù)目減少，但仍見強染色細胞。（DAB染色×400）第七十一頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

關(guān)節(jié)內(nèi)MMP3的合成較正常增多，并在關(guān)節(jié)內(nèi)廣泛分布，與關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)的降解有關(guān)。刺激MMP3表達的因素，考慮可能是肢體缺血再灌注后釋放大量的自由基和炎癥細胞因子，如：一氧化氮（NO）、白介素-1（IL-1）腫瘤壞死因子（TNF）等。有研究證明這些因子可刺激關(guān)節(jié)軟骨細胞和滑膜細胞產(chǎn)生和分泌金屬蛋白酶類。第七十二頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

后期出現(xiàn)新生軟骨細胞，而慢性關(guān)節(jié)炎形成，炎性介質(zhì)及細胞因子刺激新生軟骨細胞合成MMP3，MMP3mRNA又表現(xiàn)出增高趨勢。而在2周-4周時MMP3并不隨mRNA而變化，可能是細胞裂解將胞內(nèi)合成的MMP3釋放的緣故。第七十三頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)蛋白多糖含量變化

IR側(cè)1天、3天組與對照側(cè)無明顯差異；1周染色較對照側(cè)淡；2周組蛋白多糖含量較1天組明顯減少（P<0.01）；直到12周組實驗側(cè)蛋白多糖含量較對照側(cè)存在明顯差異。第七十四頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

免疫組化SP法對關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)蛋白多糖染色A圖：對照側(cè)軟骨內(nèi)著色深，基質(zhì)與胞內(nèi)均有著色。（DAB染色×100)第七十五頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

免疫組化SP法對關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)蛋白多糖染色

B圖：IR后1周，軟骨內(nèi)蛋白多糖染色仍較深。（DAB染色×100)第七十六頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

免疫組化SP法對關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)蛋白多糖染色C圖：IR后1月，染色明顯變淡，胞內(nèi)著色少。（DAB染色×100)第七十七頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

免疫組化SP法對關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)蛋白多糖染色

D圖：IR后3月，染色淡，與對照側(cè)有差異。（DAB染色×100)第七十八頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

IR側(cè)關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)蛋白多糖含量減少可能的原因

IR后由于軟骨細胞的損傷，細胞合成蛋白多糖及膠原的功能下降，而此時MMP3表達還沒達到最高峰，因此推斷軟骨細胞損傷是IR早期軟骨內(nèi)蛋第七十九頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日白多糖含量減少的主要原因。2周后MMP3在關(guān)節(jié)軟骨內(nèi)表達增多，基質(zhì)中也有大量表達，明顯多于對側(cè)。金屬蛋白酶合成與分泌，引起蛋白多糖的降解，最終導(dǎo)致蛋白多糖含量下降。第八十頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日三、預(yù)防

預(yù)防重于治療，因而要先于治療。

1、肢體不論何種原因造成的缺血，時限不應(yīng)超過6－8小時，最長不超過10－12小時。過長即可造成不可逆性損傷。因此，必須爭分奪秒盡快采取措施恢復(fù)血供。第八十一頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日2、部隊指戰(zhàn)員操練、施工盡量不要一個姿勢過長時間的操作，可以變換姿勢或適當(dāng)休息后，再行操練。避免肢體長時間寒冷，注意保溫。

3、一旦發(fā)現(xiàn)肢體有血供不足或缺血的早期癥狀，如肢體行動乏力、酸痛或不穩(wěn)等，應(yīng)盡早采用活血化瘀、改善血液循環(huán)的藥物治療。第八十二頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

4、適當(dāng)?shù)难a充微量元素，如鋅、鐵、硒等，是預(yù)防的重要方面。

5、維生素、鈣的適當(dāng)補充亦是預(yù)防和治療所必須的措施。第八十三頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

四、消靈仙注射液與Vit.E注射液對關(guān)節(jié)缺血再灌注損傷的防治研究

第八十四頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

鑒于以上實驗結(jié)果，研究I/RI損傷的防治方法。我們采用中藥消靈仙注射液與Vit.E注射液關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射，觀察對I/RI的發(fā)生、發(fā)展有否防治作用，并闡明其作用機制，為臨床I/RI的防治提供理論依據(jù)。第八十五頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日中藥消靈仙的作用

中藥消靈仙注射液的成分主要是活血化瘀、消炎祛濕類中藥。其中紅花的有效成分紅花黃色素、當(dāng)歸的有效成分阿魏酸鈉；三七、牛膝、紫蘇的有效成分均有一定的抗凝、抑制血小板聚集、抗血栓形成，從而改善微循環(huán)的作用。此外，黃芪酮（黃芪的有效成分）及阿魏酸鈉也有清除OFR，增加超氧化物歧化酶活力的功效。第八十六頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日以紅花為例，中藥消靈仙注射液的活血化瘀機制可能為：

1.

抗凝血作用紅花黃色素可使血漿凝血酶時間、血漿凝血酶原時間和血漿復(fù)鈣時間顯著延長。對血小板活化因子（PAF）介導(dǎo)的中性粒細胞的聚集、粘附均有抑制作用，并呈一定的劑量依賴關(guān)系。據(jù)此推測，紅花黃色素對抗血小板活化因子的作用，可能是紅花活血化瘀的重要機制之一。第八十七頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日以紅花為例，中藥消靈仙注射液的活血化瘀機制可能為：

2.抗血栓形成作用可能與其促進血管內(nèi)皮細胞釋放組織型纖溶酶原激活劑（tPA）有關(guān)。由于組織型纖溶酶原激活劑活性的增強抵消了部分纖溶酶原激活抑制劑的抑制作用，從而使其纖溶活性得以加強。第八十八頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日以紅花為例，中藥消靈仙注射液的活血化瘀機制可能為：

3.改善微循環(huán)紅花黃色素有改善外周微循環(huán)的作用，從而使血流加速，毛細血管開放數(shù)目增多，血細胞粘稠程度下降。

第八十九頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

關(guān)節(jié)軟骨

HE染色×400

單用藥2周時，可見軟骨表面欠光滑，細胞層次減少，鈣化潮線前移，表面見少許細胞脫落。第九十頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

關(guān)節(jié)軟骨

HE染色×400

單用藥4周時，可見關(guān)節(jié)軟骨表面仍有凹陷，但細胞層次較前增多，提示少量軟骨細胞增生修復(fù)。第九十一頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)軟骨

HE染色×400

單用藥12周時，軟骨表面光滑，細胞層次排列清晰，提示軟骨細胞幾乎完全修復(fù)。第九十二頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)軟骨

HE染色×400

聯(lián)合用藥2周時，可見關(guān)節(jié)軟骨表面略有凹陷，細胞層次減少，但未見到細胞壞死脫落。第九十三頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)軟骨

HE染色×400

聯(lián)合用藥4周時，關(guān)節(jié)軟骨表面無凹陷，細胞層次增多，各層排列較規(guī)則。

第九十四頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)軟骨

HE染色×400

聯(lián)合用藥12周時，可見軟骨表面光滑，細胞排列整齊，無異于正常軟骨。

第九十五頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

關(guān)節(jié)滑膜

HE染色×400

單用藥1天，可見滑膜間質(zhì)水腫，毛細血管擴張，但無充血或血栓形成，偶見少量的多形核粒細胞浸潤第九十六頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)滑膜

HE染色，×100

單用藥2周，滑膜間質(zhì)水腫減輕，未見表層滑膜細胞脫落，間質(zhì)內(nèi)有少量多形核粒細胞浸潤。第九十七頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)滑膜

HE染色，×100

單用藥4周，滑膜間質(zhì)無水腫，表面被覆增生的復(fù)層滑膜細胞，其下密集增生的纖維組織內(nèi)散布多數(shù)增生的滑膜腔隙，并可見巨噬細胞浸潤。

第九十八頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

關(guān)節(jié)滑膜

HE染色×400

單用藥12周，滑膜細胞細胞排列較規(guī)則，復(fù)層被覆于滑膜下結(jié)締組織表面，無巨噬細胞浸潤，已近完全修復(fù)。第九十九頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日關(guān)節(jié)滑膜

HE染色×400

聯(lián)合用藥早期（1天-2周）可見滑膜間質(zhì)水腫，偶見少量的多形核粒細胞浸潤，無充血或血栓形成，表層無細胞脫落。第一百頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

關(guān)節(jié)滑膜

HE染色×400

聯(lián)合用藥4周，可見滑膜膠原纖維增多，表面滑膜細胞增生，未見巨噬細胞浸潤，已開始修復(fù)。第一百零一頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

關(guān)節(jié)滑膜

HE染色×400

聯(lián)合用藥12周，可見滑膜細胞層次排列清晰，間質(zhì)內(nèi)無巨噬細胞浸潤，已完全修復(fù)。第一百零二頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日生化指標(biāo)測定結(jié)果第一百零三頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日中藥組、VitE組及中藥+VitE組均較單純?nèi)毖俟嘧⒔M丙二醛（MDA）含量明顯降低，差異有顯著性（P<0.01）。但中藥組與VitE組無顯著性差異（P>0.05）；其余任兩組間差異顯著（P<0.05）。

第一百零四頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日丙二醛（MDA）含量在1天組較高，之后逐漸下降，在12周又復(fù)回升，1天組與12周組間丙二醛含量差異顯著（P<0.01）。第一百零五頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

中藥組、VitE組及中藥+VitE組的超氧化物歧化酶活力均較單純組明顯升高，統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異（P<0.05）。但中藥組與VitE組無顯著性差異（P>0.05）；其余任兩組間差異顯著（P<0.01）。

活力值（NU/mg）第一百零六頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

各時間點超氧化物歧化酶（SOD）活力亦有顯著性差異（P<0.05），超氧化物歧化酶活力隨時間延長而逐漸回升。12周組與其他組間超氧化物歧化酶活力差異顯著（P<0.01），其余組間差異無顯著性（P>0.05）。

活力值（NU/mg）第一百零七頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日中藥組、VitE組及中藥+VitE組的NOS酶活力均較單純組明顯降低，統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異（P<0.05）。但中藥組與VitE組無顯著性差異（P>0.05）；其余任兩組間差異顯著（P<0.05）。

活力值（U/mg）第一百零八頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日各時間點NOS酶活力亦有顯著性差異（P<0.05），NOS酶活力隨時間延長而漸趨正常，12周組與其他組間NOS酶活力差異無顯著性（P>0.05），其余組間差異有顯著性（P<0.05）。活力值（U/mg）第一百零九頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日VitE與消靈仙注射液對關(guān)節(jié)生化、形態(tài)、功能的影響

對生化指標(biāo)的影響

關(guān)節(jié)缺血8小時后，在關(guān)節(jié)局部可產(chǎn)生大量的OFR，超過了超氧化物歧化酶。在應(yīng)用親水性氧自由基清除劑VitE后，可使局部關(guān)節(jié)滑膜組織中的丙二醛含量降低，且超氧化物歧化酶活力升高，隨時間的延長而療效更加顯著。

第一百一十頁，共一百一十八頁，2022年，8月28日

中藥消靈仙中阿魏酸鈉與黃芪酮等均是OFR清除劑，可使滑膜組織中丙二醛含量降低，超氧化物歧化酶活力升高。中藥消靈仙中以紅花黃色素為代表的活