關(guān)于貴州省豬6種豬病血清學(xué)的調(diào)查

2012年寒假專業(yè)實踐論文題目：貴州省豬6種豬病血清學(xué)調(diào)查學(xué)院：動物科學(xué)學(xué)院專業(yè)：動物醫(yī)學(xué)專業(yè)班級：09級(1)班學(xué)號：0909050200學(xué)生姓名：趙福友指導(dǎo)教師：周碧君教授2012年2月15日貴州省豬6種豬病血清學(xué)調(diào)查【摘要】采用ELISA方法對貴州省動物疫病研究室收集的血清進(jìn)行6種豬病(豬瘟、偽狂犬病、籃耳病、圓環(huán)病毒感染、細(xì)小病毒病、乙型腦炎)的血清學(xué)調(diào)查，并統(tǒng)計分析結(jié)果?！娟P(guān)鍵詞】貴州省豬;豬病;血清學(xué)調(diào)查【前言】豬瘟（classicalswinefever．CSF）俗稱"爛腸瘟"是由豬瘟病毒(HCV或CSFV)引起的一種具有高度傳染性疫病，是威脅養(yǎng)豬業(yè)的主要之一，其特征是：急性，呈敗血性變化，實質(zhì)器官出血，壞死和梗死；慢性呈性壞死性腸炎，后期常有副傷寒及繼發(fā)。是的一種急性接觸性傳染病，又稱。豬偽狂犬?。≒seudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病。健康豬與病豬、帶毒豬直接接觸可感染本病，還可經(jīng)皮膚傷口感染、空氣傳播，也可通過哺乳垂直傳播。豬感染本病時，因不同的年齡而表現(xiàn)不同[1]。種豬主要表現(xiàn)繁殖障礙；成年豬危害不嚴(yán)重，一般為隱性感染，主要表現(xiàn)呼吸系統(tǒng)癥狀，整體生產(chǎn)性能變差，但豬體可長期帶毒和排毒，成為本病的主要傳染源，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的損失。豬繁殖與呼吸綜合征(又稱藍(lán)耳病)(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的豬的一種高度接觸性傳染病,不同年齡、品種和性別的豬均能感染,但以妊娠母豬和1月齡以內(nèi)的仔豬最易感,該病以母豬流產(chǎn)、死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔豬呼吸困難、敗血癥、高死亡率等為主要特征[2,3]。該病毒在世界各地普遍流行,在我國也廣泛存在,疫情的流行在不同養(yǎng)殖場和不同地區(qū)均呈現(xiàn)動態(tài)變化,并且呈現(xiàn)不斷擴(kuò)大的蔓延趨勢,成為近幾年對養(yǎng)殖業(yè)危害比較嚴(yán)重的病毒性疾病。豬圓環(huán)病毒病（Porcinecircovirusdisease,PCVD）由豬圓環(huán)病毒(Porcinecircovirus,PCV)所引起的哺乳仔豬和育肥豬出現(xiàn)臨床或亞臨床型的一種傳染病，被世界各國獸醫(yī)界公認(rèn)為目前最重要的豬傳染病之一。PCV2可以引發(fā)斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、新生仔豬先天性震顫（PCT）、豬皮炎腎炎綜合癥（PDNS），與母豬繁殖障礙（RF），斷奶豬和育肥豬呼吸道綜合征（PRDC）、增生性壞死肺炎(PNP)、肉芽腫性腸炎及肝炎等疾病密切相關(guān)，成為豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病（PCVAD），并且PCV2與多種病原混合感染的現(xiàn)象十分普遍。豬細(xì)小病毒?。≒PVD）是由豬細(xì)小病毒（PPV）引起妊娠母豬流產(chǎn)、木乃伊胎、死胎和產(chǎn)弱仔為特征的繁殖障礙性疾病，在我國各地均有發(fā)生，給養(yǎng)豬業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。豬乙型腦炎即流行性乙型腦炎（epidemicencephalitisB）又稱日本乙型腦炎（Japaneseencephalitis），簡稱乙腦，是由流行性乙型腦炎病毒（日本乙型腦炎病毒JEV）引起的一種蚊媒性人畜共患的傳染病。JEV主要引起妊娠母豬突發(fā)流產(chǎn)，死胎或木乃伊胎；公豬多發(fā)生一側(cè)性睪丸炎；育肥豬持續(xù)高熱。本病不僅對養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且嚴(yán)重威脅著人類的健康。豬乙腦目前無特效的治療方法，而且病毒可經(jīng)胎盤垂直傳播，感染豬可長期帶毒，所以對其進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的診斷意義十分重大[4-6]。1材料和方法1．1血清樣本豬血清20份，按常規(guī)方法分離血清,-20℃儲存。該豬場已經(jīng)免疫豬瘟、豬偽狂、PRRSV/PPVJEV;未免疫PCV1．2試劑“豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒”（生產(chǎn)批號：111200），“豬偽狂犬病ELISA抗體檢測試劑盒”（生產(chǎn)批號：111201），“豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測試劑盒”（生產(chǎn)批號：111202），“豬圓環(huán)病毒ELISA抗體檢測試劑盒”（生產(chǎn)批號：111203），“豬細(xì)小病毒ELISA抗體檢測試劑盒”（生產(chǎn)批號：111204），“豬乙型腦炎病毒ELISA抗體檢測試劑盒”（生產(chǎn)批號：111205）。以上試劑盒均購自武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司。每個標(biāo)本均檢測豬瘟病毒抗體、偽狂犬病野毒抗體、籃耳病病毒抗體、圓環(huán)病毒抗體、細(xì)小病毒抗體、乙型腦炎病毒抗體共6項指標(biāo)。1.3檢測方法豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合癥病毒、豬圓環(huán)病毒2型、細(xì)小病毒、乙型腦炎樣品稀釋：在血清稀釋板中按1：40的體積稀釋待檢血清樣品（195ul樣品稀釋液中加5ul待檢血清樣品）。對照稀釋：在血清稀釋板中按1：40分別稀釋陽性對照和陰性對照（234ul樣品稀釋液中加6ul對照血清）。取抗原包被板（根據(jù)樣品多少，可以拆開分次使用），分別將稀釋好的待測血清和對照各取100ul加入到抗原包被板孔中，待檢樣品做1孔，陰性對照和陽性對照各設(shè)2孔。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30分鐘。甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200ul，靜置3分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共計洗滌5次。每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100ul，置37℃溫育30分鐘。洗滌5次，方法同2.切記每次在干凈吸水紙上拍干。每孔先加底物液A一滴（50ul）、再加底物B一滴（50ul）,混勻，室溫（18℃—25℃）避光顯色10分鐘。每孔加終止液一滴，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果（測定前在震蕩器上輕輕震動一下）。豬偽狂犬病毒血清樣品稀釋：在血清稀釋板中按1：1的體積稀釋待檢血清樣品（100ul樣品稀釋液中加100ul待檢血清樣品）。對照血清稀釋：在血清稀釋板中按1：1分別稀釋陽性對照和陰性對照（120ul樣品稀釋液中加120ul陽性和陰性對照）。取抗原包被板（根據(jù)樣品多少，可以拆開分次使用），分別將稀釋好的待測血清和對照各取100ul加入到抗原包被板孔中，待檢樣品做1孔，陰性對照和陽性對照各設(shè)2孔。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30分鐘。甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200ul，靜置3分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共計洗滌5次。每孔加酶標(biāo)記物100ul，置37℃溫育30分鐘。洗滌5次，方法同2.切記每次在干凈吸水紙上拍干。每孔先加底物液A一滴（50ul）、再加底物B一滴（50ul）,混勻，室溫（18℃—25℃）避光顯色10分鐘。每孔加終止液一滴，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果（測定前在震蕩器上輕輕震動一下）。2結(jié)果2.1豬瘟病毒血清抗體檢測結(jié)果豬瘟病毒抗體檢測：采用武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的“豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒”（生產(chǎn)批號：11004），以間接ELISA方法檢測血清抗體。試驗成立的條件是陽性對照孔平均值≥0.6；陰性對照孔平均值≤0.3。樣品效價（OD630值）大于0.35為陽性，小于0.35為陰性。結(jié)果見表1。表1豬瘟抗體檢測結(jié)果樣品標(biāo)號OD630陰陽性樣品標(biāo)號OD630陰陽性10.361+110.411+20.916+120.738+30.772+131.593+40.433+141.055+51.008+151.446+60.304-161.432+70.632+171.4+80.343-181.586+91.565+192.294+100.725+201.935+合計20陽性率90%附：陰性對照平均值為0.073，陽性對照平均值為0.875由表2可知，豬群豬瘟抗體陽性率較高為95.24%,根據(jù)農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《2011年國家動物疫病強(qiáng)制免疫計劃》的通知（農(nóng)醫(yī)發(fā)[2011]6）存欄豬抗體合格率≥70%為合格，該豬群豬瘟免疫合格。2.2偽狂犬病血清抗體檢測結(jié)果豬偽狂犬病血清抗體檢測：采用武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的“豬偽狂犬病ELISA抗體檢測試劑盒”（生產(chǎn)批號：111201），以間接ELISA方法檢測血清抗體。試驗成立的條件是陰性對照孔平均OD630值與陽性對照平均OD630值之差大于或等于0.4。樣品S/N值大于0.6為陰性，小于或等于0.6為陽性。結(jié)果見表2表2豬偽狂犬病血清抗體檢測結(jié)果樣品標(biāo)號OD630陰陽性樣品標(biāo)號OD630陰陽性10.645+110.295+21.203-120.163+31.297-130.166+41.296-140.229+51.201-150.19+61.241-160.272+71.333-170.174+81.238-180.132+91.165-190.201+101.22-200.225+合計20份陽性率60%附：陰性對照平均值為1.233，陽性對照平均值0.189由表3可知，豬偽狂犬病抗體陽性率為60%，根據(jù)農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《2011年國家動物疫病強(qiáng)制免疫計劃》的通知（農(nóng)醫(yī)發(fā)[2011]6）存欄豬抗體合格率≥70%為合格，該豬群豬偽狂犬免疫不合格。2.3豬繁殖與呼吸綜合征血清抗體檢測結(jié)果豬繁殖與呼吸綜合征血清抗體檢測：采用武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的“豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測試劑盒”（生產(chǎn)批號：110404），以間接ELISA方法檢測血清抗體。試驗成立的條件是陽性對照孔平均值≥0.7；陰性對照孔平均值≤0.3樣品OD630值大于0.42為陽性，小于0.38為陰性。結(jié)果見表3表3豬繁殖與呼吸綜合癥抗體樣品標(biāo)號OD630陰陽性樣品標(biāo)號OD630陰陽性10.168-110.76+21.314+120.503+30.974+131.863+41.86+140.185-51.67+151.054+62.126+160.22-71.323+170.923+81.6+181.393+91.831+191.45+101.159+200.656+合計20份陽性率85%附：陰性對照平均值0.11，陽性對照平均值1.46由表3可知，豬藍(lán)耳病抗體陽性率為85%，根據(jù)農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《2011年國家動物疫病強(qiáng)制免疫計劃》的通知（農(nóng)醫(yī)發(fā)[2011]6）存欄豬抗體合格率≥70%為合格，該豬群豬藍(lán)耳病免疫合格。2.4豬圓環(huán)病毒血清抗體檢測結(jié)果豬圓環(huán)病毒病抗體檢測：采用武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的“豬圓環(huán)病毒ELISA抗體檢測試劑盒”（生產(chǎn)批號：110402），以間接ELISA方法檢測血清抗體。試驗成立的條件是陽性對照孔平均值≥0.7；陰性對照孔平均值≤0.3。樣品OD630值大于0.42為陽性；小于0.38為陰性。結(jié)果見表4表4豬圓環(huán)病毒抗體檢測結(jié)果樣品標(biāo)號OD630陰陽性樣品標(biāo)號OD630陰陽性11.357+110.632+21.626+121.504+31.45+131.43+41.06+141.791+51.906+151.887+61.327+161.822+71.522+170.859+80.868+182.098+92.18+192.184+101.57+201.909+合計20份陽性率100%附：陰性對照平均值0.089，陽性對照平均值1.859血清樣本PCV抗體陽性率為100%；由于樣本豬場未免疫圓環(huán)疫苗，所以，PCV抗體系PCV2感染所致。2.5豬細(xì)小病毒血清抗體檢測結(jié)果豬細(xì)小病毒抗體檢測：采用武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的“豬細(xì)小病毒ELISA抗體檢測試劑盒”（生產(chǎn)批號：110803），以間接ELISA方法檢測血清抗體。試驗成立的條件是陽性對照孔平均OD630值≥0.6，陰性對照孔平均OD630值必須<0.3。樣品OD630值>0.4，判為陽性；樣品OD630值<0.4，判為陰性。結(jié)果見表5表5豬細(xì)小病毒抗體檢測結(jié)果樣品標(biāo)號OD630陰陽性樣品標(biāo)號OD630陰陽性10.069-111.082+20.871+120.958+30.52+130.113-40.935+140.625+51.504+151.276+60.559+161.246+70.425+171.222+80.737+180.28-91.443+190.811+100.326-200.997+合計20份陽性率80%附：陰性對照平均值0.27，陽性對照平均值1.626由表5可知，豬細(xì)小病毒病抗體陽性率為80%，根據(jù)農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《2011年國家動物疫病強(qiáng)制免疫計劃》的通知（農(nóng)醫(yī)發(fā)[2011]6）存欄豬抗體合格率≥70%為合格，該豬群豬細(xì)小病免疫合格。2.6豬乙型腦炎病毒血清抗體檢測結(jié)果豬乙型腦炎病毒病抗體檢測：采用武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)的“豬乙型腦炎病毒ELISA抗體檢測試劑盒”（生產(chǎn)批號：110603），以上試劑盒均購自武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司。以間接ELISA方法檢測血清抗體。試驗成立的條件是陽性對照孔平均OD630值≥0.6，陰性對照孔平均OD630值必須<0.3。樣品OD630值≥0.32，判為陽性；樣品OD630值<0.32，判為陰性。結(jié)果見表6表6豬乙型腦炎病毒抗體檢測結(jié)果樣品標(biāo)號OD630陰陽性樣品標(biāo)號OD630陰陽性10.071-110.992+20.8+120.811+30.298-130.132-40.537+140.377+50.559+150.677+60.292-160.771+70.245-170.937+81.432+180.175-90.771+190.312-100.517+200.14-合計20份陽性率40%附：陰性對照平均值0.085，陽性對照平均值1.342由表6可知，豬乙型腦炎抗體陽性率為40%，根據(jù)農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《2011年國家動物疫病強(qiáng)制免疫計劃》的通知（農(nóng)醫(yī)發(fā)[2011]6）存欄豬抗體合格率≥70%為合格，該豬群豬乙型腦炎免疫不合格。表76種豬病血清抗體檢測結(jié)果豬病名稱樣本數(shù)陽性數(shù)陽性率豬瘟201890%豬偽狂犬201260%藍(lán)耳病201785%圓環(huán)病毒病2020100%細(xì)小病毒病201680%乙型腦炎20840%3討論近年來，由于豬病的廣泛流行，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。特別是豬繁殖障礙性疾病已成為威脅和危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的一類重要疫病，據(jù)報道引起豬發(fā)生繁殖障礙的疾病有豬瘟、豬偽狂犬病、豬細(xì)小病毒感染、豬繁殖與呼吸綜合癥、豬乙型腦炎等［7］。調(diào)查結(jié)果：豬瘟是一種最常見的豬傳染病，每年有不同程度流行，從免疫結(jié)果發(fā)現(xiàn)對該豬群豬瘟的免疫成功。豬藍(lán)耳病是一種高度接觸性傳染病，呈地方流行性。PRRSV只感染豬，各種品種、不同年齡和用途的豬均可感染，患病豬和帶毒豬是本病的重要傳染源，主要傳播途徑是接觸感染、空氣傳播和精液傳播，也可通過胎盤垂直傳播，對該病的免疫結(jié)果為買內(nèi)衣成功。豬細(xì)小病毒病是豬的一種繁殖障礙性疾，調(diào)查資料顯示，對住細(xì)小病毒病的免疫成功。乙型腦炎是一種蟲媒人獸共患傳染病，傳播媒介以庫蚊為主；偽狂犬病是感染動物種類多和致病性強(qiáng)的一種病毒，除各種年