青霉素發(fā)酵生產(chǎn)工藝XXXX

青霉素及其發(fā)酵生產(chǎn)工藝1青霉素簡介

發(fā)現(xiàn)

化學(xué)結(jié)構(gòu)理化性質(zhì)抗菌作用和臨床應(yīng)用青霉素發(fā)酵生產(chǎn)工藝

菌種發(fā)酵工藝流程培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)控制提取精制2青霉素的發(fā)現(xiàn)1928年，英國細(xì)菌學(xué)家Fleming發(fā)現(xiàn)污染在培養(yǎng)葡萄球菌的雙蝶上的一株霉菌能殺死周圍的葡萄球菌。他將此霉菌分離純化后得到的菌株鑒定為青霉，并將這菌產(chǎn)生的抗生物質(zhì)命名為青霉素。31940年，英國Florey和Chain進(jìn)一步研究此菌，并從培養(yǎng)液中制出了干燥的青霉素制品。經(jīng)實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)證明，它毒性很小，并對一些革蘭氏陽性菌所引起的許多疾病有卓越療效。4青霉素類抗生素青霉素(Penicillin)又稱盤尼西林，是人類發(fā)現(xiàn)的第一種抗生素，也是目前全球銷量最大的抗生素。青霉素是β-內(nèi)酰胺類抗生素中的一類，是分子中含有青霉烷、能破壞細(xì)菌細(xì)胞壁并在細(xì)菌細(xì)胞的系列生長期起殺菌作用的一類抗生素。一種高效、低毒、臨床應(yīng)用廣泛的重要抗生素。它的研制成功大大增強(qiáng)了人類抵抗細(xì)菌性感染的能力，帶動了抗生素家族的誕生。5青霉素的化學(xué)結(jié)構(gòu)青霉素是β-內(nèi)酰胺類抗生素中的一類，具有β-內(nèi)酰胺環(huán)結(jié)構(gòu)；是分子中含有青霉素母核（青霉烷）的多種化合物的總稱。分子結(jié)構(gòu)球棍模型β-內(nèi)酰胺環(huán)6-氨基青霉烷酸6

青霉素類抗生素

青霉素G青霉素X青霉素V霉菌屬的青霉菌發(fā)酵液中提取，天然青霉素有多種G、V、N、K、X、其中PG的活性最高、產(chǎn)量最高。

青霉素N青霉素K7青霉素理化性質(zhì)一元有機(jī)酸一般的羧酸Pka4-6PGPka2.7（解離常數(shù)）8不穩(wěn)定性β–內(nèi)酰胺環(huán)是青霉素中最不穩(wěn)定的部分，原因：1、四元環(huán)和五元環(huán)稠合，環(huán)的張力大2、兩個環(huán)不在同一平面，青霉素結(jié)構(gòu)中β-內(nèi)酰胺環(huán)中羰基和氮原子的孤對電子不能共軛，易受到親核性或親電性試劑的進(jìn)攻，使β-內(nèi)酰胺環(huán)破裂。β-內(nèi)酰胺環(huán)對水、光、熱、酸、堿、酶、醇、胺不穩(wěn)定，β-環(huán)開裂、活性降低或消失9對堿或酶(β-內(nèi)酰胺酶)不穩(wěn)定，水解10對稀酸不穩(wěn)穩(wěn)定，發(fā)生生重排；PH=4青霉二酸青霉醛青霉胺-CO2對羰基親核反應(yīng)分解重排11對強(qiáng)酸不穩(wěn)穩(wěn)定，發(fā)生生重排PH=2orHgCl2

青霉酸+青霉醛酸

△青霉醛aβ-環(huán)開裂,-CO2abb12青霉素的理理化性質(zhì)青霉素本身身為一元有有機(jī)酸，可可與鉀、鈉鈉、鎂、鈣鈣、鋁和銨銨等化合成成鹽類。青霉素游離離酸易溶于于醇、酸、、醚、酯等等一般有機(jī)機(jī)溶劑，但但在碳?xì)浠衔镏腥苋芙舛群苄⌒。辉谒兄腥芙舛纫惨埠苄?，且且會迅速喪喪失抗菌能能力。青霉素金屬屬鹽類極易易溶于水；；幾乎不溶溶于乙醚、、氯仿、醋醋酸戊酯，，略溶于乙乙醇、丁醇醇、酮類和和醋酸乙酯酯。青霉素鈉鹽鹽、銨鹽、、鉀鹽吸濕濕性依次減減小，鈉鹽鹽比鉀鹽更更不易保存存。青霉素游離離酸不耐熱熱，一般保保存于冰箱箱中；但青青霉素鹽的的結(jié)晶純品品，穩(wěn)定性性很好，在在干燥條件件下可于室室溫保存數(shù)數(shù)年。青霉素鉀鹽鹽結(jié)晶，150℃℃加熱1.5h效價(jià)價(jià)無影響，，因此結(jié)晶晶青霉素可可干熱滅菌菌。青霉素臨床床上一般用用其鈉鹽、、鉀鹽或普普魯卡因鹽鹽，增強(qiáng)水水溶性。粉針劑，有有效期2年年臨床用粉針針劑，現(xiàn)用用現(xiàn)配13抗菌作用和和臨床應(yīng)用用青霉素主要要抑制革蘭蘭氏陽性細(xì)細(xì)菌，但對對某些革蘭蘭氏陰性細(xì)細(xì)菌，螺旋旋體及放線線菌也有較較強(qiáng)的抗菌菌作用。青青霉素的抗抗菌作用與與抑制細(xì)胞胞壁的合成成有關(guān)。青霉素臨床床上用于治治療葡萄球球菌傳染癥癥如腦膜炎炎、化膿炎炎、骨髓炎炎等，溶血血性鏈球菌菌傳染癥如如腹膜炎、、產(chǎn)褥熱，，以及肺炎炎、淋病、、梅毒和炭炭疽等。14青霉素的應(yīng)應(yīng)用溶血性鏈球球菌感染。。肺炎鏈球菌菌感染。不產(chǎn)青霉素素酶葡萄球球菌感染。。炭疽。破傷風(fēng)、氣氣性球疽等等梭狀芽孢孢桿菌感鉤端螺旋體體病。流行性腦脊脊髓膜炎。。放線菌病。。淋病。除脆弱擬桿桿菌以外的的許多厭氧氧菌感染。。青霉素與氨氨基糖苷燈燈藥物聯(lián)合合用于治療療草綠色鏈鏈球菌心內(nèi)內(nèi)膜炎。15青霉素發(fā)酵酵生產(chǎn)工藝藝1617青霉素制備備的一般流流程圖菌種孢子制備種子制備發(fā)酵發(fā)酵液預(yù)處處理及種子子加濾提取及精制制成品檢驗(yàn)成品包裝前體發(fā)酵階段提取精制18菌種目前國內(nèi)青青霉素生產(chǎn)產(chǎn)菌按其在在深層培養(yǎng)養(yǎng)中菌絲的的形態(tài)分為為絲狀菌和和球狀菌兩兩種，根據(jù)據(jù)絲狀菌產(chǎn)產(chǎn)生孢子的的顏色又分分為黃孢子子絲狀菌和和綠孢子絲絲狀菌，常常用菌種為為綠孢子絲絲狀菌，如如產(chǎn)黃青霉素素。19菌種青霉素最初初生產(chǎn)菌為為音符型青青霉菌，生生產(chǎn)能力僅僅為幾十個個單位，不不能滿足工工業(yè)生產(chǎn)需需要。后來來發(fā)現(xiàn)適合合深層培養(yǎng)養(yǎng)的新菌種種——產(chǎn)黃黃青霉，生生產(chǎn)能力100U/ml，經(jīng)經(jīng)不斷誘變變選育，目目前平均生生產(chǎn)能力66000-70000U/ml，國國際最高生生產(chǎn)能力已已超100000U/ml。。20青霉素產(chǎn)生生菌的生長長過程分生孢子發(fā)發(fā)芽期菌絲繁殖殖期脂肪粒形形成期脂肪粒減減少，小小空孢大空孢自溶菌絲生長長期青霉素分分泌期菌絲自溶溶期211－4期期為菌絲絲生長期期，3期期的菌體體適宜為為種子。。

4－－5期為為生產(chǎn)期期，生產(chǎn)產(chǎn)能力最最強(qiáng)，通通過工程程措施，，延長此此期，獲獲得高產(chǎn)產(chǎn)。在在第六期期到來之之前結(jié)束束發(fā)酵。。22青霉素發(fā)發(fā)酵過程程中的代代謝變化化分為菌體生長長、青霉霉素合成成和菌體體自溶三個階段段。菌體生長長階段：發(fā)酵培培養(yǎng)基接接種后生生產(chǎn)菌在在合適的的環(huán)境中中經(jīng)過短短時間的的適應(yīng)，，即開始始發(fā)育、、生長和和繁殖，，直至達(dá)達(dá)到菌體體的臨界界濃度。。青霉素合合成階段段：這個階階段主要要合成青青霉素，，青霉素素的生產(chǎn)產(chǎn)速率達(dá)達(dá)到最大大，并一一直維持持到青霉霉素合成成能力衰衰退。在在這個階階段，菌菌體重量量有所增增加，但但產(chǎn)生菌菌的呼吸吸強(qiáng)度一一般無顯顯著變化化。菌體自溶溶階段：這個階階段菌體體衰老，，細(xì)胞開開始自溶溶，合成成青霉素素能力衰衰退，青青霉素生生產(chǎn)速率率下降，，氨基氮氮增加，，PH上上升。23絲狀菌三三級發(fā)酵工藝藝流程冷冷凍管管（25°C，，孢子培培養(yǎng)，7天）———斜面面母瓶（（25°°C，孢孢子培養(yǎng)養(yǎng)，7天天）———大米孢孢子（26°C，種子子培養(yǎng)56h））——一一級種子子培養(yǎng)液液（27°C，，種子培培養(yǎng)，24h））——二二級種子子培養(yǎng)液液（27~26°C,發(fā)酵,7天））——發(fā)發(fā)酵液。。24青霉素發(fā)發(fā)酵過程程青霉素發(fā)發(fā)酵時，，青霉素素生產(chǎn)菌菌在合適的培培養(yǎng)基、、PH、、溫度和和通氣攪攪拌等發(fā)酵條條件下進(jìn)進(jìn)行生長長并合成成青霉素素。發(fā)酵開始始前，有有關(guān)設(shè)備備和培養(yǎng)養(yǎng)基（主主要是碳碳源、氮氮源、前前體和無無機(jī)鹽等等）必須須先經(jīng)過過滅菌，后接入入種子。。在整個過過程中，，需要不不斷通氣氣和攪拌拌，維持持一定的的罐溫和和罐壓，，在發(fā)酵酵過程中中往往要要加入泡沫劑，假如酸酸堿控制制發(fā)酵液液的PH，還需需要間歇歇或連續(xù)續(xù)的加入入葡萄糖糖及銨鹽鹽等化合合物以補(bǔ)補(bǔ)充碳源及氮氮源，或補(bǔ)進(jìn)進(jìn)其他料料液和前前體等以以促進(jìn)青青霉素的的生產(chǎn)。。25青霉素的的發(fā)酵發(fā)酵工藝藝控制：：1.基質(zhì)質(zhì)濃度2.培養(yǎng)養(yǎng)基成分分的控制制3.溫度度4.pH值值、溶氧氧5.菌絲絲狀態(tài)6.泡沫沫的控制制26發(fā)酵工藝藝控制1.基質(zhì)質(zhì)濃度：在發(fā)酵過過程中，，常常因因?yàn)榍捌谄诨|(zhì)量量濃度過過高，對對生物合合成酶系系產(chǎn)生阻阻遏或?qū)z生生長產(chǎn)生生抑制（（如葡萄萄糖的阻阻遏和抑抑制,苯乙乙酸的生生長抑制制）,而而后期期基質(zhì)濃濃度低限限制了菌菌絲生長長和產(chǎn)物物合成。。所以，在在青霉霉素發(fā)酵酵中通常常采用補(bǔ)補(bǔ)料分批批操作法法，以以維持一一定的最最適濃度度。27發(fā)酵工藝藝控制2.培養(yǎng)養(yǎng)基成分分的控制制:A.碳源：發(fā)酵中常常用乳酸酸或葡萄萄糖。乳糖最為為便宜，，但因貨貨源較少少，很多多國家采采用葡萄萄糖代替替。但當(dāng)當(dāng)葡萄糖糖濃度超超過一定定限度時時，會過過分加速速菌體的的呼吸，，以至培培養(yǎng)基中中的溶解解氧不能能滿足需需要，使使一些中中間代謝謝物不能能完全氧氧化而積積累在菌菌體或培培養(yǎng)基中中，導(dǎo)致致pH下下降，影影響某些些酶的活活性，從從而抑制制微生物物的生長長和產(chǎn)物物的合成成。目前普遍遍采用淀淀粉的酶酶水解產(chǎn)產(chǎn)物，葡葡萄糖化化液流加加，以降降低成本本。28發(fā)酵工藝藝控制B.氮源：主要有機(jī)機(jī)氮源為為玉米漿漿、棉籽籽餅粉、、花生餅餅粉、酵酵母粉、、蛋白胨胨等。玉米漿為為較理想想的氮源源，含固固體量少少，有利利于通氣氣及氧的的傳遞，，因而利利用率較較高。有機(jī)氮源源還可以以提供一一部分有有機(jī)磷，，供菌體體生長。。無機(jī)氮氮如硝酸酸鹽、尿尿素、硫硫酸銨等等可適量量使用。。29發(fā)酵工藝控制制C.無機(jī)鹽：：碳酸鈣用來中中和發(fā)酵過程程中產(chǎn)生的雜雜酸，并控制制發(fā)酵液的pH值為菌體提供營營養(yǎng)的無機(jī)磷磷源一般采用用磷酸二氫鉀鉀。另外加入硫代代硫酸鈉或硫硫酸鈉以提供供青霉素分子子中所需的硫硫。鐵離子對青霉霉素有毒害作作用，應(yīng)嚴(yán)格格控制發(fā)酵液液中鐵含量在在30ug/mL以下。?，F(xiàn)在還有一一些工廠采用用鐵罐發(fā)酵，，在發(fā)酵過程程中鐵離子便便逐漸進(jìn)入發(fā)發(fā)酵液；發(fā)酵酵時間愈長，，則鐵離子愈愈多。鐵離子子在50μg/ml以上上便會影響青青霉素的合成成。所以青霉霉素的發(fā)酵罐罐采用不銹鋼鋼制造為宜。。30發(fā)酵工藝控制制D.前體：前體的加入是是青霉素發(fā)酵酵的關(guān)鍵問題題之一。添加苯乙酸或或者苯乙酰胺胺，可以借酰?；D(zhuǎn)移的作作用，將苯乙乙酸轉(zhuǎn)入青霉霉素分子，提提高青霉素G的生產(chǎn)強(qiáng)度度。但苯乙酸對發(fā)發(fā)酵有影響，，一般以苯乙乙酰胺較好。。也有采用苯乙乙酸月桂醇酯酯，其優(yōu)點(diǎn)是是在發(fā)酵中月月桂醇酯水解解，苯乙酸結(jié)結(jié)合進(jìn)青霉素素成品。而月月桂酸作為細(xì)細(xì)菌營養(yǎng)劑及及發(fā)酵液消沫沫劑，且其毒毒性比苯乙酸酸小，但價(jià)格格較貴。前體要在發(fā)酵酵開始20h后加入，并并在整個發(fā)酵酵過程中控制制在50μg/ml左右右。前體用量量大于0.1%時，青霉霉素的生物合合成均下降。。所以一般發(fā)發(fā)酵液中前體體濃度以始終終維持在0.1%為宜。。31發(fā)酵工藝控制制3.溫度：青霉素發(fā)酵的的最適溫度隨隨所用菌株的的不同可能稍稍有差別,但一般認(rèn)認(rèn)為應(yīng)在25°C左左右。溫度過過高將明顯降降低發(fā)酵產(chǎn)率率,同時時增加葡萄糖糖的維持消耗耗,降低低葡萄糖至青青霉素的轉(zhuǎn)化化率。對菌絲絲生長和青霉霉素合成來說說,最適適溫度不是一一樣的,一一般前者略高高于后者,故故有的發(fā)酵酵過程在菌絲絲生長階段采采用較高的溫溫度，以縮短短生長時間,到達(dá)生產(chǎn)產(chǎn)階段后便適適當(dāng)降低溫度度,以利利于青霉素的的合成。32發(fā)酵工藝控制制4.pH值值、溶氧：：pH值：青霉霉素發(fā)酵的最最適pH值值一般認(rèn)為在在6.8～7.2左右,應(yīng)盡盡量避免pH值超過過7.0。因因?yàn)榍嗝顾卦谠趬A性條件下下不穩(wěn)定,容容易加速其水水解。溶氧:對于好好氧的青霉素素發(fā)酵來說,溶氧濃度是是影響發(fā)酵過過程的一個重重要因素。當(dāng)當(dāng)溶氧濃度降降到30%飽飽和度以下時時,青霉素產(chǎn)產(chǎn)率急劇下降降,低于10%飽和度時時,則造成不不可逆的損害害。溶氧濃度度過高,說明明菌絲生長不不良或加糖率率過低,造成成呼吸強(qiáng)度下下降,同樣影影響生產(chǎn)能力力的發(fā)揮。在罐的夾層或或蛇管中需通通冷卻水以維維持一定罐溫溫。在整個發(fā)酵過過程中，需不不斷通無菌空空氣和攪拌，，以維持一定定罐壓或溶氧氧。335.菌絲狀狀態(tài)：菌絲濃度：發(fā)發(fā)酵過程中必必須控制菌絲絲濃度不超過過臨界菌體濃度度,從而使氧氧傳遞速率與與氧消耗速率率在某一溶氧氧水平上達(dá)到到平衡。菌絲生長速度度：在葡萄糖糖限制生長的的條件下，當(dāng)當(dāng)比生長速率率低于0.015h-1時，比生產(chǎn)產(chǎn)速率與比生生長速率成正正比。因此,要在發(fā)酵酵過程中達(dá)到到并維持最大大比生產(chǎn)速率率,必須使比比生長速率不不低0.015h-1。。菌絲形態(tài)：青青霉素產(chǎn)生菌菌分化主要呈呈絲狀生長和和結(jié)球生長兩兩種形態(tài)。在在絲狀菌發(fā)酵酵中,控制菌菌絲形形態(tài)使使其保保持適適當(dāng)?shù)牡姆种еШ烷L長度,并并避免免結(jié)球球,是是獲得得高產(chǎn)產(chǎn)的關(guān)關(guān)鍵要要素之之一。。而在在球狀狀菌發(fā)發(fā)酵中中,使菌絲絲球保保持適適當(dāng)大大小和和松緊緊,并并盡量量減少少游離離菌絲絲的含含量,也也是充充分發(fā)發(fā)揮其其生產(chǎn)產(chǎn)能力力的關(guān)關(guān)鍵素素之一一。34發(fā)酵工工藝控控制6.泡泡沫的的控制制：在發(fā)酵酵過程程中產(chǎn)產(chǎn)生大大量泡泡沫,可可以用用天然然油脂脂,如如豆豆油、、玉米米油等等或用用化學(xué)學(xué)合成成消泡泡劑““泡泡敵敵””來來消泡泡。應(yīng)當(dāng)控控制其其用量量并要要少量量多次次加入入,尤尤其其在發(fā)發(fā)酵前前期不不宜多多用,否否則會會影響響菌體體的呼呼吸代代謝。。加消沫沫劑控控制泡泡沫，，必要要時還還加入入酸、、堿以以調(diào)節(jié)節(jié)發(fā)酵酵液的的pH。35染菌菌處處理理染菌是是發(fā)酵酵工業(yè)業(yè)長期期以來來不能能徹底底解決決的問問題，，因此此如何何解決決染菌菌問題題就成成了發(fā)發(fā)酵工工業(yè)的的工作作重點(diǎn)點(diǎn)之一一。要要解決決染菌菌問題題首要要問題題就是是要能能檢測測出是是否染染菌。。染染菌菌通常常通過過三個個途徑徑發(fā)現(xiàn)現(xiàn)：無無菌試試驗(yàn)，，發(fā)酵酵液直直接鏡鏡檢，，發(fā)酵酵液的的生化化分析析。其其中無無菌試試驗(yàn)是是判斷斷染菌菌的主主要依依據(jù)。。36染菌菌的的處處理理染菌在在發(fā)酵酵過程程的每每個階階段都都可能能發(fā)生生，下下面就就各個個不同同的階階段的的染菌菌情況況和處處理辦辦法一一一說說明。。⒈種子子培養(yǎng)養(yǎng)期染染菌⒉⒉發(fā)發(fā)酵前前期染染菌⒊⒊發(fā)發(fā)酵中中期染染菌⒋⒋發(fā)發(fā)酵后后期染染菌37染菌菌的的處處理理⒈種子子培養(yǎng)養(yǎng)期染染菌種子培培養(yǎng)主主要是是生長長繁殖殖菌體體。此此時菌菌體濃濃度低低，培培養(yǎng)基基營養(yǎng)養(yǎng)豐富富，因因此容容易染染菌。。種子子培養(yǎng)養(yǎng)期染染菌，，帶進(jìn)進(jìn)發(fā)酵酵罐中中的危危害極極大，，應(yīng)嚴(yán)嚴(yán)格控控制種種子污污染。。當(dāng)發(fā)發(fā)現(xiàn)種種子受受污染染后均均應(yīng)滅滅菌后后棄去去，并并對種種子罐罐、管管道進(jìn)進(jìn)行檢檢查和和徹底底滅菌菌。返回回38染菌菌的的處處理理⒉發(fā)酵酵前期期染菌菌發(fā)酵前前朗主主要是是菌體體生長長繁殖殖，代代謝產(chǎn)產(chǎn)物生生成很很少，，染菌菌后雜雜菌容容易繁繁殖，，與生生產(chǎn)菌菌爭奪奪營養(yǎng)養(yǎng)成分分和氧氧分，，嚴(yán)重重干擾擾生產(chǎn)產(chǎn)菌的的生長長繁殖殖和產(chǎn)產(chǎn)物的的生成成，因因此要要特別別注意意發(fā)酵酵前期期的染染菌。。當(dāng)發(fā)發(fā)酵前前期染染菌時時，由由于營營養(yǎng)成成分消消耗不不多，，能耗耗也不不大，，從經(jīng)經(jīng)濟(jì)性性的角角度考考慮應(yīng)應(yīng)迅速速重新新滅菌菌，補(bǔ)補(bǔ)充必必要的的營養(yǎng)養(yǎng)成分分，重重新接接種進(jìn)進(jìn)行發(fā)發(fā)酵。。返回回39染菌菌的的處處理理⒊發(fā)酵酵中期期染菌菌發(fā)酵中中期染染菌將將嚴(yán)重重干擾擾生產(chǎn)產(chǎn)菌的的代謝謝，影影響產(chǎn)產(chǎn)物的的生成成。如如產(chǎn)酸酸，產(chǎn)產(chǎn)泡沫沫，使使菌體體自溶溶，使使發(fā)酵酵液變變臭等等。發(fā)發(fā)酵中中期染染菌，，由于于營養(yǎng)養(yǎng)成分分大量量消耗耗，一一般挽挽救處處理困困難，，危害害性大大，發(fā)發(fā)酵中中期染染菌應(yīng)應(yīng)做到到早發(fā)發(fā)現(xiàn)，，早處處理，，通常常做法法是““倒罐罐”，，即用用一罐罐沒有有染菌菌的發(fā)發(fā)酵液液與染染菌的的發(fā)酵酵液混混合，，使有有害菌菌濃度度下降降，生生產(chǎn)菌菌濃度度提高高進(jìn)而而重新新成為為優(yōu)勢勢生長長菌群群。顯顯然，，倒罐罐必然然造成成物料料消耗耗和操操作費(fèi)費(fèi)用的的增加加。返回回40染菌菌的的處處理理⒋發(fā)發(fā)酵酵后后期期染染菌菌發(fā)酵酵后后期期產(chǎn)產(chǎn)物物積積累累較較多多，，效效價(jià)價(jià)已已經(jīng)經(jīng)很很高高，，營營養(yǎng)養(yǎng)物物質(zhì)質(zhì)接接近近耗耗盡盡，，此此時時如如染染菌菌量量不不多多，，可可繼繼續(xù)續(xù)進(jìn)進(jìn)行行發(fā)發(fā)酵酵，，如如嚴(yán)嚴(yán)重重污污染染也也可可提提前前放放罐罐，，停停止止發(fā)發(fā)酵酵，，這這在在經(jīng)經(jīng)濟(jì)濟(jì)上上往往往往是是合合算算的的。。41下游游操操作作過濾濾萃取取脫色色結(jié)晶晶42發(fā)酵酵液液預(yù)預(yù)處處理理青霉霉菌菌素素發(fā)發(fā)酵酵后后，，放放罐罐，，加加少少量量絮絮凝凝劑劑沉沉淀淀蛋蛋白白，，然然后后經(jīng)經(jīng)真真空空轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)鼓鼓過過濾濾或或板板框框過過濾濾（（青青霉霉菌菌絲絲較較粗粗，，過過濾濾較較容容易易）），，除除掉掉菌菌絲絲體體及及部部分分蛋蛋白白，，過過濾濾收收率率一一般般在在90%左左右右。。青霉霉素素易易降降解解，，發(fā)發(fā)酵酵液液及及濾濾液液應(yīng)應(yīng)冷冷卻卻至至10℃低低溫溫保保存存，，備備后后續(xù)續(xù)提提取取精精制制。通常常發(fā)發(fā)酵酵液液中中青青霉霉素素濃濃度度很很低低，，僅僅0.1%~4.5%左左右右，，而而雜雜質(zhì)質(zhì)濃濃度度比比青青霉霉素素的的高高幾幾十十倍倍甚甚至至幾幾千千倍倍。。發(fā)發(fā)酵酵液液中中常常見見的的雜雜質(zhì)質(zhì)有有：：菌菌絲絲、、未未用用完完的的培培養(yǎng)養(yǎng)基基、、易易污污染染雜雜菌菌、、產(chǎn)產(chǎn)生生菌菌的的代代謝謝產(chǎn)產(chǎn)物物等等。。43提取取溶媒媒萃萃取取法法青霉霉素素游游離離酸酸易易溶溶于于有有機(jī)機(jī)溶溶劑劑，，而而青青霉霉素素鹽鹽易易溶溶于于水水。。利利用用這這一一性性質(zhì)質(zhì)，，在在酸酸性性條條件件下下青青霉霉素素轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)入入有有機(jī)機(jī)溶溶媒媒中中，，調(diào)調(diào)節(jié)節(jié)pH，，再再轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)入入中中性性水水相相，，反反復(fù)復(fù)幾幾次次萃萃取取，，即即可可提提純純濃濃縮縮。。常用用有有機(jī)機(jī)溶溶劑劑：：醋醋酸酸丁丁酯酯（（或或戊戊酯酯））44提取取溶媒媒萃萃取取法法萃取取2-3次次。。從從發(fā)發(fā)酵酵液液萃萃取取到到醋醋酸酸丁丁酯