胺類藥物的分析

第七章芳胺類藥物的分析中山大學(xué)藥學(xué)院中澳中醫(yī)藥研究中心萬金志2010-4COH（R）NH2對(duì)氨基水楊酸OOH酸性，鈉鹽可溶于水，酸化析出，可與堿定量反應(yīng)，水楊酸、阿司匹林、雙水楊酸的酸性較強(qiáng)，可在乙醇中用堿滴定。酚羥基，潛在酚羥基，可與FeCl3

反應(yīng)顏色。酯類藥物易水解而分解，如阿司匹林、雙水楊酯。產(chǎn)生HAc氨基，潛在氨基可進(jìn)行重氮化—偶聯(lián)反應(yīng)顏色。定量、定性。苯環(huán)、羧基UV定量，IR定性。

特殊雜質(zhì)檢查復(fù)習(xí)：芳胺類藥物

本章講述對(duì)氨基苯甲酸酯類和乙酰苯胺類以及苯乙胺類藥物。前者芳伯胺基存在，且未被取代，在對(duì)位有取代（甲酸及其衍生物）；后者芳伯胺基被乙?；?，苯環(huán)鄰、對(duì)位有取代基團(tuán)；。第三者是以苯乙胺作為基本結(jié)構(gòu)。含有氨基基團(tuán)的藥物統(tǒng)稱為胺類藥物，有：芳胺類、芳烴胺類、季銨鹽類和磺酰胺類(-SO2-NHR)藥物等等。芳胺的特征是：氨基與芳環(huán)直接相連，在此衍生出許多種藥物。芳胺類藥物對(duì)氨基苯甲酸類鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因胺苯佐卡因乙酰苯胺類醋氨苯砜對(duì)乙酰氨基酚鹽酸利多卡因苯乙胺類腎上腺素重酒石酸腎上腺素異丙腎上腺素氨基醚衍生物類鹽酸苯海拉明鹽酸美西律芳胺類芳烴胺類一、對(duì)氨基苯甲酸酯類NH2COORH2NCNHCH2CH2NOC2H5C2H5鹽酸普魯卡因胺芳伯氨基存在對(duì)氨基苯甲酸二乙氨基乙酯典型藥物3種1.基本結(jié)構(gòu)·HCl-OSNaNO2HClOH－含量測定（容量法）原料、注射劑紅色鑒別、含量測定酯鍵水解鑒別鹽酸普魯卡因白色油狀物試紙變色冷白色苯佐卡英因（臭氣）NaOH△△△△HClNaOHⅠ2CHI3UV、IR光譜用于鑒別，鹽酸普魯卡因與鹽酸普魯卡因胺的區(qū)別2.官能團(tuán)與分析方法P.115·HCl-NH-H2O2FeCl3異羥肟酸紫色普魯卡因胺△Ar-NNCl

＋HO-ChP三種藥物均有專屬反應(yīng)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，而差別小棕、黑

鹽酸普魯卡因ChP（2000）[鑒別]（2）取本品約0.1g，加水2ml溶解后，加10％氫氧化鈉溶液1ml，即生成白色沉淀；加熱，變?yōu)橛蜖钗?；繼續(xù)加熱，產(chǎn)生的蒸氣，能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變?yōu)樗{(lán)色；熱至油狀物消失后，放冷，加鹽酸酸化，即析出白色沉淀。

鹽酸普魯卡因ChP（2000）[鑒別]（1）本品顯芳香第一胺類的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）取供試品約50mg，加稀鹽酸1m1，必要時(shí)緩緩煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亞硝酸鈉溶液數(shù)滴，滴加堿性β-萘酚試液數(shù)滴，視供試品不同，生成由橙黃到猩紅色沉淀。

重氮化反應(yīng)歷程：NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HCl

NOCl+H2O+-Ar－NH2+NO+

Cl－慢Ar－N－NOAr－N=N－OH快Ar－N≡NCl快H··大π電子體穩(wěn)定+-（有機(jī)反應(yīng)是分子間的碰撞反應(yīng)，反應(yīng)速度較慢，對(duì)于重氮化的第一步是慢反應(yīng)，是系列反應(yīng)中的限速反應(yīng)）。⑴酸度；要在強(qiáng)酸性條件下進(jìn)行①反應(yīng)加H+

有利NOCl

的生成，②有利于－N≡NCl的穩(wěn)定。③防止生成偶氮氨共價(jià)化合物。重氮化滴定

Ar－N2Cl+H2N－Ar

Ar－N=N－NH－Ar+HCl⑵催化劑KB加入，使產(chǎn)生NO的濃度大大加大。HNO2+HBr

NOBr+H2OK1HNO2+HCl

NOCl+H2OK2反應(yīng)速度K1≥300K2

大300倍，同條件下NOBr是NOCl的300倍。

HBr的酸性≥HCl⑶合適的溫度：10℃～30℃，溫度高對(duì)重氮化有利，但可使HNO2揮發(fā)逸失，重氮鹽分解。O=NOH+HXNO

X+H2O-++⑸指示終點(diǎn)的方法①外指示劑法，2NaNO2（過量一點(diǎn)）+2KI+HCl2NO+I2+KCl+H2O不方便、誤差大、時(shí)間長、費(fèi)事。②永停滴定法——即電流滴定法：用鉑電極、電源組成一個(gè)電解池，終點(diǎn)前，無在此電壓下可氧化還原的物質(zhì)，故電流表不動(dòng)，或會(huì)回零，但當(dāng)終點(diǎn)后過量一滴NaNO2存在，在電極上產(chǎn)生氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)生電流，指針偏向一邊指示終點(diǎn)。淀粉藍(lán)色⑷滴定速度

滴定開始時(shí)將滴定管插入液內(nèi)進(jìn)行滴定（2/3處），一次將大部分NaNO2迅速加入，到近終點(diǎn)時(shí)才將滴定管提出緩緩滴定，到終點(diǎn)前1～2滴要等反應(yīng)進(jìn)行1～5分鐘才能判定終點(diǎn)是否到達(dá)。Detectionmethodsofend-point①dead-stopend-pointmethod[ChP(90)]twoplatinumelectrodesThenegativepole可逆電對(duì)Thepositivepole永停滴定法（附錄ⅦA）

用作重氮化法的終點(diǎn)指示時(shí)，調(diào)節(jié)R1使加于電極上的電壓約為50mV。取供試品適量，精密稱定，置燒杯中，除另有規(guī)定外，可加水40ml與鹽酸溶液（1→2）15ml，而后置電磁攪拌器上，攪拌使溶解，再加溴化鉀2g，插入鉑—鉑電極后，將滴定管的尖端插入液面下約2/3處，用亞硝酸鈉滴定液（0.1mol/L或0.05mol/L）迅速滴定，隨滴隨攪拌，至近終點(diǎn)時(shí)，將滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，繼續(xù)緩緩滴定，至電流計(jì)指針突然偏轉(zhuǎn)，并不再回復(fù)，即為滴定終點(diǎn)。永停法存在的問題ⅠVVe終點(diǎn)不能正確判斷對(duì)于撲熱息痛這類樣品其滴定曲線為12

34I2TNa2S2O3IV

Na2S2O3TI2

NaNO2T對(duì)氨基酚Ce4+TFe2+實(shí)際上后二類是很難確定終點(diǎn)的,為此我們?cè)M(jìn)行過改進(jìn).雙金屬電流滴定法原理上，它不是一個(gè)電解池而是一個(gè)原電池，終點(diǎn)前后都不發(fā)生電解反應(yīng)，電流的產(chǎn)生是因?yàn)榻K點(diǎn)前后二電極的電位發(fā)生突變而形成。實(shí)際上其中的銀電極的電位幾乎不變而鉑電極的電位發(fā)生突變從650mV710mV突變60mV，二電極產(chǎn)生電位差,電流表中有電流流過。（藥檢工作通信1978，8（2））·銀電極鉑電極Ⅰ滴定分析自動(dòng)化智能化動(dòng)態(tài)滴定，等量滴定，設(shè)定終點(diǎn)滴定，自動(dòng)配液，清洗，取樣，樣品識(shí)別12-48個(gè)樣品，28-141個(gè)樣品自動(dòng)分析。作圖法計(jì)算終點(diǎn)法計(jì)算求值法現(xiàn)代滴定分析－COOCH2CH2N

H2N－EtEt·HClH2O△－COOH

H2N－+HOCH2CH2N·HCl

EtEtN－MeMe－CHO乙醚提取H+酯N=MeMe=CH－NH－

－COOH+黃色比色測定3、特殊雜質(zhì)檢查

精密量取本品，加乙醇稀釋使成為2.5mg／1ml的溶液，作為供試品溶液。取對(duì)氨基苯甲酸對(duì)照品，加乙醇制成30g／1ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。取上述兩種溶液各10l，分別點(diǎn)于含有羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14∶1∶1∶4）為展開劑，展開后，取出晾干，用對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液（2％對(duì)二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成）噴霧顯色。供試品溶液如顯與對(duì)照品溶液相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對(duì)照品溶液主斑點(diǎn)比較，不得更深。

TLC法（限量？）二、乙酰苯氨類1.結(jié)構(gòu)氨基被?；江h(huán)上有取代基，酰基上也有取代基基典型藥物醋氨苯砜對(duì)乙酰氨基酚利多卡因

布比卡因2.官能團(tuán)與分析方法酰胺鍵羥基者紫色鑒別FeCl3H＋NaNO2OH－橙紅色鑒別R2、R3為甲基者利多卡因布比卡因不被水解，無此反應(yīng)，可作區(qū)別SHg(AC)2－HACHClO4

T－HClO4＋

HAC結(jié)晶紫綠色測定

mp鑒別R4中含叔氮者酰胺氮上的氫有一定的活潑性可以和Cu藍(lán)色、Co綠色絡(luò)合CuCoCHCl3鑒別或區(qū)別P.162△△對(duì)乙酰氨基酚ChP利多卡因布比卡因鹽酸－普魯卡因、苯佐卡因等無此反應(yīng)黃色碳酸鈉P.171P.163鹽酸利多卡因布比卡因區(qū)別反應(yīng)NCOCH2EtEtNCUP.162利多卡因三硝基苯酚衍生物

鹽酸利多卡因ChP（2000）[鑒別]取本品0.2g，加水20ml溶解。（1）取溶液10ml，加三硝基苯酚試液10ml，即生成沉淀；濾過，沉淀用水洗滌后，干燥，依法測定（附錄ⅥC），熔點(diǎn)為228～232℃，熔融時(shí)同時(shí)分解。鹽酸布比卡因ChP（2000）與生物堿沉淀試劑反應(yīng)具有烴胺側(cè)鏈，與生物堿沉淀試劑反應(yīng).根據(jù)沉淀顏色或測定沉淀熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別。常用生物堿沉淀試劑：碘試液,碘化汞鉀試液,苦味酸試液等。

鹽酸布比卡因ChP（2000）[鑒別]（2）取本品，精密稱定，按干燥品計(jì)算，加0.01mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液，照分光光度法（附錄ⅣA）測定，在263nm與271nm的波長處有最大吸收；其吸收度分別為0.53～0.58與0.43～0.48。UV

HClH2SO4

△Ar-NH2NaNO2HCl重氮鹽含量測定橙紅色

鑒別含量測定專屬性不高三、苯乙胺類藥物1.結(jié)構(gòu)典型藥物腎上腺素重酒石酸去甲腎上腺素鹽酸去氧腎上腺素鹽酸多巴胺·HCl·HCl（兒茶酚胺）羥基醇酚苯乙胺類22.官能團(tuán)與分析方法脂烴氨基具有弱堿性，其原料藥基本采用非水堿量法進(jìn)行含量測定。凡鹽酸鹽加Hg(AC)2.SHAC,HClO4T結(jié)晶紫AC2O紫藍(lán)綠

酚OH,FeCl3NH3·H2ONaHCO3綠色紫，紅酚OH甲醛H2SO4紅到棕色醌酚OH〔O〕PH淡紅到棕H2O2、Ⅰ2、K3〔Fe(CN)6〕氧化力順序遞減，其中碘在中酸性PH=3.6時(shí)不能氧化重酒石酸去甲腎上腺素，用于鑒別和區(qū)別。

Ｐ.176鑒別定量烷烴氨基醇紫色例外麻黃堿的銅絡(luò)合物溶于乙醚，醚層顯紫色CuSO4OH－Et2O醚層去氧腎上腺素苯環(huán)羥基鄰對(duì)位氫活潑，可被Br2

定量取代，可用溴量法定量。3Br2SBr2KⅠⅠ2NaS2O3T過量剩余藍(lán)色消失UV鑒別Fe３＋雙縮脲特征Ｐ.180Ｐ.177［０］無色做空白酚醛縮合

鹽酸去氧腎上腺素及其注射液反應(yīng)摩爾比為1∶6

（對(duì)Na2S2O3而言）

Br2+2KI2

KBr+I2I2+2Na2S2O3Na2S4O6+2NaI

溴量法3.特殊雜質(zhì)檢查⑴⑵鹽酸普魯卡因中的——對(duì)氨基苯甲酸TCL法⑶苯乙胺中的——酮體UV法

酮體---生產(chǎn)中引入對(duì)乙酰氨基酚中的——對(duì)氨基酚利用對(duì)氨基酚中的游離氨基，與亞硝基鐵氰化鈉在堿性條件下生成藍(lán)色配位化合物，而藥物對(duì)乙酰氨基酚無此呈色反，取樣直接測定。

H2H2PdPd腎上腺酮腎上腺素異丙腎上腺酮異丙腎上腺素直接用紫外分光光度法測定不受干擾310nm酮體檢查方法：配成固定濃度2mg/ml，在310nm處測定A=0.05～0.2

P.178急性中毒的血藥濃度的測定

對(duì)乙酰氨基酚是臨床上使用極其廣泛的解熱鎮(zhèn)痛藥，在治療劑量時(shí),毒性很小,幾乎沒有不良反應(yīng),已經(jīng)逐漸取代了阿司匹林的解熱鎮(zhèn)痛作用。吸收：對(duì)乙酰氨基酚為弱酸性藥物(pKa

為9.5),其在胃腸道極易吸收。代謝：主要代謝部位為肝臟。60%對(duì)乙酰氨基酚與葡萄糖醛酸結(jié)合,后經(jīng)腎臟排出。30%對(duì)乙酰氨基酚與硫酸結(jié)合,后經(jīng)腎臟排出。約5%原形由腎臟排出。對(duì)乙酰氨基酚本身及以上兩種代謝產(chǎn)物均無毒性。對(duì)乙酰氨基酚的體內(nèi)藥物分析但攝入總量的4%～5%的對(duì)乙酰氨基酚,經(jīng)肝微粒體細(xì)胞色素P450混合功能氧化酶作用代謝成N-乙酰苯亞胺基醌(NAPQI)。

正常情況下(NAPQI)其與谷胱甘肽以共軛鍵結(jié)合而失去毒性,由腎臟排出。當(dāng)攝入對(duì)乙酰氨基酚量過大時(shí),谷胱甘肽迅速消耗。當(dāng)儲(chǔ)存量下降到正常的30%

時(shí)未共軛結(jié)合的(NAPQI)就會(huì)與肝細(xì)胞內(nèi)大分子共價(jià)結(jié)合而導(dǎo)致肝臟小葉中心性壞死臨床上出現(xiàn)肝細(xì)胞損傷和中央小葉性肝壞死，死亡率很高。有毒的活性中間體

美國的全國性中毒年度報(bào)告對(duì)乙酰氨基酚中毒位居各類中毒的首位,死亡率高達(dá)50%。

對(duì)乙酰氨基酚治療濃度在5～20mg·L

時(shí),1h達(dá)血漿峰濃度大量攝入后則可延遲至4h。

對(duì)乙酰氨基酚大劑量服用、誤服或自殺等時(shí),因嚴(yán)重的肝損傷,甚至導(dǎo)致肝壞死，因此必須早診斷早治療。

攝藥4h采血，如血藥濃度高于150μg·ml,可診斷為中毒。

臨床上由于患者癥狀的多樣性以及對(duì)乙酰氨基酚中毒的早期癥狀與胃潰瘍癥狀極其相似且肝功正常,等到發(fā)生肝損傷已經(jīng)錯(cuò)過了治療最佳時(shí)機(jī)目前。國內(nèi)急診病人很少檢測血中對(duì)乙酰氨基酚濃度,因而給醫(yī)生及時(shí)診斷和治療帶來一定困難，利用HPLC方法測定對(duì)乙酰氨基酚的血藥濃度,有效地提高確診率減少誤診情況，對(duì)臨床急性中毒的診斷有重要的意義。1材料和方法1.1病例11例中,男性5例,女性6例,年齡18～35歲;均為懷疑對(duì)乙酰氨基酚中毒患者及自述中毒患者。1.2

取樣自訴口服對(duì)乙酰氨基酚4h后采血(如服藥時(shí)間不清即刻取樣)

。1.3

標(biāo)準(zhǔn)品與試劑對(duì)乙酰氨基酚為中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇為色譜純,水為蒸餾水。1.4

儀器與材料Waters系列高效液相色譜儀,包括600E泵,600系統(tǒng)控制器,Millennium32色譜數(shù)據(jù)處理工作站,996二極管陣列檢測器。1.5對(duì)照溶液儲(chǔ)備液為10mg·ml

甲醇溶液,工作溶液由甲醇溶液逐級(jí)稀釋為