谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒說明書

PAGE33頁貨號：MS1202 規(guī)格：100管/96樣谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）試劑盒說明書微量法注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。測定意義：GSH-Px不僅能夠特異地催化還原型谷胱甘肽與ROS反應(yīng)，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，從而保護(hù)生物膜免受ROS的損害，維持細(xì)胞的正常功能；而且具有保護(hù)肝臟、提高機體免疫力、拮抗有害金屬離子對機體的傷害和增加機體抗輻射等能力。測定原理：GSH-Px催化HO催化NADPH還原GSH，22同時NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP+沒有；通過測定340nm光吸收減少速率來計算GSH-Px活性。自備儀器和用品：//96和蒸餾水。試劑組成和配置：試劑一：液體×1瓶，室溫保存。試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。試劑三：液體×1支，-20℃保存?；旌显噭┡渲疲号R用前，在試劑二中加入試劑一20mL，充分震蕩溶解后加入全部試劑三，混勻。（當(dāng)天用完）試劑四：液體×1瓶，4℃保存。粗酶液提?。航M織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量個）：試劑一體積500~1000：1的比例（5001mL試劑一（功率300w378000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。血清等液體：直接測定。GSH-Px測定操作：分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到340nm，蒸餾水調(diào)零?；旌显噭┰?5℃或者37℃（哺乳動物）水浴中預(yù)熱30min。96孔板中加入20μL160μLμL試劑四，迅速混勻后于340nm處測定第10s和第190s的吸光值，分別記為A空1和A空2。△A空白管=A空1﹣A空2。測定管：依次在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL上清液、160μL預(yù)熱的混合試劑，20μL試劑四，迅速混勻后于340nm處測定第10s和第190s的吸光值，分別記為A測1和A測2△A測定管=A測1﹣A測2。GSH-Px活性計算：(1).按蛋白濃度計算GSH-Pxmg蛋白每分鐘催化1nmolNADPH氧化為1GSH-Px(nmol/min/mgprot)=[(△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×109]÷（Cpr×V樣）÷T=536×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr(2).按樣本質(zhì)量計算GSH-Pxg樣本每分鐘催化1nmolNADPH氧化為1GSH-Px(nmol/min/g)=[(△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=536×(△A測定管-△A空白管)÷W按細(xì)胞數(shù)量計算活性單位定義：一定溫度中，每104個細(xì)胞每分鐘催化1nmolNADPH氧化為1個酶活單位。GSH-Px(nmol/min/104cell)=測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×109×V樣÷V樣總)÷T=536×(△A測定管-△A空白管)÷細(xì)胞數(shù)量按液體體積計算活性單位定義：一定溫度中，每毫升液體每分鐘催化1nmolNADPH氧化為1GSH-Px(nmol/min/mL)=[(△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×109]÷V樣÷T=536×(△A測定管-△A空白管)ε：NADPH6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1L=2×10-4L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白濃度（mg/mL）；W：L=2×10-2T：反應(yīng)時間，3min。使用96(1).按蛋白濃度計算GSH-Pxmg蛋白每分鐘催化1nmolNADPH氧化為1GSH-Px(nmol/min/mgprot)=[(△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×109]÷（Cpr×V樣）÷T=1072×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr(2).按樣本質(zhì)量計算GSH-Px活力單位定義：一定溫度中，每g樣本每分鐘催化1nmolNADPH氧化為1個酶活單位。GSH-Px(nmol/min/g)=[(△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=1072×(△A測定管-△A空白管)÷W按細(xì)胞數(shù)量計算活性單位定義：一定溫度中，每104個細(xì)胞每分鐘催化1nmolNADPH氧化為1個酶活單位。GSH-Px(nmol/min/104cell)=測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×109×V樣÷V樣總)÷T=1072×(△A測定管-△A空白管)÷細(xì)胞數(shù)量按液體體積計算活性單位定義：一定溫度中，每毫升液體每分鐘催化1nmolNADPH氧化為1GSH-Px(nmol/min/mL)=[(△A測定管-△A空白管)÷ε÷d×V反總×109]÷V樣÷T=1072×(△A測定管-△A空白管)ε：NADPH6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5總體積，200μL=2×10-4L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白濃度L=2×10-2T：反應(yīng)時間，3min。注意