免疫學技術在食品安全檢測中的應用課件

免疫學技術在食品安全檢測中的應用組員：小組成員分工資料搜索：PPT制作：后期審閱：所選論文：《免疫學技術在食品安全檢測中的應用》論文作者：郎需龍劉文森王興龍作者所在單位：解放軍軍事醫(yī)學科學院軍事獸醫(yī)研究所動物性食品安全研究室論文發(fā)表日期：2009年5月25日2

本小組所選的論文中一共提到8種免疫學技術，但其中只有4種是我們學過的，因此本次的PPT匯報中僅列出了學過的4項。3免疫熒光技術

論文中提及的檢測技術酶聯(lián)免疫吸附實驗免疫芯片

免疫傳感器技術12344酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)

酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)，是將可溶性抗原（抗體）吸附到某種固相載體表面，并保持抗原（抗體）免疫活性，這樣在與標本中的抗體（抗原）反應后，只需經(jīng)過固相洗滌的洗滌，就可以達到抗原抗體復合物與其他物質分離，最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據(jù)顏色反應的深淺刊物定性或定量分析。5試驗所需試劑固相抗原或抗體酶標記的抗原或抗體酶作用的底物ELISA方法中78單擊此處添加標題ELISA常用技術類型間接法雙抗體夾心法競爭法捕獲法10間接法

間接法是檢測抗體最常用的方法，將已知抗原吸附于固相載體，加入待檢標本（含相應抗體）與之結合形成固體抗原復合物。洗滌后，計入酶標二抗與故鄉(xiāng)復合物中的抗體結合，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。最后加酶的底物顯色，終止反應后，目測性或用酶標儀測光密度值測定，顏色的深度與標本中受檢抗體的量成正比。11雙抗體夾心法

雙抗體夾心法常用于測定大分子及顆粒多價抗原。將已知抗體A吸附于固相載體上，加入待檢標本（喊相應抗原）與之結合形成固相抗體-A-抗原復合物。溫育后洗滌，加入酶標抗體B形成固相抗體-A-抗原-酶標抗體B夾心式復合物，固相載體上帶有的酶量與標本中待測物質量成正比。最后加入底物，夾心式復合物的酶催化底物成為有色產(chǎn)物，顏色的深度與抗原的量成正比。12競爭法

將抗原連接到固相載體上，樣品中待測抗體與之結合成固相抗原-受檢抗體復合物，再用酶標二抗(針對受檢抗體的抗體，如羊抗人IgG抗體)與固相免疫復合物中的抗體結合，形成固相抗原-受檢抗體-酶標二抗復合物，測定加底物后的顯色程度，確定待測抗體含量。13捕獲法

捕獲法（亦稱反向間接法）ELISA，主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定。先將針對IgM的第二抗體（如羊抗人IgMμ鏈抗體）連接于固相載體，用以結合（“捕獲”）樣品中所有IgM（特異或非特異），洗滌出去IgG等無關物質，然后加入特異抗原與待檢IgM結合；再加入抗原特異的酶標抗體，最后形成固相二抗-IgM-抗原-酶標抗體復合物，加酶底物作用顯色后，即可對樣品中待檢IgM是否存在及其含量進行測定。14免疫熒光技術1517方法分類直接法間接法補體法182021免疫傳感器技術22

免疫傳感器技術是將免疫測定技術和傳感器技術相結合的一類新型生物傳感器，該技術具有精確度、靈敏度高、特異性強、樣品前處理簡單的特點。其選擇性好、操作簡單、攜帶方便、能重復利用，并能實現(xiàn)現(xiàn)場檢測盒在線檢測等優(yōu)點，有望成為食品安全檢測中最有效的新技術。23

免疫傳感器是以抗原抗體作為分子感應器的生物傳感器，利用抗原與抗體專一性結合引起的直接或間接物理化學變化，通過一定的信號轉化，大多轉化為光信號，再經(jīng)過放大處理即可檢測出反應物量的變化，通過相關儀器可以進行某些物質的分析檢測。免疫傳感器一般有三部分組成：分子感應器、轉導體、電子濾波放大器免疫傳感器類型：非標記免疫傳感器和標記免疫傳感器24非標記免疫傳感器抗原抗體直接或間接的方式連接至轉導體上，當抗原和抗體在相互結合后，它們的結構發(fā)生了變化，這種結構的改變可以通過化學、光學、壓電和熱量改變的變化表現(xiàn)出來，從而能被轉導體直接或間接檢測到。25免疫傳感器在食品中的應用

免疫傳感器在食品中的應用，主要體現(xiàn)在對食品中的有毒有害物質的檢測。食品中的有毒有害物質有生物性物質，如細菌、真菌、有毒動植物和病毒及其產(chǎn)生的毒素或特征蛋白質。目前已成功運用于測定污染食品的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和鼠傷寒沙門菌，利用光纖傳感器與核酸放大系統(tǒng)相偶聯(lián)，可檢測食品中的少量病原菌、非生物性有毒有害物質（包括農(nóng)藥、激素等小分子半抗原物質）。27免疫芯片28免疫芯片構建步驟一、確定檢測目標，建立抗原抗體庫二、載體及抗原或抗體的固定三、抗原抗體反應與分析檢測30免疫芯片技術的優(yōu)點只需要少量的樣品，最突出的優(yōu)點