鹽析法分離蛋白質(zhì)

第4章鹽析法知識點：鹽析法，等電點沉淀法，有機(jī)溶劑沉淀法，選擇性變性沉淀法，金屬離子沉淀法。重點：上述幾種沉淀方法的概念、原理及其適用范圍；鹽析法的影響因素對沉淀效果的影響，并能根據(jù)實際情況予以靈活應(yīng)用和選擇。難點：常用沉淀方法的靈活運用。精選ppt沉淀定義沉淀特點應(yīng)用范圍沉淀分類1.沉淀法概述精選ppt鹽析法

有機(jī)溶劑沉淀法選擇性變性沉淀法等電點沉淀法離子型聚合物沉淀法聚電解質(zhì)沉淀法高價金屬離子沉淀法沉淀法分類精選ppt活性蛋白非活性蛋白理化性質(zhì)溶解度提取方法蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)的回顧

精選ppt鹽析沉淀步驟加沉淀劑方式陳化條件脫鹽處理2.鹽析沉淀精選ppt鹽析機(jī)理示意圖精選ppt精選ppt精選ppt①鹽離子與蛋白質(zhì)分子爭奪水分子，降低了用于溶解蛋白質(zhì)的有效水量，減弱了蛋白質(zhì)的水合程度，破壞了蛋白表面的水化膜，導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶解度下降；②鹽離子電荷的中和作用，使蛋白質(zhì)溶解度下降；③鹽離子引起原本在蛋白質(zhì)分子周圍有序排列的水分子的極化，使水活度降低。鹽析的機(jī)理精選pptCohn方程式logS=β-KsIKs鹽析β鹽析二次鹽析鹽析沉淀基礎(chǔ)精選ppt圖1碳氧血紅蛋白的溶解度與硫酸銨離子強(qiáng)度的關(guān)系圖精選ppt不同蛋白質(zhì)的溶解度曲線精選ppt蛋白質(zhì)的鹽析分布曲線精選ppt溶解度曲線(a)和鹽析分布曲線(b)

精選ppt對β影響對Ks影響鹽種類鹽濃度溫度pH值鹽析影響因素精選ppt無機(jī)鹽種類的影響圖7不同鹽溶液中碳氧血紅蛋白的溶解度與離子強(qiáng)度的關(guān)系（25℃）

(○)NaCl;(▼)KCl;(?)MgSO4;(▲)NH4)SO4;(●)Na2SO4;(□)K2SO4;(■)檸檬酸三鈉精選ppt溫度的影響精選pptpH對β的影響精選ppt蛋白質(zhì)起始濃度的影響精選ppt二次鹽析精選ppt鹽析操作精選ppt3等電點沉淀實例①從豬胰臟中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝8.9，可先于pH3.0左右進(jìn)行等電點沉淀，除去共存的許多酸性蛋白質(zhì)(pI=3．O)。工業(yè)生產(chǎn)胰島素(pI＝5.3)時，先調(diào)pH至8.0除去堿性蛋白質(zhì)，再調(diào)pH至3.0除去酸性蛋白質(zhì)(同時加入一定濃度的有機(jī)溶劑以提高沉淀效果)。②堿性磷酸酯酶的pI沉淀提?。喊l(fā)酵液調(diào)pH4.0后出現(xiàn)含堿性磷酸酯酶的沉淀物，離心收集沉淀物。用pH9.0的0.1mol/LTris-HCl緩沖液重新溶解，加入20～40%飽和度的硫酸銨分級，離心收集的沉淀Tris-HCl緩沖液再次沉淀，即得較純的堿性磷酸酯酶。精選ppt4有機(jī)溶劑沉淀原理圖精選ppt有機(jī)溶劑沉淀實例精選ppt酵母干粉中加入0.066mol/L磷酸氫二鈉溶液，37℃水浴保溫2h，室溫攪拌3h，離心收集上清液，升溫至55℃，保溫20min后迅速冷卻離心去除熱變性蛋白，上清液中多為熱穩(wěn)定性較高的醇脫氫酶。5選擇性熱變性沉淀實例精選ppt（1）非離子型聚合物沉淀法（2）聚電解質(zhì)沉淀法（3）金屬離子沉淀法（4）親和沉淀6其他沉淀法精選ppt凝聚技術(shù)絮凝技術(shù)7凝聚和絮凝技術(shù)精選ppt第五章沉淀法課后練習(xí)名詞解釋：

鹽析法，有機(jī)溶劑沉淀法