生物選修1知識(shí)復(fù)習(xí)

1．酵母菌的細(xì)胞呼吸酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖，表達(dá)式為：C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O+能量酵母菌行無(wú)氧呼吸產(chǎn)生酒精和CO2，為：C6H12O6→2C2H5OH+2CO2+能量2．酵母菌發(fā)酵的最佳環(huán)境酵母菌在有氧和無(wú)氧的條件下都能生活：在有氧時(shí)，酵母菌大量繁殖，但是不起到發(fā)酵效果；在無(wú)氧時(shí)，繁殖速度減慢，但是此時(shí)可以進(jìn)行發(fā)酵。在利用酵母菌發(fā)酵時(shí)最好是先通入足夠的無(wú)菌空氣在有氧環(huán)境下一段時(shí)間使其繁殖，再隔絕氧氣進(jìn)行發(fā)酵。20℃左右最適合酵母菌繁殖，酒精發(fā)酵的最佳溫度是在18℃～25℃，pH最好是弱酸性。3．醋酸菌好氧性細(xì)菌，當(dāng)缺少糖源時(shí)和有氧條件下，可將乙醇（酒精）氧化成醋酸。表達(dá)式為：2C2H5OH＋4O2→CH3COOH＋6H2O；當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸。醋酸菌生長(zhǎng)的最佳溫度是在30℃～35℃課題1果酒和果醋的制作酶酶酶一、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)步驟

1.對(duì)發(fā)酵瓶、紗布、榨汁機(jī)、盛葡萄汁的器皿等實(shí)驗(yàn)用具進(jìn)行清洗并消毒。先用溫水反復(fù)沖洗幾次,再用體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精擦拭消毒，晾干待用。2.取葡萄500g，去除枝梗和腐爛的子粒。3.用清水沖洗葡萄1～2遍除去污物，注意不要反復(fù)多次沖洗。4.用榨汁機(jī)榨取葡萄汁后，將其裝入發(fā)酵瓶中或?qū)⑵咸汛虺蓾{后，用潔凈的紗布過(guò)濾至發(fā)酵瓶中，蓋好瓶蓋。如果沒(méi)有合適的發(fā)酵裝置，可以用500mL的塑料瓶替代，但注入的果汁量不要超過(guò)塑料瓶總體積的2/3。5.將發(fā)酵瓶置于適宜的溫度下發(fā)酵。6.由于發(fā)酵旺盛期CO2的產(chǎn)量非常大，因此需要及時(shí)排氣，防止發(fā)酵瓶爆裂。如果使用簡(jiǎn)易的發(fā)酵裝置，如瓶子（最好選用塑料瓶），每天要擰松瓶蓋2～4次，進(jìn)行排氣。7.10d以后，可以開始進(jìn)行取樣檢驗(yàn)工作。例如，可以檢驗(yàn)酒味、酒精的含量、進(jìn)行酵母菌的鏡檢等工作。8.當(dāng)果酒制成以后，可以在發(fā)酵液中加入醋酸菌或醋曲，然后將裝置轉(zhuǎn)移至30～35℃的條件下發(fā)酵，適時(shí)向發(fā)酵液中充氣。如果找不到醋酸菌菌種或醋曲，可嘗試自然接種，但效果不是很好。如果沒(méi)有充氣裝置，可以將瓶蓋打開，在瓶口蓋上紗布，以減少空氣中塵土等的污染。請(qǐng)分析此裝置中的充氣口、排氣口和出料口分別有哪些作用。為什么排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身連接？結(jié)合果酒、果醋的制作原理，你認(rèn)為應(yīng)該如何使用這個(gè)發(fā)酵裝置？答：充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵

進(jìn)行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來(lái)排出CO2的；出料口是用來(lái)取樣的。排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身連接，其目的是防止空氣中微生物的污染。使用該裝置制酒時(shí)，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時(shí)，應(yīng)將充氣口連接氣泵，輸入氧氣。必背的相關(guān)概念和內(nèi)容1、發(fā)酵：通過(guò)微生物培養(yǎng)技術(shù)使微生物生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過(guò)程。2、有氧發(fā)酵：醋酸發(fā)酵谷氨酸發(fā)酵·

無(wú)氧發(fā)酵：酒精發(fā)酵乳酸發(fā)酵3、酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌·酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要)

分裂生殖

孢子生殖4、有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O+能量5、在無(wú)氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵C6H12O6→2C2H5OH+2CO2+能量6、20℃左右最適宜酵母菌繁殖酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在18℃-25℃7、在葡萄酒自然發(fā)酵的過(guò)程中,起主要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌。在發(fā)酵過(guò)程中,隨著酒精濃度的提高,紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色。在缺氧呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長(zhǎng)繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無(wú)法適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約。8、醋酸菌是單細(xì)胞細(xì)菌(原核生物),代謝類型是異養(yǎng)需氧型,生殖方式為二分裂9、當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿帷?/p>

2C2H5OH＋4O2→CH3COOH＋6H2O10、控制發(fā)酵條件的作用

①醋酸菌對(duì)氧氣的含量特別敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，即使只是短時(shí)間中斷通入氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最適生長(zhǎng)溫度為30～35℃，控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時(shí)間縮短，又減少雜菌污染的機(jī)會(huì)。③有兩條途徑生成醋酸：直接氧化和以酒精為底物的氧化。11、實(shí)驗(yàn)流程：挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→果酒（→醋酸發(fā)酵→果醋）12、酒精檢驗(yàn)：

果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用重鉻酸鉀來(lái)檢驗(yàn)。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。

先在試管中加入發(fā)酵液2ｍL，再滴入物質(zhì)的量濃度為3mol/L的H2SO43滴，振蕩混勻，最后滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液3滴，振蕩試管，觀察顏色疑難解答（1）你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？應(yīng)該先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機(jī)會(huì)。（2）你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？如：要先沖洗葡萄，再除去枝梗；榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈，并進(jìn)行酒精消毒；每次排氣時(shí)只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等。（3）制葡萄酒時(shí)，為什么要將溫度控制在18～25℃？制葡萄醋時(shí)，為什么要將溫度控制在30～35℃？溫度是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的重要條件。20℃左右最適合酵母菌的繁殖。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌，最適生長(zhǎng)溫度為30～35℃，因此要將溫度控制在30～35℃。菌種項(xiàng)目酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌生物學(xué)分類真核生物原核生物真核生物原核生物代謝類型異養(yǎng)兼性厭氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)厭氧繁殖方式適宜條件下出芽生殖二分裂生殖孢子生殖二分裂生殖生產(chǎn)應(yīng)用釀酒釀醋制作腐乳制作泡菜發(fā)酵條件前期需氧，后期不需氧一直需氧一直需氧不需氧幾種常用發(fā)酵菌種的比較制作內(nèi)容比較項(xiàng)目果酒果醋腐乳泡菜所用菌種酵母菌醋酸菌主要是為霉乳酸菌控制條件O2的有無(wú)無(wú)氧有氧有氧無(wú)氧最適溫度18℃～25℃30℃～35℃15℃～18℃常溫時(shí)間控制10～12天7～8天腌制8天左右腌制10天左右其他條件封閉充氣口適時(shí)充氣控制鹽酒用量控制鹽水比例相關(guān)反應(yīng)式果酒、果醋、腐乳、泡菜制作中所用菌種及控制條件的比較二、相關(guān)試題1．（2010·北京理綜，1）在家庭中用鮮葡萄制作果酒時(shí)，正確的操作是（）A．讓發(fā)酵裝置接受光照

B．給發(fā)酵裝置適時(shí)排氣C．向發(fā)酵裝置通入空氣

D．將發(fā)酵裝置放在45℃處2．下列關(guān)于腐乳制作過(guò)程的說(shuō)法，正確的是（）A．制作腐乳時(shí)只有毛霉發(fā)揮作用B．豆腐的表面長(zhǎng)出青色物質(zhì)則標(biāo)志著腐乳制作完成C．在腐乳制作過(guò)程中必須有能產(chǎn)生蛋白酶的微生物參與D．制作腐乳時(shí)加鹽是為了促進(jìn)毛霉的生長(zhǎng)3．下列關(guān)于病毒、醋酸菌、毛霉的敘述，不正確的是（）A．病毒與后兩者比較，沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，遺傳物質(zhì)可能是DNA或是RNAB．醋酸菌是好氧菌，可以將葡萄糖分解成醋酸，其細(xì)胞結(jié)構(gòu)中沒(méi)有核膜和核仁C．在腐乳制作過(guò)程中，毛霉能產(chǎn)生蛋白酶，分解豆腐中的蛋白質(zhì)為肽和氨基酸D．三者在培養(yǎng)過(guò)程中，只要培養(yǎng)基中有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，都能正常生長(zhǎng)繁殖4．（2010?江蘇生物，7）下圖表示果酒和果醋制作過(guò)程中的物質(zhì)變化過(guò)程，下列敘述正確的是（）A．過(guò)程①和②都只能發(fā)生在缺氧條件下B．過(guò)程①和③都發(fā)生在酵母細(xì)胞的線粒體中C．過(guò)程③和④都需要氧氣的參與D．過(guò)程①～④所需的最適溫度基本相同BCDC1.下列有關(guān)微生物的培養(yǎng)或純化的敘述，錯(cuò)誤的是（）A．微生物在培養(yǎng)前要先對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理再接種B．培養(yǎng)液中溶氧量的變化會(huì)影響酵母菌的繁殖和代謝途徑C．分離自養(yǎng)型微生物的方法是用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基D．分離純化微生物的常用方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法C2.下列關(guān)于微生物的敘述，錯(cuò)誤的是()A．硝化細(xì)菌雖然不能進(jìn)行光合作用，但屬于自養(yǎng)生物B．藍(lán)藻雖然無(wú)葉綠體，但在生態(tài)系統(tǒng)中屬于生產(chǎn)者C．酵母菌呼吸作用的終產(chǎn)物可通過(guò)自由擴(kuò)散運(yùn)出細(xì)胞D．大腸桿菌遺傳信息在細(xì)胞核中轉(zhuǎn)錄，在細(xì)胞質(zhì)中翻譯D3.在“果醋制作過(guò)程”中，獲得較多的醋酸桿菌菌種的最簡(jiǎn)便方法是（）A．從變酸的葡萄酒表面獲得菌膜，再培養(yǎng)、分離B．不必人為加入菌種在葡萄等水果表面本身就存在大量醋酸桿菌C．從泡菜壇蓋邊沿的水槽中的表面獲得菌膜，再培養(yǎng)、分離D．從土壤中分離提取A4.對(duì)制葡萄酒和葡萄醋發(fā)酵條件的控制中，錯(cuò)誤的是（）A．葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時(shí)，要留有1/3的空間B．用清水沖洗葡萄除去污物，應(yīng)反復(fù)多次沖洗C．制葡萄酒的過(guò)程中，除在適宜的條件下，時(shí)間應(yīng)控制在10～12dD．制葡萄醋的溫度要比葡萄酒的溫度高些，但時(shí)間一般控制在7～8d左右B5．（2011·廣州一模，6）以下關(guān)于生物技術(shù)的說(shuō)法不正確的是（）A．需借助胚胎移植技術(shù)才能獲得克隆牛B．單倍體育種過(guò)程涉及脫分化和再分化C．用自身干細(xì)胞培育的器官，移植后一般不會(huì)產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)D．果酒與果醋的制作過(guò)程需要保持缺氧狀態(tài)6．（2010·廣東理綜，25）小李嘗試制作果酒，他將葡萄汁放入已滅菌的發(fā)酵裝置中進(jìn)行試驗(yàn)（見圖），恰當(dāng)?shù)淖龇ㄊ牵p選）（）A．加入適量的酵母菌B．一直打開閥b通氣C．一直關(guān)緊閥a，偶爾打開閥b幾秒鐘D．把發(fā)酵裝置放到4℃冰箱中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)7．下面是有關(guān)食醋和泡菜制作的實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答：（1）食醋可用大米為原料經(jīng)三步發(fā)酵來(lái)制作：第一步：大米經(jīng)蒸熟、冷卻后加入淀粉酶，將原料中的淀粉分解成

（填中間產(chǎn)物），然后進(jìn)一步分解成葡萄糖，這一過(guò)程可用

（填淀粉指示劑）來(lái)檢測(cè)，因?yàn)樵撛噭┯龅矸鄢仕{(lán)色，遇上述中間產(chǎn)物呈紅色。第二步：用

菌將葡萄糖轉(zhuǎn)化成乙醇，這一發(fā)酵過(guò)程中，玻璃發(fā)酵瓶不應(yīng)完全密閉的主要原因是

。第三步：用

菌將乙醇轉(zhuǎn)化成乙酸，這一過(guò)程

氧氣。DAC糊精碘液酵母發(fā)酵過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量CO2，使瓶?jī)?nèi)壓力升高而可能引起爆裂醋酸桿需要消耗

（1）排氣口的膠管設(shè)計(jì)成長(zhǎng)而彎曲的目的是

。（2）實(shí)驗(yàn)的最初階段，由于

、

、

，酵母菌的種群數(shù)量呈“J”型增長(zhǎng)。（3）在上圖所示的計(jì)數(shù)室中，如果一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過(guò)多，難以數(shù)清，應(yīng)當(dāng)采取的措施是

。（4）本實(shí)驗(yàn)沒(méi)有另設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，原因是

。為提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)進(jìn)行

。（5）請(qǐng)你設(shè)計(jì)表格記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。8．（2011·廣東肇慶一模，29）某生物興趣小組為了“探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化”，按如下左圖裝置進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，并使用如右圖所示的血球計(jì)數(shù)板對(duì)培養(yǎng)液中的酵母菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。請(qǐng)分析回答：

防止空氣中的雜菌污染溫度等條件適宜

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充足

沒(méi)有敵害和競(jìng)爭(zhēng)使酵母菌分布均勻，增加稀釋倍數(shù)。該實(shí)驗(yàn)時(shí)間上形成前后自身對(duì)照重復(fù)實(shí)驗(yàn)（取樣）時(shí)間次數(shù)12345671

2

3

（1）酵母菌與醋酸桿菌在結(jié)構(gòu)上的最大區(qū)別是后者

。從制酒和制醋兩階段對(duì)裝置的處理方式判斷，酵母菌和醋酸桿菌的異化作用類型依次是

。（2）同學(xué)甲在制酒階段，每隔12h左右就要將瓶蓋擰松一次，但又不打開，這樣做的目的是

。用反應(yīng)式表示出制酒過(guò)程剛開始時(shí)發(fā)生的主要化學(xué)變化

。（3）B裝置中排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身相連，這樣做的原因

。（4）制葡萄酒時(shí)要將溫度控制在18～25℃，而制葡萄醋時(shí)要將溫度控制在30～35℃，原因是

。葡萄汁為酵母菌、醋酸桿菌等微生物的生長(zhǎng)提供的營(yíng)養(yǎng)成分是

。（5）制作過(guò)程中一般不需要額外添加酵母菌和醋酸桿菌即可完成。為了提高果酒品質(zhì)也可在果汁中加入人工培養(yǎng)的酵母菌。利用

培養(yǎng)基可分離獲得較為純凈的酵母菌菌種，如在培養(yǎng)基中加入

可以從細(xì)菌和酵母菌的混合液中分離出酵母菌。（6）為提高水果的出汁率，使果汁變得澄清，在果汁生產(chǎn)中常用

。9．低度的果酒、果醋具有一定的保健養(yǎng)生功能。下圖是兩位同學(xué)制果酒和果醋時(shí)使用的裝置。同學(xué)甲用A（帶蓋的瓶子）裝置制葡萄糖，在瓶中加入適量葡萄汁，發(fā)酵溫度控制在18～25℃，每隔12h左右將瓶蓋擰松一次（注意不是打開瓶蓋），之后再將瓶蓋擰緊。當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)生酒精后，再將瓶蓋打開，蓋上一層紗布，溫度控制在30～35℃，進(jìn)行制果醋的發(fā)酵。同學(xué)乙用B裝置，溫度控制與甲相同，不同的是制果酒階段充氣口用夾子夾緊外，排氣的橡膠管也用夾子夾住，并且每隔12h左右松一松夾子放出多余的氣體。制果醋階段適時(shí)向充氣口充氣。經(jīng)過(guò)20天左右，兩位同學(xué)先后完成了自己的發(fā)酵制作。據(jù)此回答有關(guān)問(wèn)題：沒(méi)有由核膜包圍的細(xì)胞核兼性厭氧型、需氧型制酒階段的后期，酵母菌無(wú)氧呼吸會(huì)產(chǎn)生大量氣體，如不及時(shí)放出會(huì)把瓶子或瓶蓋脹破，不打開瓶蓋是防止氧氣和有害雜菌進(jìn)入C6H12O6＋6H2O＋6O2酶

6CO2＋12H2O＋能量防止污染18～25℃是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的合適溫度，30～35℃是醋酸桿菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的合適溫度。碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽和生長(zhǎng)因子選擇青霉素（抗生素）果膠酶專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用

課題一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

培養(yǎng)基：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，是進(jìn)行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)?！づ囵B(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂（是從紅藻中提取的一種多糖，在配制培養(yǎng)基中用作凝固劑）后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)，可以形成肉眼可見的菌落。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn)，固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物的分離和鑒定，半固體培養(yǎng)基則常用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)及菌種保藏等。·按照成分培養(yǎng)基可分為人工合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基是用成分已知的化學(xué)物質(zhì)配制而成，其中成分的種類比例明確，常用于微生物的分離鑒定。天然培養(yǎng)基是用化學(xué)成分不明的天然物質(zhì)配制而成，常用于實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)。·按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別不同類別的微生物。·培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如生長(zhǎng)因子等?！ぬ荚矗耗転槲⑸锏拇x提供碳元素的物質(zhì)。如CO2、NaHCO3等無(wú)機(jī)碳源；糖類、石油、花生粉餅等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源。·氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如N2、NH3、NO3-、NH4+（無(wú)機(jī)氮源）蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有機(jī)氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。·培養(yǎng)基還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。

例如，

培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素，

培養(yǎng)霉菌時(shí)須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，

培養(yǎng)細(xì)菌是需要將pH調(diào)至中性或微堿性，

培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無(wú)氧的條件培養(yǎng)基的分類和應(yīng)用歸納：劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)半固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類、鑒定固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)化學(xué)組成天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確（用化學(xué)成分已知的化學(xué)物質(zhì)配成）分類、鑒定目的用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生物鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物·無(wú)菌技術(shù)·獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵，要注意以下幾個(gè)方面：①對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染?！は九c滅菌的區(qū)別消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（對(duì)于一些不耐高溫的液體）還有化學(xué)藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法：①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；②玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；③培養(yǎng)基、無(wú)菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。比較項(xiàng)目消毒滅菌條件使用較為溫和的理化方法使用強(qiáng)烈的理化因素結(jié)果殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子適用實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣服和手微生物的培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等常用方法煮沸消毒法（如在100℃，煮沸5～6min）、巴氏消毒法（如在80℃，煮15min）；使用酒精、氯氣、石炭酸等化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌消毒與滅菌的區(qū)別

滅菌方法滅菌條件滅菌時(shí)間適用材料或用具灼燒滅菌酒精燈火焰的充分燃燒層直至燒紅接種環(huán)、接種針或其他金屬工具干熱滅菌干熱滅菌箱內(nèi)，160～170℃1～2h玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等高壓蒸汽滅菌100kPa，121℃15～30min培養(yǎng)基等三種常用滅菌方法的比較制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（1）方法步驟：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。（2）倒平板操作的步驟：①將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過(guò)火焰。③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基（約10～20mL）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固，大約需5～10min。然后，將平板倒過(guò)來(lái)放置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上?！さ蛊桨宀僮鞯挠懻摚?.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。純化大腸桿菌（1）微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。（2）平板劃線法是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼可見的子細(xì)胞群體，這就是菌落。（3）稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。（4）用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。（5）平板劃線法操作步驟：①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。②在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞。③將試管口通過(guò)火焰。④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。⑤將試管通過(guò)火焰，并塞上棉塞。⑥左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)皿。⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第

一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最

后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。⑧將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)?！て桨鍎澗€操作的討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。（6）涂布平板操作的步驟：①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。②取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？提示：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。菌種的保存（1）對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法。①臨時(shí)保藏方法

將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長(zhǎng)成后，將試管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3～6個(gè)月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。②缺點(diǎn)：這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng)，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。（2）對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱中保存。疑難解答（1）生物的營(yíng)養(yǎng)

營(yíng)養(yǎng)是指生物攝取、利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的過(guò)程。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是指維持機(jī)體生命活動(dòng)，保證發(fā)育、生殖所需的外源物質(zhì)。人及動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。植物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類。微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)五類。（2）確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2天，無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。課題二土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)尿素

是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗麄兡芎铣呻迕?/p>

尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的篩選菌株（1）實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。（2）選擇性培養(yǎng)基在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。（3）配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點(diǎn)加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目（1）測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。（2）稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活細(xì)菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置3～5個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來(lái)表示。采用此方法的注意事項(xiàng)：1.一般選取菌落數(shù)在30~300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)2.為了防止菌落蔓延，影響計(jì)數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入TTC3.本法僅限于形成菌落的微生物。設(shè)置對(duì)照設(shè)置對(duì)照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。對(duì)照實(shí)驗(yàn)是指除了被測(cè)試的條件以外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)，其作用是比照試驗(yàn)組，排除任何其他可能原因的干擾，證明確實(shí)是所測(cè)試的條件引起相應(yīng)的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包括實(shí)驗(yàn)方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實(shí)施步驟以及時(shí)間安排等的綜合考慮和安排。（1）土壤取樣：同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物，數(shù)量最大，種類最多。在富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層，有更多的微生物生長(zhǎng)。從富含有機(jī)物、潮濕、pH≈7的土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約3～8cm的土壤層取樣。（2）樣品的稀釋：樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目。在實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30~300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用104105106測(cè)定放線菌的數(shù)量，一般選用103104105

測(cè)定真菌的數(shù)量，一般選用102103104（3）微生物的培養(yǎng)與觀察不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。細(xì)菌30~37℃1~2天放線菌25~28℃5~7天霉菌25~28℃3~4天每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致一樓菌落的數(shù)目。一般來(lái)說(shuō)，在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、唯獨(dú)及培養(yǎng)時(shí)間），同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。形狀、大小、隆起程度、顏色疑難解答（1）如何從平板上的菌落數(shù)推測(cè)出每克樣品中的菌落數(shù)？統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值每克樣品中的菌落數(shù)=（C/V）*M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（ml），M代表稀釋倍數(shù)二、相關(guān)試題1．（2009·安徽理綜，6）下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是

（）A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上C．將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時(shí)D．確定對(duì)照組無(wú)菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)2．下列對(duì)四種微生物相關(guān)的敘述，錯(cuò)誤的是（）A．CO2和NH3分別是硝化細(xì)菌的碳源和氮源，該生物所需的能源來(lái)自NH3的氧化B．CO2和硝酸鹽分別是褐藻的碳源和氮源，該生物所需的能源來(lái)自太陽(yáng)能C．糖類和N2是乳酸菌的碳源和氮源，該生物所需的能源來(lái)自乳酸的氧化分解D．葡萄糖既是酵母菌的碳源也是其能源，但CO2一定不是酵母菌的碳源3．酵母菌的培養(yǎng)最好使用下列哪種培養(yǎng)基（）A．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基B．麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基C．蛋白胨酵母膏培養(yǎng)基D．MS培養(yǎng)基DCB4．下列關(guān)于微生物的培養(yǎng)和運(yùn)用的敘述，錯(cuò)誤的是（）A．通過(guò)消毒不能殺死物體內(nèi)所有的微生物B．利用平板劃線法可以統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目C．平板劃線法和稀釋涂布法常用于微生物的接種D．微生物所用的培養(yǎng)基成分和植物組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)基成分不同5．下列有關(guān)微生物的培養(yǎng)或純化的敘述，錯(cuò)誤的是（）A．微生物在培養(yǎng)前要先對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理再接種B．培養(yǎng)液中溶氧量的變化會(huì)影響酵母菌的繁殖和代謝途徑C．分離純化微生物的常用方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法D．分離自養(yǎng)型微生物的方法是用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基6．在做分離“分解尿素的細(xì)菌”實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)10-6培養(yǎng)基中篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。下列有關(guān)敘述正確的是（雙選）（）A．A同學(xué)出現(xiàn)這種結(jié)果的原因是土樣不同B．可以將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染C．讓其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土壤進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與A同學(xué)一樣，則可證明A同學(xué)無(wú)誤D．B、C選項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)思路都遵循了實(shí)驗(yàn)的對(duì)照原則BDBC7．（2009·寧夏理綜，40）（1）在大腸桿菌培養(yǎng)過(guò)程中，除考慮營(yíng)養(yǎng)條件外，還要考慮

、

和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、變異類型容易選擇、

、

等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。

（2）在微生物培養(yǎng)操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌處理，其中對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌常用的方法是

；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和

；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能

。

（3）若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀釋的

。

（4）通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的

。

（5）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測(cè)方法是

。

（6）若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過(guò)的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò)

處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。溫度pH易培養(yǎng)生活周期短干熱滅菌法消毒損傷DNA的結(jié)構(gòu)比例合適鑒定（或分類）

將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生滅菌8．（2010·山東理綜，34）生物柴油是一種可再生的清潔能源，其應(yīng)用在一定程度上能夠減緩人類對(duì)化石燃料的消耗。科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，在微生物M產(chǎn)生的脂肪酶作用下，植物油與甲醇反應(yīng)能夠合成生物柴油（如下圖）。（1）篩選產(chǎn)脂肪酶的微生物M時(shí)，選擇培養(yǎng)基中添加的植物油為微生物生長(zhǎng)提供

，培養(yǎng)基滅菌采用的最適方法是

法。（2）測(cè)定培養(yǎng)液中微生物數(shù)量，可選用

法直接計(jì)數(shù)；從微生物M分離提取的脂肪酶通常需要檢測(cè)

，以確定其應(yīng)用價(jià)值；為降低生物柴油生產(chǎn)成本，可利用

技術(shù)使脂肪酶能夠重復(fù)使用。（3）若需克隆脂肪酶基因，可應(yīng)用耐熱DNA聚合酶催化的

技術(shù)。碳源高壓蒸汽滅菌顯微鏡直接計(jì)數(shù)酶活性（或：酶活力）固定化酶（或：固定化細(xì)胞）PCR9．從自然菌樣篩選較理想的生產(chǎn)菌種的一般步驟是：采集菌樣→富集培養(yǎng)→純種分離→性能測(cè)定。（1）不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從適合的環(huán)境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)嗜鹽菌的菌樣應(yīng)從

環(huán)境采集。（2）富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長(zhǎng)的特定環(huán)境條件，使其在群落中的數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對(duì)產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇

的培養(yǎng)基，并在

條件下培養(yǎng)。（3）下面兩圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，請(qǐng)分析接種的具體方法。

獲得圖A效果的接種方法是

，獲得圖B效果的接種方法是

。（4）配制培養(yǎng)基時(shí)各種成分在溶化后分裝前必須進(jìn)行

，接種前要進(jìn)行

，在整個(gè)微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在

條件下進(jìn)行。海灘等高鹽以淀粉為唯一碳源高溫稀釋涂布平板法平板劃線法pH調(diào)整高壓蒸汽滅菌無(wú)菌10．（2011·廣東汕頭一模，26）有機(jī)磷農(nóng)藥殺蟲能力強(qiáng)，在糧食增產(chǎn)、傳染病防治等方面作用顯著，但污染環(huán)境并危害人體健康。在眾多的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留物降解技術(shù)中，生物降解有高效、徹底、無(wú)二次污染的優(yōu)勢(shì)，其中，微生物由于具有較復(fù)雜多樣的代謝途徑，是有機(jī)磷農(nóng)藥降解的主力軍。（1）在富含有機(jī)磷農(nóng)藥殘留成分的土壤中，更容易分離到能降解農(nóng)藥的微生物。根據(jù)達(dá)爾文的理論，這是因?yàn)橛袡C(jī)磷農(nóng)藥對(duì)于此類微生物具有

作用。（2）微生物具有復(fù)雜多樣的代謝途徑，從根本上說(shuō)，是由微生物的

所決定的。（3）微生物主要通過(guò)酶促反應(yīng)，將有機(jī)磷農(nóng)藥分解為無(wú)毒或者低毒的化合物。研究發(fā)現(xiàn)，利用有機(jī)磷農(nóng)藥降解酶凈化農(nóng)藥比利用微生物菌體更有效。①微生物群體中，最初的降解酶基因是由于

而產(chǎn)生的。從微生物中提取到一種降解酶后，需要確定在何種環(huán)境中該酶的活性高，檢測(cè)酶活性高低的指標(biāo)可以是

。②從天然菌株中提取降解酶的含量低，成本高，難以大量應(yīng)用，科學(xué)家通過(guò)基因工程解決了這一難題。他們?cè)讷@得降解酶基因后，通過(guò)

技術(shù)對(duì)該基因進(jìn)行大量擴(kuò)增，再利用

酶、

酶和運(yùn)載體等作為基本工具，通過(guò)一定的手段構(gòu)建

，并將其導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)，從而實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。③天然的降解酶對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的降解率比較低，不能達(dá)到預(yù)期效果，科學(xué)家對(duì)降解酶特定部位的氨基酸序列進(jìn)行重新設(shè)計(jì)、改造，顯著提高了其降解能力，這項(xiàng)技術(shù)稱為

。選擇（或者保留）基因多樣性（或者遺傳多樣性）基因突變單位時(shí)間中反應(yīng)物減少量（或者單位時(shí)間中產(chǎn)物的增加量、有機(jī)磷農(nóng)藥降解的速率）PCR

限制酶）DNA連接酶目的基因表達(dá)載體蛋白質(zhì)工程1.從幾千年前到現(xiàn)在，酶制劑就安全地在被使用在工業(yè)、美容和口腔護(hù)理產(chǎn)品、紡織品、食品（如酸奶酪）以及芝士、啤酒和白酒等的發(fā)酵生產(chǎn)過(guò)程中。下列各項(xiàng)中，不屬于酶制劑的是（

）A．蛋白酶

B．脂肪酶

C．淀粉酶

D．麥芽糖酶4．下表是某種生物活性洗衣粉的成分及用法說(shuō)明，下列對(duì)資料表明的信息理解不正確的是（

）A．這種洗衣粉較易清除衣服上的蛋清污漬B．該蛋白酶在60℃以上將會(huì)失去活性C．這種洗衣粉可除去衣料上的各種污漬D．這種洗衣粉不能用于洗滌真絲織物D

C

①將果膠酶與蘋果泥分裝于不同試管，在10％水浴中恒溫處理l0min(如圖A)。②將步驟①處理后的果膠酶和蘋果泥混合，再次在10℃水浴中恒溫處理l0min(如圖B)③將步驟②處理后的混合物過(guò)濾，收集濾液，測(cè)量汁量(如圖C)。④在不同溫度條件下重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)步驟，并記錄果汁量如下：

根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：(1)果膠酶能破除細(xì)胞壁，是因?yàn)楣z酶可以促進(jìn)細(xì)胞壁中

的水解。(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)溫度為

時(shí)果汁量最多，此時(shí)果膠酶的活性

。當(dāng)溫度再升高時(shí)，果汁量降低，說(shuō)明

。(3)實(shí)驗(yàn)步驟①的目的是

。溫度/℃

10

20

30

40

50

60

70

80果汁量/ml

8

13

15

25

15

12

ll

10Ⅱ．工業(yè)生產(chǎn)果汁時(shí)，常常利用果膠酶破除果肉細(xì)胞壁以提高出果汁率。為研究溫度對(duì)果膠酶活性的影響，某學(xué)生設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)：果膠40℃最高酶活性降低避免果汁和果膠酶混合時(shí)影響混合物溫度，從而影響果膠酶活性10．某化工廠最新產(chǎn)生了一種高效加酶洗衣粉，準(zhǔn)備投放市場(chǎng)，其包裝印有如下部分說(shuō)明。成分：含最新高效堿性蛋白酶。特點(diǎn)：洗滌奶漬、血漬等的效率是普通洗衣粉的數(shù)倍。用法：洗滌前先將衣物浸于含有該洗衣粉的水內(nèi)數(shù)小時(shí)，使用溫水效果更佳。注意：切勿用于絲質(zhì)及羊毛衣料。用后徹底清洗雙手。該地區(qū)質(zhì)檢部門為證明該洗衣粉是否有功效，從化工廠提取部分洗衣粉樣品做了如下實(shí)驗(yàn)：下列的說(shuō)法中，不正確的是（

）A．此題中的自變量是洗衣粉溶液是否煮沸過(guò)，A組是對(duì)照組B．最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是A組膠片上的蛋白膜快速消失C．膠片上蛋白膜消失的原因是堿性蛋白酶的催化作用的緣故D．洗衣粉經(jīng)過(guò)0℃和75℃處理后，溫度再度回到45℃，兩者的催化作用已不能恢復(fù)D1.甲、乙、丙是三種微生物，下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用來(lái)培養(yǎng)微生物的三種培養(yǎng)基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生長(zhǎng)繁殖；甲能在Ⅰ中正常生長(zhǎng)繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生長(zhǎng)繁殖，甲、丙都不能。下列說(shuō)法正確的是

（

）A．甲、乙、丙都是異養(yǎng)微生物

B．甲、乙都是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物C．甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)微生物、丙是異養(yǎng)微生物D．甲是異養(yǎng)微生物、乙是固氮微生物、丙是自養(yǎng)微生物C

2.下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是（）A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上C．將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時(shí)D．確定對(duì)照組無(wú)菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)D

3.下列對(duì)果膠酶的作用的敘述中，錯(cuò)誤的是(

)A．果膠酶是一種催化劑，可以改變反應(yīng)速度B．在果汁中加入果膠酶后可使果汁變得澄清C．果膠酶能將乳糖醛酸分解成半乳糖醛酸D．果膠酶能瓦解植物的細(xì)胞壁及胞間層C

4.高中生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，在接種時(shí)不進(jìn)行嚴(yán)格無(wú)菌操作對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響最大的一項(xiàng)是()A．將少許干酵母加入到新鮮的葡萄汁中B．將毛霉菌液接種在切成小塊的鮮豆腐上C．將轉(zhuǎn)基因植物葉片接種到無(wú)菌培養(yǎng)基上D．將土壤浸出液涂布在無(wú)菌的選擇培養(yǎng)基上C

5.作為萃取胡蘿卜素的有機(jī)溶劑，哪一項(xiàng)不符合實(shí)驗(yàn)要求()A．能充分溶解色素B．與水混溶C．對(duì)人無(wú)毒D．易與產(chǎn)品分離B

6.選擇培養(yǎng)是微生物學(xué)中最強(qiáng)有力的技術(shù)手段之一。主要是指利用不同微生物間生命活動(dòng)特點(diǎn)的不同，制定環(huán)境條件，使僅適應(yīng)該條件的微生物旺盛生長(zhǎng)，從而使其在群落中的數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離到所需的特定微生物。下圖描述了采用富集方法從土壤中分離能降解對(duì)羥基苯甲酸的微生物的實(shí)驗(yàn)過(guò)程。利用選擇培養(yǎng)技術(shù)從土壤中分離能降解對(duì)羥基苯甲酸的微生物(1)本實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)基按功能分屬于____________，碳源為___________。(2)實(shí)驗(yàn)原理是：___________________________________________________。(3)①→③重復(fù)培養(yǎng)的目的是：__________________________________。(4)⑥和⑦屬于對(duì)照組的是_____組，設(shè)置對(duì)照的目的是____________________。(5)⑤→⑥采用單菌落挑取法，接種到⑥的培養(yǎng)基中，在操作過(guò)程中為防止雜菌污染應(yīng)注意的事項(xiàng)是（寫出二條以上）：____________________________________。選擇培養(yǎng)基對(duì)羥基苯甲酸利用以對(duì)羥基苯甲酸為惟一碳源的選擇培養(yǎng)基，經(jīng)選擇培養(yǎng)，選擇出能降解對(duì)羥基苯甲酸的微生物增大分解對(duì)羥基苯甲酸微生物的比例（擴(kuò)大目的菌的數(shù)量）⑥說(shuō)明通過(guò)選擇培養(yǎng)的確得到了欲分離的目標(biāo)微生物

接種環(huán)在火焰上灼燒滅菌，燒紅的接種環(huán)在空氣中冷卻；打開皿蓋時(shí)只打開一部分；試管口不離開酒精燈火焰附近；挑取菌落接種到試管中后塞好棉塞。請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：(1)無(wú)菌技術(shù)主要通過(guò)消毒和滅菌來(lái)避免雜菌的污染。常用的滅菌方法有____________滅菌、干熱滅菌和_________滅菌。(2)稀釋涂布平板法分離純化土壤中微生物的正確操作步驟是()①土壤取樣

②稱取10g土壤加入盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶中制備土壤提取液

③吸取0.1mL溶液進(jìn)行平板涂布

④依次稀釋至101、102、103、104、105、106、107稀釋度A．①②③④B．①③②④C．①②④③D．①④②③(3)利用酵母菌將葡萄汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用重鉻酸鉀來(lái)檢驗(yàn)，在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈______色。在發(fā)酵過(guò)程中，隨著酒精度的提高，發(fā)酵液逐漸呈現(xiàn)深紅色，原因是______________________．(4)從野生酵母菌群中分離純化酵母菌，最常使用的接種方法是____________和________________兩種。酵母菌適合生活在偏酸性環(huán)境，而放線菌則適合生活在偏堿性環(huán)境中，分離二者所用的培養(yǎng)基稱為____________。(5)在腐乳制作的過(guò)程中，起主要作用的微生物是____________。(6)腐乳制作過(guò)程中影響其風(fēng)味和品質(zhì)的因素有哪些()①鹽的用量

②酒的種類和用量③發(fā)酵溫度

④發(fā)酵時(shí)間

⑤香辛料的用量A．①②③④⑤B．①②③C．①②⑤D．③④灼燒高壓蒸汽C

灰綠紅葡萄皮的色素進(jìn)入發(fā)酵液平板劃線法稀釋涂布平板法選擇培養(yǎng)基毛霉A

葡萄發(fā)酵可產(chǎn)生果酒、果醋，請(qǐng)利用相關(guān)的知識(shí)回答以下問(wèn)題：（1）如下圖表示果酒和果醋制作過(guò)程中的物質(zhì)變化，④過(guò)程需要__________適宜條件。（2）將葡萄榨成汁后分別裝入相應(yīng)的發(fā)酵瓶中，在溫度等適宜的條件下進(jìn)行發(fā)酵，如下圖所示。發(fā)酵過(guò)程中，每隔一段時(shí)間均需排氣一次。據(jù)圖分析，操作錯(cuò)誤的是__________，發(fā)酵結(jié)束后，檢驗(yàn)甲發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)物的方法是_____________________。（3）如下圖是采用純化酵母菌培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖。判斷圖A所用接種方法的依據(jù)是______________，圖B效果的接種方法是______________。（4）自己在家中制作的果醋很容易腐敗，而包裝瓶上寫著105℃高溫瞬時(shí)的果醋瓶上寫著“不含任何防腐劑，最長(zhǎng)保質(zhì)期為一年”，其中的奧秘是_____________。（5）在下圖中用曲線表示正常果酒發(fā)酵階段酵母菌種群個(gè)體數(shù)量的變化情況。氧氣、30～35℃甲、丙在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈灰綠色稀釋涂布平板法形成的菌落分布較均勻平板劃線法高溫殺死了微生物如圖為分離并統(tǒng)計(jì)分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程，據(jù)此回答有關(guān)問(wèn)題：(1)要從富含纖維素的環(huán)境中分離纖維素分解菌，從高溫?zé)崛袑ふ夷蜔峋?，這說(shuō)明__________________________________________________________。(2)接種微生物最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，本實(shí)驗(yàn)宜采用______________法。(3)用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，最好選擇菌落數(shù)在___________間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。若統(tǒng)計(jì)出在一稀釋倍數(shù)為105的平板上的平均菌落數(shù)為30個(gè)，所用稀釋液的體積為0.2mL，則每克樣品中的菌落數(shù)為___________________。(4)在分離尿素分解菌所用的培養(yǎng)基中可加入___________________指示劑，根據(jù)指示劑的顏色可鑒定某種細(xì)菌能否分解尿素，若有分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)基將會(huì)呈現(xiàn)____________。根據(jù)目的菌株對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找釋稀涂布平板30～3001.5×107個(gè)酚紅紅色KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2gFeCl30.1gX1g維生素微量瓊脂15g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到100mL苯胺是致癌物質(zhì)，土壤中有分解苯胺的異養(yǎng)型細(xì)菌，下表是篩選分解苯胺的異養(yǎng)型細(xì)菌的培養(yǎng)基配方。（1）此培養(yǎng)基中的成分X除了為目的菌提供能源外，還能提

和

，該培養(yǎng)基從作用看屬于

。（2）下圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩