臨床常見(jiàn)標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)課件

關(guān)于臨床常見(jiàn)標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第1頁(yè)，共94頁(yè)主要內(nèi)容1.臨床常見(jiàn)標(biāo)本的微生物檢驗(yàn)一、血、骨髓、靜脈導(dǎo)管標(biāo)本二、痰及下呼吸道標(biāo)本三、尿液標(biāo)本四、大便標(biāo)本五、生殖道系統(tǒng)標(biāo)本六、化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本七、穿刺液標(biāo)本八、眼、耳、鼻、咽拭子標(biāo)本九、組織標(biāo)本現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第2頁(yè)，共94頁(yè)一、血、骨髓、靜脈導(dǎo)管標(biāo)本現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第3頁(yè)，共94頁(yè)（一）血培養(yǎng)檢測(cè)采血指征

臨床上疑為敗血癥、膿毒血癥或其他血液感染的患者1.發(fā)熱（≥38℃）或低溫（≤36℃）2.寒戰(zhàn)3.白細(xì)胞增多（>10×109/L，特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細(xì)胞增多）4.粒細(xì)胞減少（成熟的多核白細(xì)胞<1×109/L）5.血小板減少6．皮膚粘膜出血7．昏迷，休克、多器官衰竭8CRP升高在評(píng)估可疑新生兒敗血癥時(shí)，除發(fā)熱或低燒外，很少培養(yǎng)出細(xì)菌，應(yīng)該補(bǔ)充尿液和腦脊液培養(yǎng)。

對(duì)入院危重感染患者未進(jìn)行系統(tǒng)性抗菌藥物治療之前，應(yīng)及時(shí)采集血培養(yǎng)。骨髓炎或長(zhǎng)期使用抗菌藥物者骨髓培養(yǎng)陽(yáng)性率高于血培養(yǎng)。

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第4頁(yè)，共94頁(yè)（二）血培養(yǎng)檢測(cè)消毒程序

1.皮膚消毒程序：嚴(yán)格執(zhí)行三步法（防止皮膚寄生菌污染）

（1）用75%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30s以上；

（2）然后用1%-2%碘酊作用30秒或10%碘伏作用60秒，從穿刺點(diǎn)向外畫(huà)圈消毒，至消毒區(qū)域直徑達(dá)3cm以上；（3）最后用75%酒精脫碘，待酒精揮發(fā)干燥后采血。

新生兒及對(duì)碘過(guò)敏的患者，只能用75%酒精消毒60s，待穿刺部位酒精揮發(fā)干燥后穿刺采血。

2.培養(yǎng)瓶消毒程序：

（1）用75%酒精消毒血培養(yǎng)瓶橡皮塞，作用60秒。

（2）用無(wú)菌紗布或無(wú)菌棉簽清除橡皮塞表面剩余的酒精，然后注入血液。

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第5頁(yè)，共94頁(yè)。無(wú)論采用何種采血方法，血培養(yǎng)可接受的污染率通常是≤3%。1.嚴(yán)格無(wú)菌操作，避免被體表或腔道正常菌群污染；2.不要和血?dú)?、血沉的取血同時(shí)進(jìn)行；3.穿刺點(diǎn)消毒不使用低效消毒劑，切勿在靜滴的靜脈處取血；4.不宜從靜脈導(dǎo)管或靜脈留置口取血，若從該部位取血，應(yīng)在申請(qǐng)單上注明；最好同時(shí)靜脈取血，以求進(jìn)行比對(duì)；5.不推薦靜脈血直接入瓶，以免血量控制不好或?qū)颊卟焕?.不主張換針頭入瓶，以免增加污染的機(jī)會(huì)。7.采血前把血培養(yǎng)瓶從冰箱拿出后，待恢復(fù)至室溫后采集，采集后切勿放回冰箱?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第6頁(yè)，共94頁(yè)（三）血培養(yǎng)標(biāo)本采集和運(yùn)送1.采集時(shí)間

患者出現(xiàn)寒戰(zhàn)、體溫升高前；使用抗菌藥物前；患者已使用抗菌藥物的情況下，若出現(xiàn)明顯的發(fā)熱前期癥狀，可在寒戰(zhàn)前或寒戰(zhàn)后1h內(nèi)采血；若無(wú)明顯的寒戰(zhàn)階段，應(yīng)在第二次服抗菌藥物前采血；對(duì)于無(wú)明顯感染病灶或未找到發(fā)熱原因的發(fā)熱患者，先在不同部位采集2-3份血標(biāo)本，間隔大于或等于1h，24h-36h后再次采集2份以上；疑似沙門(mén)菌感染的患者在病程第1-2周采集靜脈血；建議：

同時(shí)采集2-3瓶（不同部位）；需氧菌、厭氧菌各一份，采集后同時(shí)送檢；在采血后的2-5天無(wú)需重復(fù)采血培養(yǎng)；現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第7頁(yè)，共94頁(yè)2.采集部位要求：從兩側(cè)上肢靜脈采血，“雙瓶雙側(cè)”采血培養(yǎng)。至少做到“雙側(cè)雙瓶”。必要時(shí)從下肢靜脈采血做第三套血培養(yǎng)。

不建議采集（1）動(dòng)脈血，因其診斷價(jià)值沒(méi)有比靜脈血更大；（2）靜脈留置導(dǎo)管，因其常伴有高污染率?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第8頁(yè)，共94頁(yè)所謂“雙瓶雙側(cè)”，是指從一個(gè)部位采血接種一套培養(yǎng)瓶，再?gòu)牧硪徊课徊裳臃N另一套培養(yǎng)瓶。（通常是雙臂）所謂“雙側(cè)雙瓶”，是指從一個(gè)部位采血接種一個(gè)需氧瓶，再?gòu)牧硪徊课徊裳臃N另一個(gè)厭氧瓶。一次靜脈采血注入到多個(gè)培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單個(gè)血培養(yǎng)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第9頁(yè)，共94頁(yè)3.采集次數(shù)要求：

對(duì)懷疑菌血癥、真菌血癥的成人患者，推薦同時(shí)采集2~3套（不同部位）血培養(yǎng)標(biāo)本。（即雙瓶雙臂同時(shí)采集血培養(yǎng)標(biāo)本。）嬰幼兒患者，推薦同時(shí)采集2次（不同部位）血培養(yǎng)標(biāo)本?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第10頁(yè)，共94頁(yè)為什么要求多次采血？（1）菌血癥有“持續(xù)性”和“暫時(shí)性”之分，多次采血可提高陽(yáng)性檢出率，減少漏檢；兩瓶或以上血培養(yǎng)以上血培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性，細(xì)菌鑒定結(jié)果相同，判斷為感染菌，作藥敏并報(bào)告臨床。 送檢兩瓶或以上血培養(yǎng)，僅1瓶結(jié)果為陽(yáng)性，且為潛在的污染菌（如表皮葡萄球菌、微球菌、氣球菌、棒狀桿菌等），一般作為污染菌。出現(xiàn)多種細(xì)菌在排除污染可能后，可考慮“復(fù)數(shù)菌”敗血癥的診斷。 僅送檢1瓶血培養(yǎng)，且培養(yǎng)出上述潛在的污染菌。則其臨床意義不能確定，需與臨床醫(yī)生討論其可能的臨床價(jià)值。（2）血液感染有原發(fā)性和繼發(fā)性之分，多次采血培養(yǎng)有助于循環(huán)外感染部位的診斷；（3）菌血癥患者多數(shù)為間歇性，病原菌周期性出現(xiàn)在血液中，在無(wú)菌時(shí)期不管臨床癥狀經(jīng)歷的嚴(yán)重程度，患者血液中的病原菌濃度水平相當(dāng)?shù)?，因此要求多次采血，?4h內(nèi)一般不超過(guò)3次?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第11頁(yè)，共94頁(yè)4.采血量要求：成年患者推薦的采血量為每套不少于10ml，每瓶不少于5ml。嬰幼兒患者推薦的采血量為每瓶不少于2ml。說(shuō)明：血標(biāo)本采集的量是影響檢出率的最重要的因素。成人血培養(yǎng)采血量在2~30ml之間，病原菌檢出率與采血量成正比例增長(zhǎng)。每增加1ml的血液，病原菌的檢出率增加3.2%。兒童患者因?yàn)檠褐胁≡鷿舛容^高，血培養(yǎng)量無(wú)需等同于成人。對(duì)血液病患者或者血容量相對(duì)較低的患者建議使用兒童瓶來(lái)減少血液的采集量增加病原菌的檢出率?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第12頁(yè)，共94頁(yè)5.血培養(yǎng)標(biāo)本的運(yùn)送要求：（1）采集后的血培養(yǎng)瓶應(yīng)在1小時(shí)之內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室。（2）血培養(yǎng)瓶在接種前和接種后均不得冷藏和冷凍?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第13頁(yè)，共94頁(yè)血液標(biāo)本的處理1.自動(dòng)化血培養(yǎng)系統(tǒng)：立即放入儀器內(nèi)，直到儀器報(bào)警提示陽(yáng)性瓶后進(jìn)行下一步操作。2.傳統(tǒng)血培養(yǎng)瓶：放入35℃溫箱孵育，每日觀察，若有生長(zhǎng)情況立即轉(zhuǎn)種，若第7天仍無(wú)菌生長(zhǎng)，需要進(jìn)行末次接種?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第14頁(yè)，共94頁(yè)雙相培養(yǎng)瓶現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第15頁(yè)，共94頁(yè)二.導(dǎo)管相關(guān)性血流感染的標(biāo)本培養(yǎng)導(dǎo)管相關(guān)性血流感染：最常見(jiàn)的為血管內(nèi)導(dǎo)管相關(guān)性血流感染（CRBSI），發(fā)生率與導(dǎo)管種類(lèi)、導(dǎo)管相關(guān)醫(yī)療操作的頻率、患者病情等因素有關(guān)。短期留置的血管內(nèi)導(dǎo)管，皮膚定值菌通過(guò)皮下隧道移植到導(dǎo)管尖端，隨后引發(fā)感染；長(zhǎng)期留置的血管內(nèi)導(dǎo)管，導(dǎo)管頭被細(xì)菌污染，導(dǎo)管腔發(fā)生細(xì)菌定植，引發(fā)感染；血行傳播的細(xì)菌可定值在血管內(nèi)導(dǎo)管中，引發(fā)新的病灶?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第16頁(yè)，共94頁(yè)皮膚凝固酶陰性葡萄球菌定植于輸液管現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第17頁(yè)，共94頁(yè)懷疑導(dǎo)管相關(guān)性血流感染的患者，可采用培養(yǎng)方法（建議同時(shí)進(jìn)行）：1.用Maki半定量培養(yǎng)法對(duì)血管內(nèi)導(dǎo)管尖端片段進(jìn)行培養(yǎng)：采集：用75%酒精消毒導(dǎo)管周?chē)つw；移動(dòng)導(dǎo)管，無(wú)菌剪刀剪取尖端末端5cm，直接置入無(wú)菌試管中；立即送檢，防止干燥，常規(guī)培養(yǎng)不超過(guò)15min，4℃保存不超過(guò)2h。接種：用無(wú)菌鑷子將5cm導(dǎo)管在血瓊脂平皿上交叉滾動(dòng)4次，然后棄之，放入5%二氧化碳35℃溫箱。處理：若24h后血瓊脂平皿生長(zhǎng)＞15個(gè)菌落，提示有潛在導(dǎo)管相關(guān)性血流感染。

不推薦使用增菌肉湯培養(yǎng)，因?yàn)樵鼍鷶U(kuò)大了污染的幾率，導(dǎo)致結(jié)果不可靠。2.采集外周靜脈血培養(yǎng)：采集至少2份血培養(yǎng)，至少1份經(jīng)外周靜脈血穿刺采血，至少1份從導(dǎo)管中心或靜脈留置口隔膜取血，兩者之間采血時(shí)間應(yīng)≤5min。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第18頁(yè)，共94頁(yè)Maki滾動(dòng)法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第19頁(yè)，共94頁(yè)二、痰及下呼吸道標(biāo)本現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第20頁(yè)，共94頁(yè)咳痰途經(jīng)口咽部不可避免地受到污染唾液中口咽部定植菌的濃度可達(dá)108～109/ml。研究顯示，國(guó)內(nèi)常規(guī)痰標(biāo)本中約半數(shù)存在唾液嚴(yán)重污染現(xiàn)象?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第21頁(yè)，共94頁(yè)（一）采集指征凡是發(fā)熱、咳嗽和咳痰，痰呈膿性、粘稠或血性，并伴有胸痛、氣急，肺部聞及濕羅音，外周白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞比例明顯增高，X線檢查提示肺部有炎性浸潤(rùn)或胸腔積液，甚至出現(xiàn)感染性休克和呼吸衰竭等患者，應(yīng)采集痰液或下呼吸道標(biāo)本。對(duì)可疑烈性呼吸道傳染?。ㄈ鏢ARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集檢驗(yàn)標(biāo)本時(shí)必須注意生物安全防護(hù)。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第22頁(yè)，共94頁(yè)（二）采集時(shí)間在抗生素應(yīng)用前采集痰標(biāo)本;標(biāo)本采集后1～2h內(nèi)必須立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室處理；咳痰標(biāo)本應(yīng)用最早且廣泛，但也是最受爭(zhēng)議的標(biāo)本;取標(biāo)本前應(yīng)摘去牙托，清潔口腔如刷牙和漱口;深咳，采集標(biāo)本過(guò)程中要有專業(yè)的醫(yī)務(wù)人員指導(dǎo);對(duì)于細(xì)菌性肺炎，痰標(biāo)本送檢每天1次，連續(xù)2～3天；不建議24h內(nèi)多次采集，除非痰液外觀性狀改變；懷疑分枝桿菌感染者，應(yīng)連續(xù)收集3天清晨痰液送檢?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第23頁(yè)，共94頁(yè)（三）采集方法自然咳痰法

以晨痰為佳。用清水反復(fù)漱口，用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入無(wú)菌容器中，盡快送檢。否則有的細(xì)菌（如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌）在外界可能死亡。不能及時(shí)送檢的標(biāo)本，室溫保存≤2h。要求采到肺深部的痰液，不要唾液。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第24頁(yè)，共94頁(yè)2.創(chuàng)傷性取痰方法（均由醫(yī)生操作）：經(jīng)支氣管鏡抽吸法（支氣管肺泡灌洗液、防污染樣本毛刷等）直接從肺部感染病灶采集高濃度的病原菌，較為安全，但不能避免咽喉部正常菌群污染。

經(jīng)人工氣道吸引分泌物（導(dǎo)管吸痰、防污染灌洗等）較為采用，但人工氣道常有致病菌或定值菌存在，建議采集前先做細(xì)胞血篩查。經(jīng)氣管穿刺吸引物采集到的下呼吸道標(biāo)本不受上呼吸道污染，常用于厭氧菌培養(yǎng)，但患者不易接受。

經(jīng)胸壁針刺吸引物偶爾用于原因不明的肺炎或貼近胸壁的病灶。

胃內(nèi)采痰法用于結(jié)核桿菌感染的嬰幼兒患者

小兒取痰法用壓舌板向后壓舌，用棉拭子伸入咽部，小兒受刺激后咳出分泌物。霧化取痰法無(wú)痰或痰量極少時(shí)可用，使用5%NaCl霧化導(dǎo)痰。哮喘患者不能用該法。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第25頁(yè)，共94頁(yè)痰標(biāo)本的運(yùn)送、保存1.標(biāo)本采集后2小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室；否則可導(dǎo)致肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌死亡；2.延遲送檢或待處理標(biāo)本應(yīng)置于4℃冰箱保存（疑似肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌的例外），但應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)處理；3.對(duì)可疑烈性呼吸道傳染?。⊿ARS、炭疽、鼠疫等）的標(biāo)本，必須全過(guò)程注意生物安全；4.經(jīng)口腔部污染的標(biāo)本均不可以做厭氧菌培養(yǎng)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第26頁(yè)，共94頁(yè)痰標(biāo)本的處理一.痰標(biāo)本的革蘭染色涂片檢測(cè)：其目的是判定標(biāo)本是否適合做細(xì)菌培養(yǎng)，并初步判定有否病原菌，病原菌的數(shù)量級(jí)類(lèi)別，有助于初步報(bào)告、培養(yǎng)基選擇和培養(yǎng)結(jié)果的判定。一般認(rèn)為來(lái)自下呼吸道的合格標(biāo)本應(yīng)該是含膿細(xì)胞和支氣管柱狀上皮細(xì)胞較多，而受唾液污染的來(lái)自于頰黏膜的扁平上皮細(xì)胞較少，其判定標(biāo)準(zhǔn)如下表：現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第27頁(yè)，共94頁(yè)A、B級(jí)的痰標(biāo)本適合進(jìn)行培養(yǎng)；C、D級(jí)的標(biāo)本須高倍鏡鏡下觀察區(qū)分，根據(jù)視野內(nèi)的白細(xì)胞或纖毛柱狀上皮細(xì)胞的數(shù)量，以及細(xì)菌的種類(lèi)及分布等結(jié)果進(jìn)行判定；E級(jí)為不合格標(biāo)本?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第28頁(yè)，共94頁(yè)二.痰標(biāo)本洗凈：目的：盡量排除上呼吸道正常菌群的污染：方法：將痰加入含有15-20ml滅菌生理鹽水的試管中，劇烈振蕩5-10s，然后用接種環(huán)將沉淀于管底的膿痰小片沾出，再放另一個(gè)無(wú)菌試管中，將同樣的方法反復(fù)2次?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第29頁(yè)，共94頁(yè)三.痰標(biāo)本的均質(zhì)化處理：目的：有助于痰核內(nèi)部細(xì)菌的暴露，以提高痰培養(yǎng)標(biāo)本的陽(yáng)性培養(yǎng)率。方法：向痰液內(nèi)加等量的用無(wú)菌的PH7.6的磷酸鹽緩沖液配制的1%的胰蛋白酶溶液，放置37℃溫箱內(nèi)消化90min即能使痰液均質(zhì)化，而對(duì)細(xì)菌培養(yǎng)無(wú)影響。此外，還可用玻璃組織研磨器或振蕩器?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第30頁(yè)，共94頁(yè)痰標(biāo)本的處理（常規(guī)）取痰液分區(qū)3區(qū)劃線接種于血平板(及麥康凱平板MAC)上，若需培養(yǎng)嗜血桿菌，再接種于加入抗生素(每毫升巧克力瓊脂內(nèi)加萬(wàn)古霉素50mg，桿菌肽30mg，氯林可霉素1mg）的嗜血桿菌選擇性巧克力平板（HA）。血平板置于35℃普通溫箱，巧克力平板置于5%CO2溫箱內(nèi)。18-24小時(shí)后觀察?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第31頁(yè)，共94頁(yè)痰培養(yǎng)的結(jié)果判斷在培養(yǎng)出細(xì)菌時(shí)都面臨判斷該細(xì)菌是致病菌或攜帶菌的問(wèn)題，而這些標(biāo)本的采集很難不污染攜帶菌?，F(xiàn)代感染的特點(diǎn)是，低免疫人群大大增多，條件致病菌、非致病菌引起的感染增多，這些特點(diǎn)給致病菌的判斷帶來(lái)了困難?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第32頁(yè)，共94頁(yè)痰標(biāo)本在平板上的菌落量化指標(biāo)未列入規(guī)范要求（參考）現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第33頁(yè)，共94頁(yè)有意義的痰培養(yǎng)結(jié)果合格痰標(biāo)本培養(yǎng)優(yōu)勢(shì)菌中度以上生長(zhǎng)(》+++)合格痰標(biāo)本少量生長(zhǎng)，但與涂片鏡檢結(jié)果一致(肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌)多次培養(yǎng)到相同細(xì)菌；現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第34頁(yè)，共94頁(yè)無(wú)意義的痰培養(yǎng)結(jié)果痰培養(yǎng)有上呼吸道正常菌群的細(xì)菌(如草綠色鏈球菌、表皮葡萄球菌、非致病奈瑟菌、類(lèi)白喉?xiàng)U菌等)痰培養(yǎng)為多種病原菌少量(<+++)生長(zhǎng)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第35頁(yè)，共94頁(yè)三、尿培養(yǎng)標(biāo)本

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第36頁(yè)，共94頁(yè)尿路感染是指尿道內(nèi)有大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥。尿路感染并非是一種單一的疾病，而是一種臨床綜合征。根據(jù)感染部位可分為上尿路感染（如腎盂腎炎）及下尿路感染（如膀胱炎），男性還可出現(xiàn)前列腺感染，不同部位同時(shí)感染也很常見(jiàn)。尿路感染是人類(lèi)最常見(jiàn)的感染之一，可發(fā)生于各個(gè)年齡段的人群，好發(fā)于女性，男:女之比為1:10?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第37頁(yè)，共94頁(yè)典型的臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、尿頻、尿急、尿痛、排尿困難和恥骨上壓痛，臨床表現(xiàn)可因患者年齡和健康狀況不同而異。新生兒尿路感染的癥狀往往是非特異性的、模湖的，可表現(xiàn)有厭食，嘔吐，倦怠，無(wú)發(fā)熱的菌血癥等；嬰兒期直到2歲，常有高熱；2歲以后的尿路感染才會(huì)有典型的臨床表現(xiàn)；老年患者的尿路感染，常缺乏明顯的癥狀，更易造成菌血癥和急性腎功能衰竭，應(yīng)引起重視?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第38頁(yè)，共94頁(yè)正常人尿液是無(wú)菌的，而尿液細(xì)菌培養(yǎng)最大的問(wèn)題是雜菌污染。正常人外尿道有大腸桿菌、葡萄球菌等存在。而這些細(xì)菌又是尿路感染中常見(jiàn)的病原菌。因此要作好尿液細(xì)菌學(xué)檢查，首先應(yīng)注意標(biāo)本收集問(wèn)題。尿液經(jīng)尿道排出時(shí)會(huì)受到尿道內(nèi)正常菌群的污染,但定量培養(yǎng)時(shí)計(jì)數(shù)不會(huì)超過(guò)103CFU/ml,泌尿系感染時(shí)定量培養(yǎng)在104～105CFU/ml。另外,由于絕大多數(shù)的泌尿系感染是由腸桿菌科細(xì)菌引起,而此類(lèi)細(xì)菌的硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性,故可參考尿檢查常規(guī)中的硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)來(lái)推斷是否有細(xì)菌感染。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第39頁(yè)，共94頁(yè)（一）尿培養(yǎng)標(biāo)本送檢指征1.有典型的尿路感染癥狀；2.有肉眼膿尿或血尿；3.尿常規(guī)檢查白細(xì)胞或亞硝酸鹽陽(yáng)性；4.有不明原因的發(fā)熱，無(wú)其他局部癥狀；5.留置導(dǎo)尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱；6.膀胱排空功能受損；7.泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前；8.有尿路感染癥狀者，前次培養(yǎng)結(jié)果陰性或抗菌治療48h后仍持續(xù)發(fā)熱。9.抗生素停藥后，感染癥狀再次出現(xiàn)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第40頁(yè)，共94頁(yè)（二）尿培養(yǎng)標(biāo)本采集方法

標(biāo)本采集應(yīng)在使用抗生素之前，避免消毒劑污染標(biāo)本。1．清潔中段尿留取清晨清潔中段尿標(biāo)本，先用肥皂水仔細(xì)清洗會(huì)陰部，再用清水沖洗尿道口周?chē)?；將前段尿排去，留取中段?0ml左右于無(wú)菌容器內(nèi)，立即加蓋送檢，2h內(nèi)接種。該方法簡(jiǎn)單、易行，是最常用的尿標(biāo)本收集方法，但是容易受到會(huì)陰部細(xì)菌污染。2．恥骨上膀胱穿刺使用無(wú)菌注射器直接從恥骨上經(jīng)皮膚消毒穿入膀胱吸取尿液，是評(píng)估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法，主要用于厭氧菌培養(yǎng)或留取標(biāo)本困難的嬰兒尿標(biāo)本的采集。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第41頁(yè)，共94頁(yè)

3．直接導(dǎo)尿按常規(guī)方法對(duì)會(huì)陰局部進(jìn)行消毒后，用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，獲取膀胱尿液，可減少尿液標(biāo)本污染，準(zhǔn)確地反映膀胱感染情況。但有可能下尿道細(xì)菌進(jìn)入膀胱，導(dǎo)致繼發(fā)感染，一般不提倡使用。4．小兒收集包無(wú)自控能力的小兒可用收集包收集尿液，這種裝置由于很難避免會(huì)陰部菌群污染產(chǎn)生假陽(yáng)性，所以只有在檢驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)才有意義。如果檢驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，應(yīng)結(jié)合臨床進(jìn)行分析，必要時(shí)可使用膀胱上穿刺或?qū)蚍羧?biāo)本進(jìn)行復(fù)檢。5．留置導(dǎo)尿管收集尿液用導(dǎo)尿管導(dǎo)取10-15ml尿液置滅菌容器內(nèi)送檢。長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管者，應(yīng)在更換新導(dǎo)尿管后留取尿標(biāo)本。留置導(dǎo)尿患者應(yīng)消毒導(dǎo)尿管外部及尿管口，采取無(wú)菌操作方法，用注射器通過(guò)導(dǎo)尿管吸取尿液。注意防止混入消毒劑，不能從尿液收集袋中采集尿液?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第42頁(yè)，共94頁(yè)（三）采集時(shí)間和標(biāo)本運(yùn)送

1.應(yīng)選擇在抗菌藥物應(yīng)用前或停用抗菌藥物5天后采集尿液。2.通常采集清晨第1次尿液送檢，確保尿液在膀胱內(nèi)停留4h以上，使細(xì)菌有足夠時(shí)間繁殖。囑患者睡前少飲水以免尿液稀釋。3.懷疑沙門(mén)菌感染時(shí)應(yīng)在發(fā)病2周左右采集尿液培養(yǎng)。4.對(duì)無(wú)癥狀的患者應(yīng)連續(xù)采集3天晨尿送檢。5.懷疑結(jié)核分枝桿菌感染時(shí)，患者應(yīng)停藥1-2天后采集晨尿或24h尿的沉渣部分10-15ml送檢。6.標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢、及時(shí)接種，室溫下保存時(shí)間不得超過(guò)2h（夏季保存時(shí)間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏保存），冷藏保存標(biāo)本必須在6h內(nèi)進(jìn)行接種，但冷藏保存的標(biāo)本不能用于淋病奈瑟菌培養(yǎng)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第43頁(yè)，共94頁(yè)（四）注意事項(xiàng)1.由于自然排尿收集的標(biāo)本很難避免會(huì)陰部及下尿道細(xì)菌污染，所以需要定量接種、合理評(píng)價(jià)才能判斷培養(yǎng)的細(xì)菌是否與尿路感染有關(guān)。尿標(biāo)本菌落計(jì)數(shù)中革蘭陰性桿菌數(shù)>105CFU/ml或革蘭陽(yáng)性球菌數(shù)>104CFU/ml時(shí)有臨床診斷意義。（不是絕對(duì)的，受多因素影響，綜合判斷）2.尿液標(biāo)本的采集和培養(yǎng)中的問(wèn)題是污染雜菌，故應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作。3.尿標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，以免污染，尿液中不得加防腐劑和消毒劑?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第44頁(yè)，共94頁(yè)4.除非是流行病學(xué)調(diào)查，長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管患者常規(guī)尿培養(yǎng)沒(méi)有臨床意義，大量病原菌?？稍谶@類(lèi)患者中檢出，導(dǎo)尿管留置時(shí)間延長(zhǎng)易導(dǎo)致與引起患者尿道感染不一致的微生物定植生長(zhǎng)；5.不可從集尿袋的下端管口留取標(biāo)本，集尿袋內(nèi)的尿液也不能用于培養(yǎng)，可能會(huì)引起污染；6.臨床常讓患者留取清潔中段尿，應(yīng)該在醫(yī)護(hù)人員監(jiān)督指導(dǎo)下讓患者正確的留取清潔中段尿；7.由于種種原因，患者常常不能正確地留取清潔中段尿，實(shí)驗(yàn)室只是針對(duì)尿液標(biāo)本培養(yǎng)的結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，或常常由于分析前尿液標(biāo)本污染了多種細(xì)菌無(wú)法正確解釋的結(jié)果，可能延誤了臨床的正確診斷和治療?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第45頁(yè)，共94頁(yè)下列因素可使尿液中細(xì)菌數(shù)量減少，判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)注意

①使用抗生素治療，細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制；②尿液稀釋，尿比重＜1.003，營(yíng)養(yǎng)成分減少，細(xì)菌生長(zhǎng)遲緩；③尿PH＜5.0或＞8.5，細(xì)菌生長(zhǎng)受阻；④尿頻時(shí)，膀胱內(nèi)細(xì)菌停留時(shí)間短，菌落數(shù)減少；⑤尿道口消毒液混入標(biāo)本中，影響細(xì)菌繁殖，菌落數(shù)減少；⑥不同種類(lèi)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度不同、營(yíng)養(yǎng)要求不同，菌落計(jì)數(shù)有所不同?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第46頁(yè)，共94頁(yè)接種方式接種于血平板；置于35℃普通溫箱；18-24小時(shí)后觀察。采用1ul或者10ul定量接種環(huán)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第47頁(yè)，共94頁(yè)尿培養(yǎng)的劃線方式1ul接種環(huán)：菌落數(shù)*1000/ml10ul接種環(huán)：菌落數(shù)*100/ml5ul接種環(huán)：菌落計(jì)數(shù)*200/ml現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第48頁(yè)，共94頁(yè)尿培養(yǎng)結(jié)果評(píng)價(jià)正常情況下從腎臟排泌至膀胱的尿液是無(wú)菌的，但膀胱中的尿液經(jīng)尿道排出體外時(shí)可受到下尿道中正常菌群的污染而出現(xiàn)細(xì)菌。因此對(duì)不同方法獲取的尿液標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果需正確評(píng)價(jià)，才能有效指導(dǎo)臨床合理治療。一般認(rèn)為，清潔中段尿標(biāo)本中單種細(xì)菌菌落數(shù)＞105CFU/ml可能為感染；＜5×104CFU/ml可能為污染，在兩者之間需要根據(jù)具體情況進(jìn)行評(píng)估（表1）?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第49頁(yè)，共94頁(yè)表1不同方法采集的尿標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果評(píng)價(jià)

標(biāo)本來(lái)源菌落數(shù)CFU/ml 結(jié)果評(píng)價(jià)清潔中段尿＜5×104無(wú)意義，僅報(bào)告菌落數(shù)及革蘭染色特征，并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長(zhǎng)純培養(yǎng)有意義，報(bào)告菌落計(jì)數(shù)和菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果；混合菌生長(zhǎng)無(wú)意義，僅做革蘭染色鏡檢，并報(bào)告鏡檢結(jié)果(5～10)×104純培養(yǎng)或混合菌生長(zhǎng)，其中某種細(xì)菌數(shù)≥105者有意義，需進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)；4種及以上細(xì)菌生長(zhǎng)無(wú)意義，報(bào)告標(biāo)本污染＞1053種以內(nèi)細(xì)菌生長(zhǎng)都有意義，對(duì)2種主要生長(zhǎng)菌需進(jìn)行菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)；4種及以上細(xì)菌生長(zhǎng)無(wú)意義，報(bào)告標(biāo)本污染＞103導(dǎo)尿都有意義，所有細(xì)菌均需做菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)任意數(shù)目恥骨上膀胱穿刺現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第50頁(yè)，共94頁(yè)陰性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告培養(yǎng)48h無(wú)菌落生長(zhǎng)，即為陰性。接種1ul尿量者，應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h，菌落計(jì)數(shù)＜103CFU/ml”；接種10ul尿量者，應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h，菌落計(jì)數(shù)＜102CFU/ml”。

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第51頁(yè)，共94頁(yè)陽(yáng)性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告應(yīng)報(bào)告細(xì)菌種屬名稱、菌落計(jì)數(shù)和藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果。如：大腸埃希菌生長(zhǎng)，菌落計(jì)數(shù)＞105CFU/ml，藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果：……現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第52頁(yè)，共94頁(yè)菌落計(jì)數(shù)＞105CFU/ml只是診斷尿路感染的一般標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)室而言，如果僅使用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行解釋，那么若標(biāo)準(zhǔn)制定過(guò)松，將會(huì)造成抗生素濫用和不必要的資源浪費(fèi)；制定過(guò)嚴(yán)，將有可能導(dǎo)致尿路感染的漏診。所以每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在與臨床醫(yī)生密切合作的基礎(chǔ)上，根據(jù)不同的情況制定不同的解釋標(biāo)準(zhǔn)。尿培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)可受多種因素的影響，在一些患者即使菌落計(jì)數(shù)較少，也有明顯的臨床意義，所以對(duì)菌落計(jì)數(shù)＜5×104CFU/ml，“規(guī)范”中認(rèn)為無(wú)意義的陽(yáng)性結(jié)果，不應(yīng)隨意丟棄，必要時(shí)應(yīng)根據(jù)患者的具體情況或與臨床醫(yī)生聯(lián)系后，決定是否需要做細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第53頁(yè)，共94頁(yè)四、大便培養(yǎng)標(biāo)本

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第54頁(yè)，共94頁(yè)最常見(jiàn)于感染性腹瀉：1.吸收不良性腹瀉；輪狀病毒、腺病毒、隱孢子蟲(chóng)、致病性大腸埃希菌……..2.分泌性腹瀉（腸毒素性腹瀉）；霍亂弧菌、產(chǎn)腸毒素大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌…….3.侵襲性腹瀉（滲出性腹瀉）；沙門(mén)菌屬、耶爾森菌、溶組織內(nèi)阿米巴、侵襲性大腸埃希菌……4.抗生素相關(guān)性腹瀉現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第55頁(yè)，共94頁(yè)（一）采集時(shí)間腹瀉患者應(yīng)在急性期，并盡可能在使用抗生素之前采集新鮮糞便；傷寒患者在發(fā)病2周以后。（二）采集方法1．自然排便采集法自然排便后，挑取有膿血或黏液部位的糞便2-3g，液狀糞便取絮狀物盛于無(wú)菌的容器內(nèi)或置于保存液或增菌液中送檢。2．直腸拭子采集法對(duì)不易獲得糞便或排便困難的患者及嬰幼兒，可采用直腸拭子法采集標(biāo)本，其方法是將拭子前端用甘油濕潤(rùn)。然后插入肛門(mén)約4～5cm（幼兒約2～3cm）處，輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)，擦取直腸表面粘液后取出，盛入無(wú)菌試管或保存液中送檢?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第56頁(yè)，共94頁(yè)（三）實(shí)驗(yàn)室檢查

腸道細(xì)菌大多為革蘭陰性桿菌，且因糞便標(biāo)本中有各種正常菌群，形態(tài)上區(qū)分困難，因此一般不做直接涂片檢查。只有當(dāng)臨床懷疑腸道菌群失調(diào)或檢查霍亂弧菌、結(jié)核分枝桿菌、疑似葡萄球菌或難辯梭菌引起的偽膜性腸炎以及真菌性腹瀉時(shí)，才做直接涂片檢查。疑似葡萄球菌引起的抗菌素相關(guān)性腸炎，可取水樣便或腸黏膜樣物涂片，革蘭染色后鏡檢，見(jiàn)革蘭陰性桿菌明顯減少，革蘭陽(yáng)性球菌大量散在或成堆（葡萄狀）排列，可提示腸道菌群失調(diào)。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第57頁(yè)，共94頁(yè)（四）注意事項(xiàng)在腹瀉發(fā)病的正確時(shí)間收集標(biāo)本，病人應(yīng)盡量在急性期（3d）內(nèi)和用藥前采集標(biāo)本，以提高檢出率。大便標(biāo)本中含有很多雜菌，糞便標(biāo)本的采集須注意防止外界臟物污染，盡量采用無(wú)菌容器。為提高陽(yáng)性檢出率，要采集新鮮標(biāo)本，立即送檢?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第58頁(yè)，共94頁(yè)標(biāo)本接種一細(xì)菌性痢疾、傷寒感染（沙門(mén)、志賀）取標(biāo)本接種于SS瓊脂平板或麥康凱平板或XLD平板，置于35℃普通溫箱，18-24小時(shí)后觀察。二偽膜性腸炎（難辨梭狀芽孢桿菌）接種于CCFA平板和厭氧血瓊脂平板，置于37℃普通溫箱，48小時(shí)后觀察。三霍亂感染標(biāo)本接種于堿性蛋白胨水，35℃培養(yǎng)6-8h后轉(zhuǎn)種于慶大霉素瓊脂平板或SS瓊脂平板，35℃普通溫箱，18-24小時(shí)后觀察。四其他感染真菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、空腸彎曲菌。。。。。。

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第59頁(yè)，共94頁(yè)接種方式四區(qū)劃線，每區(qū)均換環(huán)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第60頁(yè)，共94頁(yè)五、生殖道標(biāo)本

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第61頁(yè)，共94頁(yè)（一）送檢指征

1.男性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn)尿急、尿頻、尿痛尿道分泌物增多會(huì)陰部疼痛及陰囊疼痛性功能障礙泌尿生殖器畸形和缺損現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第62頁(yè)，共94頁(yè)2.女性泌尿系統(tǒng)表現(xiàn)

分泌物增多及性狀異常尿道口搔癢及膿性分泌物流暢下腹疼痛月經(jīng)失調(diào)陰道出血外陰搔癢外陰或陰道疼痛性功能障礙現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第63頁(yè)，共94頁(yè)（二）標(biāo)本采集生殖器官標(biāo)本包括子宮頸、陰道、前列腺；男性及女性外生殖器的分泌物及經(jīng)血等。應(yīng)根據(jù)感染的部位和可能的病原體決定用于病原學(xué)診斷的標(biāo)本種類(lèi)、采集部位和采集方法等。陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集，收集于無(wú)菌試管內(nèi)送檢。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第64頁(yè)，共94頁(yè)尿道分泌物1.女性尿道：患者排尿1小時(shí)后采集，首先拭去尿道口的滲出物；再用拭子通過(guò)陰道，靠著恥骨聯(lián)合，按摩尿道，采集分泌物；如未獲得分泌物，清洗外尿道，用滅菌紗布或棉球擦拭，用泌尿生殖道拭子插入尿道2－4cm，旋轉(zhuǎn)拭子2秒。2.男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔2－4cm，旋轉(zhuǎn)拭子，至少停留20秒，而使之容易吸收?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第65頁(yè)，共94頁(yè)陰道分泌物擦除過(guò)多的分泌物和排出液，用無(wú)菌棉拭子采取陰道口內(nèi)4厘米內(nèi)側(cè)壁或后穹窿處分泌物，如果需要涂片，需再用一個(gè)拭子。男性前列腺：用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口，沖洗尿道膀胱，從肛門(mén)用手指按摩前列腺，使前列腺液溢出，用無(wú)菌容器收集。無(wú)肉眼可見(jiàn)膿液時(shí)，可用滅菌拭子輕輕伸入前尿道內(nèi)，旋轉(zhuǎn)拭子采集標(biāo)本。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第66頁(yè)，共94頁(yè)（三）注意事項(xiàng)

1.生殖器是開(kāi)放性器官，標(biāo)本采集過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)程以減少雜菌污染。2.由于陰道正常菌群的存在而使細(xì)菌的分離鑒定受到干擾，所以在采集女性生殖道標(biāo)本時(shí)應(yīng)注意盡量減少或避免正常菌群的污染。3.疑有宮腔感染，如遇產(chǎn)婦需行剖宮產(chǎn)，待胎兒娩出后取宮腔分泌物，并同時(shí)取嬰兒耳拭子一同送檢。4.沙眼衣原體和病毒均在宿主細(xì)胞內(nèi)繁殖，取材時(shí)拭子應(yīng)在病變部位（移行上皮處稍內(nèi)）停留十幾秒鐘，并采集盡可能多的上皮細(xì)胞?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第67頁(yè)，共94頁(yè)5.生殖道感染厭氧菌也較多見(jiàn)，疑有厭氧菌感染時(shí)，標(biāo)本采集和運(yùn)送應(yīng)避免與氧氣接觸，最佳方法是床邊采樣，直接接種至厭氧裝置內(nèi)。6.淋病奈瑟菌檢查時(shí)，取材的深度一定要夠，因?yàn)榱芮蚓冒l(fā)于柱狀上皮細(xì)胞而不是復(fù)層鱗狀上皮細(xì)胞。不論男女尿道及子宮頸均需用拭子插入尿道及子宮頸3cm深轉(zhuǎn)動(dòng)并停留10-30s取樣送檢。7.淋病奈瑟菌抵抗力低，對(duì)外環(huán)境變化頗為敏感，對(duì)寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，為了保證培養(yǎng)有足夠的成功率，取材后要盡快送檢，立即接種，標(biāo)本離體時(shí)間越短越好。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第68頁(yè)，共94頁(yè)直接接種于巧克力培養(yǎng)基，置于5%CO2溫箱內(nèi)，18-24小時(shí)后觀察?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第69頁(yè)，共94頁(yè)六、化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第70頁(yè)，共94頁(yè)組織或器官的化膿性感染，其病原菌的來(lái)源可分為兩類(lèi)：①內(nèi)源性：感染源是炎癥局部周?chē)鞴僦械恼＞?，由于損傷等因素進(jìn)入無(wú)菌狀態(tài)的組織內(nèi)，發(fā)生感染。②外源性：感染源是存在于人體外部自然界的微生物，由于外傷和直接接觸通過(guò)人體表面進(jìn)入人體，造成感染。膿液的細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)于確定感染的種類(lèi)（結(jié)核性或非結(jié)核性等）、提供藥物敏感結(jié)果和指導(dǎo)臨床治療有重要的意義?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第71頁(yè)，共94頁(yè)（一）標(biāo)本采集1．開(kāi)放性感染和已潰破的化膿灶標(biāo)本采集前先用滅菌生理鹽水拭去表面滲出物，盡可能用抽吸或?qū)⑹米由钊雮?，緊貼傷口前沿取樣，從膿腫底部或膿腫壁取樣，效果最好。慢性感染，污染嚴(yán)重，很難分離到致病菌，可取感染部位下的組織，研磨成組織勻漿接種于適宜的培養(yǎng)基。2．封閉性膿腫局部消毒后用針及注射器抽吸膿腫壁，將所有物質(zhì)置于無(wú)菌試管內(nèi)送檢，疑為厭氧菌感染時(shí)立即作床邊接種或置于厭氧轉(zhuǎn)運(yùn)裝置送檢（針頭插一橡皮塞隔絕空氣）。但取樣時(shí)，可能會(huì)帶入與感染過(guò)程無(wú)關(guān)的定植細(xì)菌。3．大面積創(chuàng)傷感染：可取感染組織塊或沾有膿汁的內(nèi)層敷料送檢?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第72頁(yè)，共94頁(yè)（二）注意事項(xiàng)細(xì)菌對(duì)干燥敏感或只能采集少量標(biāo)本時(shí)，用棉拭子采集標(biāo)本后立即放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，或采標(biāo)本前先將棉拭子沾少許肉湯以保持標(biāo)本濕度。對(duì)于不能立即送檢的標(biāo)本，應(yīng)放4℃保存，培養(yǎng)淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌的標(biāo)本除外。盡可能在用藥前采集標(biāo)本。采樣前病灶局部應(yīng)避免用抗菌藥物或消毒劑。革蘭染色對(duì)標(biāo)本進(jìn)行評(píng)估。涂片中如出現(xiàn)上皮細(xì)胞提示標(biāo)本已被污染。沒(méi)有上皮細(xì)胞而有白細(xì)胞說(shuō)明標(biāo)本采集正確。有的創(chuàng)傷均可有細(xì)菌污染，但不一定發(fā)生感染，因此對(duì)分離到的細(xì)菌要根據(jù)創(chuàng)傷的情況、菌量和種數(shù)，收集標(biāo)本的處理過(guò)程、機(jī)體免疫力及抗生素的使用情況等多種因素來(lái)分析判斷?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第73頁(yè)，共94頁(yè)標(biāo)本處理直接涂片，做出初步判斷；接種于血平板，置于35℃普通溫箱；18-24小時(shí)后觀察?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第74頁(yè)，共94頁(yè)七、穿刺液標(biāo)本

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第75頁(yè)，共94頁(yè)穿刺液主要包括:

腦脊液膽汁胸水腹水心包液關(guān)節(jié)液鞘膜液在正常人體中，上述體液均是無(wú)菌的。有感染的情況下檢出的細(xì)菌，在排除污染后應(yīng)視為病原菌，及時(shí)給予正確的治療，使病人早日恢復(fù)健康?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第76頁(yè)，共94頁(yè)送檢指征腦脊液：癥狀指征：發(fā)熱等感染性全身癥狀、顱內(nèi)壓升高、腦膜刺激癥狀、神經(jīng)麻痹癥狀、腦脊液常規(guī)及生化變化；懷疑腦膜炎時(shí)。胸水：多伴有胸痛、發(fā)熱、胸腔積液；疑似胸膜炎、胸腔積水；腹水：有積液伴腹痛、嘔吐、肌緊張、腸鳴音弱或消失等。疑似原發(fā)或繼發(fā)性腹膜炎；膽汁：腹痛、黃疸、右上腹壓痛、肌緊張、膽囊區(qū)深吸氣時(shí)有觸痛；疑似膽石癥、膽囊炎、肝膽系統(tǒng)感染等。心包液：發(fā)冷、發(fā)熱、心悸、出汗、乏力及精神癥狀；心前區(qū)疼痛、心包摩擦音、心音明顯減弱、心電圖改變等。疑似心包炎；5關(guān)節(jié)液：關(guān)節(jié)腫脹，關(guān)節(jié)周?chē)∪獍l(fā)生保護(hù)性痙攣；疑似化膿性關(guān)節(jié)炎?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第77頁(yè)，共94頁(yè)（一）腦脊液1.采集時(shí)間：懷疑為腦膜炎的病人，應(yīng)立即采集腦脊液，最好在使用抗菌藥物以前采集標(biāo)本。2.采集方法：用腰穿方法采集腦脊液3～5ml，分裝到3個(gè)無(wú)菌試管中，每個(gè)試管1～2ml。第一管用于細(xì)菌培養(yǎng)!

也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶,用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第78頁(yè)，共94頁(yè)3.標(biāo)本運(yùn)送和保存：腦膜炎奈瑟菌離體后會(huì)迅速自溶,肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌也很容易死亡,因此,標(biāo)本應(yīng)立即送檢,并注意保溫、防干燥。切不可置冰箱保存,否則會(huì)影響檢出率。腦脊液標(biāo)本送檢的理想時(shí)間為15分鐘內(nèi)，半小時(shí)送檢是可接受的，如果送檢時(shí)間超過(guò)1小時(shí)，則會(huì)影響結(jié)果。如不能及時(shí)送檢，可使用血培養(yǎng)瓶（懷疑腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染時(shí)，請(qǐng)勿使用血培養(yǎng)瓶）現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第79頁(yè)，共94頁(yè)

（二）膽汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等）

1.采集時(shí)間

懷疑感染存在，應(yīng)盡早采集標(biāo)本，一般在患者使用抗菌藥物之前或停止用藥后2-3天采集。2.采集方法①無(wú)菌操作穿刺抽取標(biāo)本或外科手術(shù)采集標(biāo)本。②標(biāo)本采集量應(yīng)＞1ml;胸腔積液、腹水可抽取10ml;心包液、關(guān)節(jié)液等可抽取2～5ml。③標(biāo)本采集后注入無(wú)菌小瓶或無(wú)菌試管中送檢也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶，用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。為防止穿刺液的凝固，應(yīng)在無(wú)菌試管中預(yù)先加入滅菌肝素，再注入穿刺液?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第80頁(yè)，共94頁(yè)標(biāo)本處理腦脊液：1.若腦脊液標(biāo)本明顯紅色或渾濁，直接接種；若腦脊液清晰透明，應(yīng)以3000r/min離心10-15分鐘后，取沉淀物進(jìn)行接種。2.一般選擇血瓊脂平皿、巧克力平皿、麥康凱或中國(guó)藍(lán)平皿、沙保羅平皿、硫羥乙酸鹽肉湯。3.接種前將平板置于溫箱中預(yù)溫30min，保存平皿表面干燥。4.采用10ul定量環(huán)接種進(jìn)行4區(qū)劃線。接種后37℃、5%CO2溫箱培養(yǎng)24h，若不見(jiàn)生長(zhǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第81頁(yè)，共94頁(yè)注意：1.腦脊液標(biāo)本不推薦接種與增菌肉湯，其營(yíng)養(yǎng)條件較弱，不易苛養(yǎng)菌生長(zhǎng)：2.腦脊液標(biāo)本不能使用血培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，由于培養(yǎng)瓶中含有的聚茴香胺硫酸鈉（SPS）對(duì)腦膜炎奈瑟菌有毒性?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第82頁(yè)，共94頁(yè)胸腹水、膽汁、心包液、關(guān)節(jié)液等標(biāo)本的接種標(biāo)本處理：將標(biāo)本取10ul直接接種于血瓊脂平皿、巧克力平皿、麥康凱或中國(guó)藍(lán)平皿、沙保羅平皿上，除巧克力平皿放入37℃、5%CO2溫箱外，其余平板均放入35℃普通溫箱。備注：由于該方法檢出率低，目前國(guó)內(nèi)使用新的接種方法：無(wú)菌操作將標(biāo)本與肉湯按1∶1---1∶2比例加入到已配置的血液增菌肉湯管中，輕輕搖勻。置于35℃普通溫箱，24h后轉(zhuǎn)種到血瓊脂平皿上，再次培養(yǎng)24h觀察?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第83頁(yè)，共94頁(yè)八、眼、耳、鼻、咽拭子標(biāo)本

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第84頁(yè)，共94頁(yè)正常眼部、中耳及鼻竇內(nèi)是無(wú)菌的，而咽峽部有口腔的常在菌叢。耳、鼻、咽部的