免疫組化結(jié)果判斷及常見問題的分析

第一頁，共四十六頁。肝臟：CK8理想著色，膽管上皮細(xì)胞強(qiáng)陽性，肝細(xì)胞呈不同層次陽性。第二頁，共四十六頁。

panCK（AE1/AE3）在肝臟理想的染色，采用了熱修復(fù)。肝細(xì)胞膜、膽管強(qiáng)而清晰的著色。背景干凈。第三頁，共四十六頁。一、特異性染色的判斷1.特定的定位

細(xì)胞陽性——根據(jù)靶抗原不同而呈現(xiàn)胞膜型、胞漿型或胞核型間質(zhì)陽性——表現(xiàn)為細(xì)胞外著色，局限性或彌散性2.染色的不均一性陽性細(xì)胞的染色分布不均，片狀或點(diǎn)狀散在分布染色強(qiáng)弱不等，顏色深淺反映抗原量的多少3.排除人為造成的非特異性染色

切片的折疊、刀痕，色素沉著，組織細(xì)胞壞死。4.顆粒性顯色

DAB顯色在高倍鏡下呈顆粒狀而非均勻著色。第四頁，共四十六頁。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化照片CK10CD44v6ER第五頁，共四十六頁。第六頁，共四十六頁。第七頁，共四十六頁。第八頁，共四十六頁。第九頁，共四十六頁。第十頁，共四十六頁。合格的免疫組化染色切片

是正確判斷染色結(jié)果的基礎(chǔ)和前提

不合格的免疫組化染色切片

容易導(dǎo)致誤判第十一頁，共四十六頁。C-erbB-2優(yōu)良中差第十二頁，共四十六頁。4321ER第十三頁，共四十六頁。子宮內(nèi)膜PR染色，修復(fù)不足子宮內(nèi)膜PR染色，修復(fù)良好

PR第十四頁，共四十六頁。編號(hào)陽性片待檢片陰性對(duì)照結(jié)論12345－＋－＋＋－＋＋－＋－＋－－－操作失誤，抗體失效非特異性著色陽性片不含靶抗原待檢片不含定位抗原待檢片含定位抗原二、染色結(jié)果的判斷第十五頁，共四十六頁。PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-dayCM陽性強(qiáng)度20×10視野下，隨機(jī)選取5個(gè)視野，測(cè)100個(gè)陽性細(xì)胞的平均光密度即為此片的陽性強(qiáng)度。三、結(jié)果分析第十六頁，共四十六頁。P53陽性細(xì)胞百分比計(jì)數(shù)100個(gè)瘤細(xì)胞，其中陽性細(xì)胞的比例：＜5%（－）5%~30%（＋）30%~50%（＋＋）＞50%（＋＋＋）第十七頁，共四十六頁。PCNABarnes法A：瘤細(xì)胞顯色有無及深淺0（不著色）1（淺黃色）2（棕黃色）3（棕褐色）B：顯色細(xì)胞的比例1（1%~10%）2（11%~50%）3（51%~80%）4（＞80%）評(píng)分=A×B0分：陰性1~4分：弱陽性＞4分：強(qiáng)陽性第十八頁，共四十六頁。膠原染色陽性面積百分比40×10視野，選取5個(gè)視野，計(jì)算陽性區(qū)域面積占整個(gè)參考面積的百分率。第十九頁，共四十六頁。CD34Weidner法（MVD計(jì)數(shù)）孤立的棕黃色細(xì)胞族代表一條微血管。低倍鏡下找到組織內(nèi)密度最高區(qū)域。40×10視野下計(jì)數(shù)微血管數(shù)目。第二十頁，共四十六頁。K-rasVEGF第二十一頁，共四十六頁。附：定量分析——圖象處理系統(tǒng)

1、圖象處理：利用儀器按照不同的目的進(jìn)行圖象的修正、變換、特征提取和測(cè)量。1）“狹義”指消除圖象的模糊不清部分，校正畸變。2）“廣義”包括對(duì)圖象的結(jié)構(gòu)分析，提取特征進(jìn)行測(cè)量。

第二十二頁，共四十六頁。2、圖象處理系統(tǒng)組成圖象輸入（顯微鏡、掃描儀）圖象處理運(yùn)算（病理圖文分析軟件）圖象、數(shù)據(jù)輸出

第二十三頁，共四十六頁。

3、圖象處理系統(tǒng)功能

幾何形態(tài)學(xué)定量分析細(xì)胞核、漿的大小、面積、核漿比；細(xì)胞分布密度、個(gè)數(shù)；血管、腺體的面積、密度；間質(zhì)的面積

免疫組織化學(xué)分析按著色灰度分類，計(jì)算陽性、陰性細(xì)胞的面積含量DNA倍體分析計(jì)算正常細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞DNA含量，給出倍體參數(shù)、DNA參數(shù)分布直方圖

AgNOR分析顆粒分析：數(shù)目、大小、面積、比例

第二十四頁，共四十六頁。第二十五頁，共四十六頁。四、免疫組化異常著色及對(duì)策1.非特異性著色及其對(duì)策非特異性著色原因?qū)Σ卟僮鬟^程沖洗不充分每步?jīng)_洗3×5min內(nèi)源性過氧化物酶3％H2O2封閉內(nèi)源性生物素使用生物素阻斷試劑盒阻斷電荷吸附非免疫動(dòng)物血清封閉抗體不純采用單克隆抗體切片制片不當(dāng)改善取材和制片加試劑后切片干燥防止切片干燥第二十六頁，共四十六頁。內(nèi)源性生物素—腎小管第二十七頁，共四十六頁。內(nèi)源性生物素—淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺腺癌第二十八頁，共四十六頁。蛻膜組織部分胞核PR陽性，血管內(nèi)紅細(xì)胞過氧化物酶顯色第二十九頁，共四十六頁。嗜酸性粒細(xì)胞中細(xì)胞色素顯色第三十頁，共四十六頁。吞噬細(xì)胞內(nèi)

含鐵血黃素

第三十一頁，共四十六頁。壞死組織著色：AE1/AE3第三十二頁，共四十六頁。壞死組織著色第三十三頁，共四十六頁。交叉反應(yīng)：乳腺ki-67組織細(xì)胞胞漿著色第三十四頁，共四十六頁。黑色素瘤，細(xì)胞內(nèi)含黑色素，呈紫黑色，HE染色第三十五頁，共四十六頁。灶狀著色：機(jī)械原因著色第三十六頁，共四十六頁。CyclinD1套細(xì)胞淋巴瘤全片著色第三十七頁，共四十六頁。全片著色第三十八頁，共四十六頁。邊緣著色第三十九頁，共四十六頁?！瓣庩柲槨敝谒氖?，共四十六頁。氣泡第四十一頁，共四十六頁。非特異性著色原因?qū)Σ卟僮鬟^程沖洗不充分每步?jīng)_洗3×5min內(nèi)源性過氧化物酶3％H2O2封閉內(nèi)源性生物素使用生物素阻斷試劑盒阻斷電荷吸附非免疫動(dòng)物血清封閉抗體不純采用單克隆抗體切片制片不當(dāng)改善取材和制片加試劑后切片干燥防止切片干燥非特異性著色及其對(duì)策第四十二頁，共四十六頁。無信號(hào)片CD30第四十三頁，共四十六頁。2.染色的假陰性及其對(duì)策染色假陰性原因?qū)Σ呓M織處理不當(dāng)（固定、浸蠟）改善條件，重取材一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤確定抗體種屬無誤抗體失效不得使用過期的試劑盒顯色系統(tǒng)不相適配更換適配的顯色系統(tǒng)操作不當(dāng)，遺漏重要步驟嚴(yán)格遵守操作規(guī)程第四十四頁，共四十六頁。無色或淺色片MCL理想的CD5著色。所有的瘤細(xì)胞都著色很強(qiáng)。散在的T細(xì)胞著色比瘤細(xì)胞深。MCL的CD5染色不足(一抗?jié)舛忍?。MCL瘤細(xì)胞幾乎都沒有著色。第四十五頁